【正文】 步就成功了。學(xué)生應(yīng)學(xué)會通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。通過愈傷組織形成的植株，常常會出現(xiàn) 的變化，因而需要鑒定和篩選。11. 培養(yǎng)20－30d后，花藥開裂，長出 或釋放出胚狀體?；ㄋ幣囵B(yǎng)利用的培養(yǎng)基是 培養(yǎng)基，pH為 ，溫度為 ℃，幼苗形成之前（需要、不需要）光照。10. 剝?nèi)〉幕ㄋ幰⒖探臃N到 上。9. 消毒后的花蕾，要在 條件下除去花萼、花瓣。8. 在使用焙花青－鉻釩溶液時，需要首先將花藥用 處理20min。6. 材料的選擇：①從花藥來看，應(yīng)當(dāng)選擇（初花期、盛花期、晚花期）的花藥；②從花粉來看，應(yīng)當(dāng)選擇（四分體期、單核期、雙核期、萌發(fā)期）的花粉；③從花蕾來看，應(yīng)當(dāng)選擇（完全未開放、略微開放、完全盛開）的花蕾。3. 在正常情況下，一個小孢子母細胞可以產(chǎn)生 個精子；在一枚花藥中可以產(chǎn)生 個花粉。課題2 月季的花藥培養(yǎng)1.小孢子母細胞（2n）（ ）時期（n）單核（ ）期（n）雙核期（ ）細胞核（n）（ ）細胞核（n）（ ）細胞（n）（ ）細胞（n）（ ）個精子(n)（ ）分裂（ ）分裂單核（ ）期（n）（ ）分裂2. 育被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷 、 和 等階段。：外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細菌、真菌等的生長。設(shè)置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。？你打算設(shè)置對照實驗嗎？答：教師可以安排學(xué)生分組，做不同的材料或配方，最后分別匯報成果。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。學(xué)生可以在課后統(tǒng)計自己移栽的成活率，看看移栽是否合格。掀開塑料薄膜后24 h才能移栽。一般使用無土栽培的辦法。從實驗的第一步開始就要求學(xué)生做好實驗記錄，可以讓學(xué)生分組配制不同培養(yǎng)基，如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基，然后做不同配方的比較。統(tǒng)計更換培養(yǎng)基后愈傷組織進一步分化成根和芽的比例和時間。請學(xué)生適時統(tǒng)計污染率，分析接種操作是否符合無菌要求。最后進行露天栽培。 ，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。外植體接種與細菌接種相似之處是 。注意所有接種工作都必須在酒精燈旁進行，器械使用前后都要用火焰灼燒 。：采取的滅菌方法是 。11. 配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、 、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用 定容到 毫升。10. 配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。：在培養(yǎng)基中需要添加 和 等植物激素，其 、 、 等都影響結(jié)果：PH、 、 等環(huán)境條件。菊花組織培養(yǎng)一般選擇 作材料。4. 愈傷組織是通過 形成的，其細胞排列 ，高度 呈 狀態(tài)的 細胞。2. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實現(xiàn)優(yōu)良品種的 ；培育 作物；制作 種子；培育作物 以及細胞產(chǎn)物的 等。土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單菌落→發(fā)酵培養(yǎng)專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題1 菊花的組織培養(yǎng)1．有某種生物全套 的任何一個活細胞，都具有發(fā)育成 的能力，即每個生物細胞都具有 。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物?！皾饪s”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。P29旁欄思考題1．想一想，這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足？你打算選用哪一種方法？（兩種剛果紅染色法的比較）方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。？你認為濾紙應(yīng)該埋進土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。其他步驟基本一致。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的 進行定量測定。5．為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還學(xué)進行 的實驗。纖維素分解菌能產(chǎn)生 分解纖維素，從而使菌落周圍形成 。3．篩選纖維素分解菌可以用 法，這種方法能夠通過 直接對微生物進行篩選。2．纖維素酶是一種 酶，一般認為它至少包括三種組分，即 、 和 ，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成 。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設(shè)計。如果結(jié)果相差太遠，教師需要引導(dǎo)學(xué)生一起分析產(chǎn)生差異的原因。2．樣品的稀釋操作是否成功如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。P25 結(jié)果分析與評價1．培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。P24旁欄思考題為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？這是因為土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2 185萬，放線菌數(shù)約為477萬。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。實驗方案有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值。P22旁欄思考題，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算?！≡谝? 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 指示劑。氨會使培養(yǎng)基的堿性 ，PH 。14．對所需的微生物進行初步篩選，只是分離純化菌種的第一步，要對分離的菌種進行一步的鑒定，還需要借助 的方法。這些特征包括菌落的 、 、 和 等方面。土壤中微生物的數(shù)量不同，分離不同微生物采用的 的稀釋度不同。10．土壤有“ ”之稱，同其他生物環(huán)境相比，土壤中微生物 、 。9．不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng) 和培養(yǎng) 。滿足該條件的稱為 ，未滿足該條件的稱為 。7．設(shè)置對照實驗的主要目的是 ，提高實驗結(jié)果的可信度。這是因為 。另外， 也是測定微生物數(shù)量的常用方法。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 的平板進行計數(shù)，計數(shù)公式是 。即當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的 。4．選擇培養(yǎng)基是指 。此項技術(shù)的自動化，要求使用耐高溫的DNA聚合酶。選擇分解尿素細菌的培養(yǎng)基特點： 惟一氮源，按物理性質(zhì)歸類為 培養(yǎng)基。例如，正是由于證明了微生物不是自發(fā)產(chǎn)生的，微生物學(xué)才可能發(fā)展成為一門獨立的學(xué)科；巴斯德實驗中用到的加熱滅菌的方法導(dǎo)致了有效的滅菌方法的出現(xiàn)，而這一滅菌原理也適用于食品的保存等。例如，這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)，但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴格的無菌條件。例如，微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度，食品保存可以通過保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。P19涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。P18平板劃線操作的討論？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。（1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實驗操作者的雙手（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P16旁欄思考題：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。（2）長期保存方法： 法，放在 冷凍箱中保存。8．菌種的保藏：（1）臨時保藏：將菌種接種到試管的 ，在合適的溫度下培養(yǎng)， 長成后，放入 冰箱中保藏，以后每3—6個月，轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基。平板劃線是指 。6．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟是⑴ ，⑵ ，⑶ ，⑷ ，⑸ 。4．消毒是指 滅菌是指