【正文】 具有全能性。其次是生殖細(xì)胞，再次是體細(xì)胞 2．為什么運(yùn)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)能把植物離體器官、組織或細(xì)胞培養(yǎng)成完整植物體 ? 科學(xué)研究表明，當(dāng)植物細(xì)胞脫離了原來(lái)所在植物體的器官或組織而處于離 體狀態(tài)時(shí)，在一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。原因是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都要包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。 ： 未分化的細(xì)胞，是一類(lèi)具有自我更新和分化發(fā)育潛能的原始細(xì)胞 .可分為胚胎干細(xì)胞和組織干細(xì)胞 ： 細(xì) 胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。 即：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中補(bǔ)充各種必需因子，如激素、生長(zhǎng)因子 、結(jié)合蛋白 、貼壁和擴(kuò)展因子等。 ： 是將植物的體細(xì)胞經(jīng)過(guò)纖維素酶等處理后去掉細(xì)胞壁，獲得的原生質(zhì)體在無(wú)菌培養(yǎng)基上上長(zhǎng) 、分裂，最終長(zhǎng)成植株。 ： 是將花粉從花藥中分離出來(lái) ,接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的過(guò)程。 四、名詞解釋?zhuān)? ：生物體的細(xì)胞具有使后代細(xì)胞形成完整個(gè)體的潛能，細(xì)胞的這種特性 ：任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱(chēng)之為人工種子。 19．細(xì)胞工程的技術(shù)手段包括 細(xì)胞融合 技術(shù)、 細(xì)胞拆合 技術(shù)、 染色體導(dǎo)入 技術(shù)、 基因轉(zhuǎn)移 技術(shù)、 細(xì)胞器移植 技術(shù)、 胚胎移植 技術(shù)、 細(xì)胞與組織培養(yǎng) 技術(shù)。 。 ， 骨髓瘤細(xì)胞還應(yīng)滿足兩個(gè)獨(dú)特的性質(zhì)： ①為了避免雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體不純，骨髓瘤細(xì)胞系自身不能具有產(chǎn)生抗體的能力；②用于融合的骨髓瘤細(xì)胞體內(nèi)嘌呤核苷酸合成的補(bǔ)救途徑必須喪失，即磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶或嘧啶核苷酸激酶的活力喪失。 D 細(xì)胞培育成植株，可用 — 植物細(xì)胞培養(yǎng) — 技術(shù)，這一培養(yǎng)過(guò)程要經(jīng)過(guò) 脫分化 和 再分化 兩個(gè)階段。（ √ ） 三、填空題： A、 B 兩種細(xì)胞人工融合成 C 細(xì)胞的過(guò)程中，常用 PEG(聚乙二醇 )(或滅活的病毒 ) 作為誘導(dǎo)劑。（ ） 15．細(xì)胞融合技術(shù)是指把兩個(gè)或多個(gè)不同的細(xì)胞在融合劑的作用下，其細(xì)胞膜發(fā)生分子重排，導(dǎo)致細(xì)胞合并，染色體等遺傳物質(zhì)重組融合成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。（ ） （ √ ） 5. 組織的形成是離體植物細(xì)胞愈傷脫分化的結(jié)果（ ） 11. 細(xì)胞工程操作主要對(duì)象是細(xì)胞（ √ ） 12．細(xì)胞工程研究 的目的是改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。 （ √ ） 、馬鈴薯的塊莖 \成熟的花粉 、木質(zhì)部中的導(dǎo)管細(xì)胞都能作為植物組織培養(yǎng)的材料（ ） 。 A、親緣關(guān)系遠(yuǎn) B、生殖隔離 C、地理隔離 D、組織分化 ： ( C ) A、去掉細(xì)胞壁 ,分離出有活力的原生質(zhì)體 B、將雜種細(xì)胞培育成植株 C、讓雜種植物按照人們的需 要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性 D、尚未培育出屬間雜種植物 ： ( D ) A、振動(dòng) B、電刺激、 C、 PEG 試劑、 D、重壓 ， 又可以分化形成根、芽等器官，這一過(guò)程稱(chēng)為： ( C ) A、脫分化 B、去分化 C、再分化 D、脫分化或去分化 ，下列有可能使其表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株的是（ D ） A、細(xì)胞分裂素 B、生長(zhǎng)素 C、一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) D、以上三者均是 11 。 ，培 養(yǎng)基的調(diào)整應(yīng)（ D ）。其原因是 （ D ） A．在體外培養(yǎng)條件下 B 淋巴細(xì)胞可以無(wú)限 增殖 B．在動(dòng)物體內(nèi) B 淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的抗體 C．每一個(gè) B 淋巴細(xì)胞都參與特異性免疫反應(yīng) D．每一個(gè) B 淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 ，下列敘述不正確的是（ D ） A、可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷 B、可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療 C、可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn) D、可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn) 8. 以下不屬于生長(zhǎng)素的是 (D) A IAA B NAA C 2,4D D 6BA (D) A 細(xì)胞質(zhì) B 線粒體 C 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) D 葉綠體 (B) A 原核細(xì)胞 B 動(dòng)物細(xì)胞 C 植物細(xì)胞 D 真核細(xì)胞 (A) A T 淋巴細(xì)胞 B B 淋巴細(xì)胞 C C 淋巴細(xì)胞 D G 淋巴細(xì)胞 DNA 的過(guò)程叫 (B) A 轉(zhuǎn)導(dǎo) B 轉(zhuǎn)化 C 轉(zhuǎn)移 D 轉(zhuǎn)入 (C) A 牛 B 人 C 羊 D 雞 (A) A 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 B 植物細(xì)胞培養(yǎng)基 C 愈傷組織培養(yǎng)基 D 微生物培養(yǎng)基 (D) A 干擾素 B 單克隆抗體 C 病毒疫苗 D 人工胚乳 (B) A 對(duì)稱(chēng)分裂 B 無(wú)限增殖 C 緩慢性 D 自穩(wěn)性 ，除了 (B) A 貼壁依賴(lài)型 B 瓶底依賴(lài)型 C 兼性貼壁細(xì)胞 D 懸浮型 10 （ A ） A 產(chǎn)生新的細(xì)胞壁 B 細(xì)胞質(zhì)發(fā)生融合 C 細(xì)胞膜 發(fā)生融合 D 細(xì)胞核發(fā)生融合 ，需要下列哪項(xiàng)步驟（ A ） A 分離原生質(zhì)體 誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合 組織培養(yǎng) 得到雜種植株 B 分離原生質(zhì)體 原生質(zhì)體融合 雜種植株 C 獲取細(xì)胞 原生質(zhì)融合 組織培養(yǎng) 雜種植株 D 獲取細(xì)胞 原生質(zhì)直接融合 組織培養(yǎng) C ） A 去掉細(xì)胞壁，分離出有活力的原生質(zhì)體 B 將雜種細(xì)胞培育成植株 C 讓雜種細(xì)胞按照人們的需求表現(xiàn)出親代 的優(yōu)良性狀 D 尚未培育出屬間雜種植物 ： ( A ) A．培養(yǎng)基不同； B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行； C．動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能； D．動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。 ？ ⒈ 具有獨(dú)立復(fù)制能力 ⒉ 具備多個(gè)限制酶的識(shí)別位點(diǎn) (多克隆位點(diǎn) ) ⒊ 具有遺傳表型或篩選標(biāo)記 ⒋ 有足夠的容量以容納外源 DNA 片段 ⒌ 可導(dǎo)入受體細(xì)胞。 ？ 1）相同點(diǎn)： 都是由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)組成。有些大腸桿菌上帶有 lacZ 基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。 缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的 RNA 聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細(xì)菌中通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制，從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú)法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表 達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別，并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。 (2). 酶切鑒定 對(duì)于篩選出的具有重組子的菌株，應(yīng)經(jīng)小量培養(yǎng)后，再分別提取原載體或重組體載體（重組質(zhì)?；蛑亟M噬菌體 DNA），根據(jù)已知重組時(shí)外源基因兩端的酶切位點(diǎn)，分別用相應(yīng)的兩種內(nèi)切酶進(jìn)行酶解，經(jīng)瓊脂糖電泳后，原載體因無(wú)外源性目的基因，切開(kāi)后變成線性，電泳呈一條帶，若載體上有外源性目的基因插入，切開(kāi)后電泳出現(xiàn)兩條帶：一條為載體質(zhì)粒線性條帶 ，一條為釋放出的插入基因片斷的小分子條帶，這樣就可以看出載體中是否有插入的目的基因片斷，以及由 DNA marker 條帶對(duì)比分析可得知插入基因片段的大小 (3). 目的基因序列測(cè)定 ？ 是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。通過(guò)比較可初步判斷重組子中是否插入外源基因片段。因而能生長(zhǎng)的細(xì)菌集落，均為陽(yáng)性的重組子克隆，而無(wú)該重組子的 Leu 缺陷菌在不含亮氨酸的平板上則不能生長(zhǎng)，不能形成菌落。 7 ？ 根據(jù)插入基因的遺傳性狀進(jìn)行篩選 只有當(dāng)已知需克隆基因所編碼蛋白質(zhì)的功能 , 且該蛋白質(zhì)又為細(xì)菌的生命活動(dòng)所必需時(shí) , 即可用該方法篩選。 T4DNA 連接酶除了能夠封閉具有 3’ OH 和 5’ P 末端的雙鏈 DNA的缺口之外 ,在存在 ATP和加入高濃度酶的條件下 ,它還能夠連接具有完全配對(duì)堿基的平末端 DNA 分子 ,但其連接效率比粘性端要低的多。 （ 1） T4DNA 連接酶法 連接平末端 DNA 分子的方法有 2 種，一種是直接用 T4連接酶連接，另一種是先用末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶給平末端 DNA 分子加上同聚物尾巴之后再用 DNA 連接酶進(jìn)行連接。這樣由這種載體感染的大腸桿菌 lac指示菌（ lac 基因缺陷菌），涂布在補(bǔ)加有 IPTG和 Xgal 的培養(yǎng)基平板上，會(huì)形成藍(lán)色的噬斑，但若在 lacZ 區(qū)段上插入外源 DNA 片段，就會(huì)阻斷β 半乳糖苷酶基因 lacZ 的編碼序列，這種λ重組體感染的 lac指示菌由于不能合成β 半乳糖苷酶，只能形成無(wú)色的噬菌斑，相反未發(fā)生外源基因插入則出現(xiàn)藍(lán)色噬菌斑，以利篩選。若構(gòu)建表達(dá) DNA 重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組 , 以便定向克隆。在連接反應(yīng)中 , 具 有 5’ P，的目的基因 DNA 片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒 DNA 載體通過(guò)粘性末端發(fā)生互補(bǔ)連接 , 盡管產(chǎn)生的重組 DNA 分子于連接點(diǎn)含有兩個(gè)缺口的開(kāi)環(huán)分子 ,盡管在轉(zhuǎn)化時(shí)其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉和環(huán) , 但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后 ,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復(fù)。 ？ 目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如 EcoRI）消化酶切后 , 兩者的兩端均具有相同的粘性末端 , 稱(chēng)為單酶切點(diǎn)的粘性末端 , 又稱(chēng)全同源性粘性末端 ⑴ 高背景 載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后 , 載體分子易于自我環(huán)化 , 既不利于目的基因的重組連接 , 大大降低陽(yáng)性克隆效率 , 又可使非重組性載體造成高背景。 基因表達(dá)是以操縱子為單位，操縱子由數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。 是在生物體外，通過(guò)對(duì) DNA 分子進(jìn)行人工“剪切” 和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品 (objective gene)：又叫靶基因 (target gene)，是指根據(jù)基因工程的目的 ,設(shè)計(jì)的所需要的某些 DNA 分子片段，它含有一種或幾種遺傳信息的全套密碼 (code) 11. 基因表達(dá) 基因表達(dá) (gene expression)是指細(xì)胞在生命過(guò)程中 ,把儲(chǔ)存在 DNA順序中遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯 ,轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子 .生物體內(nèi)的各種功能蛋白質(zhì)和酶都是同相應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因編碼的 . 12. 雙功能抗體 將識(shí)別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識(shí)別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起 ,制成雙功能性抗體 ,稱(chēng)為雙特異性抗體 .如由識(shí)別腫瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞 ( CTL 細(xì)胞 , NK 細(xì) 胞 , LAK 細(xì)胞 )表面分子的抗體 ( CD3 抗體或 CD16 抗體 )制成的雙特異性抗體 ,有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用 . 五 問(wèn)答題 ，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？能，為什么？不能， 6 為什么？ 不能，因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。 : 由于不同 DNA 鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生 DNA 片段的交換和重新組合，形成新 DNA分子的過(guò)程。 ： 指一類(lèi)由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。 ： 在沒(méi)有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。 四、 名詞解釋 某些限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別的堿基順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣粘性末端的兩種酶 （ C0S）質(zhì)粒 帶有λ噬菌體的 COS 位點(diǎn)和整 個(gè) pBR322的 DNA 順序的大腸桿菌質(zhì)粒。 DNA 的四種核酸的堿基分別是 : 胸腺嘧啶 、 胞嘧啶 、 腺嘌呤 和 鳥(niǎo)嘌呤 。 利用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ① 概念： PCR 全稱(chēng)為 _____聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) __________，是一項(xiàng) 在生物 __體外 __復(fù)制 ____特定 DNA 片段 ___的核酸合成技術(shù) 5 ②原理： __ DNA 復(fù)制 ________ ③條件： _____已知基因的核苷酸序 列 ___四種脫氧核苷酸 ___一對(duì)引物 ______、 _____ DNA 聚合酶 ： ④方式：以 _指數(shù) ____方式擴(kuò)增，即 __ 2n__（ n 為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)） ⑤結(jié)果使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增 11． PCR 技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程 a、 DNA 變性（ 90℃ 95℃）：雙鏈 DNA 模板 在熱作用下， 氫鍵 斷裂，形成 ____單鏈 DNA b、復(fù)性（ 55℃ 60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與 DNA 模板結(jié)合，形成局