【正文】 ?強奸致孕案 ?拐賣丟失兒童案 ?（醫(yī)院中）嬰兒錯抱案 ?（計劃生育中）超生與否的鑒定 個體識別 ?兇殺案 ?強奸案 ?碎尸案 ?石蠟包埋組織塊調(diào)錯案 法醫(yī)物證學(xué)鑒定方法 ? 血清學(xué)方法 檢驗紅細(xì)胞血型、白細(xì)胞血型、紅細(xì)胞酶型、血清型 ? DNA檢驗技術(shù) DNA指紋技術(shù)、 PCR擴增技術(shù) 血清學(xué)方法的局限性 ?檢材需要量大，且對時限要求較高 （ HLA分型要求采血后 1624小時內(nèi)必須檢驗） ?不適用于陳舊、微量檢材 ?鑒別能力有限，不宜用于同一認(rèn)定 只能否定 DNA檢驗 DNA ? 核 DNA ? 線粒體 DNA 基因組 DNA: 核 DNA與線粒體 DNA Nucleus Mitochondria 基因組 穩(wěn)定的體系 人類基因組是一個十分穩(wěn)定的體系： ?不同的民族、群體和個體都有 46條染色體 ?有相同數(shù)目的基因 ?有基本相同的核苷酸序列 ?正是基因組結(jié)構(gòu)的這種穩(wěn)定性保證了人類作為一個物種的共同性和穩(wěn)定性。 基因組 變異的體系 ?人類基因組又是一個變異的體系。 ?這些變異可能是有害的、有益的或中性的。 除了同卵雙生子外，沒有兩個個體的基因組完全相同。 ?人基因組 DNA： 5%為基因編碼序列 ,95%為非編碼序列 ? 基因數(shù)量 :810萬 ? 不同個體間 % DNA序列完全相同 ? %DNA序列上的不同決定了個體間表型差異 ? DNA序列變異中的 90%表現(xiàn)為單核苷酸多態(tài)性（ SNP） 單倍型圖譜計劃 ? HapMap計劃：找出約 50萬個標(biāo)簽 SNPs，提供與 1000萬個 SNPs大致相同的圖譜信息。 2022年 10月正式啟動 ,歷時三年。 HapMap“ 中國卷”的具體內(nèi)容 : 構(gòu)建人 3號、 21號染色體和 8號染色體短臂的 HapMap。 法醫(yī)學(xué) DNA檢測技術(shù)的發(fā)展 ?第一代： VNTR（小衛(wèi)星）檢測 （ DNA指紋技術(shù)） ?第二代： STR （微衛(wèi)星）檢測、線粒體 DNA檢測 （ PCR技術(shù)） 第三代： SNP（單核苷酸多態(tài)性）檢測 ?第一代： VNTR（小衛(wèi)星）檢測 （ DNA指紋技術(shù)， RFLP） （ 20世紀(jì) 80年代） RFLP技術(shù) DNA指紋技術(shù)的發(fā)明者 Jeffreys,遺傳學(xué)家 ,1985年 ? DNA指紋 ? DNA紋印 DNA指紋 ?使用一個含有多拷貝數(shù)核心序列的 多基因座 DNA探針 （如 ），在 低強度條件 下（較低溫度、較高鹽濃度）同時與許多 VNTR基因座（約 1000個） 雜交 ，經(jīng)電泳顯示其中 50100個基因座的雜交結(jié)果，獲得由一系列 DNA片段譜帶組成的圖像，稱 DNA指紋。雜合子顯示 2條譜帶，純合子顯示 1條譜帶。 操 作 流 程 限制酶 操 作 流 程 限制酶 DNA指紋技術(shù)應(yīng)用的實例 ?DNA應(yīng)用于親權(quán)鑒定的第一個案例 用 DNA指紋技術(shù)進行一例移民案件的親權(quán)鑒定，使得一名 13歲的英國男孩得以回國與母親團聚。 Polymerase Chain Reaction 1985年，由 Cetus公司的 Mullis博士發(fā)明 Nobel Prize 1993 ?Dr. Kary Mullis, was awarded a Nobel Prize for his work in 1993. DNA檢測方法比較 ? RFLP ?信息量大 ?費時（ 1~2周） ?費力 ? 50 ng DNA ?DNA 不能降解 ? PCR ?快速 ?省力 ?1 ng DNA ?適用于降解 DNA ?復(fù)合擴增檢測 ?自動化 mtDNA 結(jié)構(gòu) Dloop D環(huán)區(qū) （ displacement loop) 在線粒體DNA基因組中 占 57% 長約 1100bp HV1: 29408bp HV2: 1599616401bp mt DNA測序 ? DNA抽提； ? 利用兩對 引物，分別對 HVⅠ 、 HVⅡ 進行 PCR擴增； ?PCR產(chǎn)物純化； ? 利用 HVⅠ 的 L鏈引物和 HVⅡ 的 L鏈引物，分別對 HVⅠ 、 HVⅡ的單鏈進行 PCR擴增（ dNTP帶有四色熒光標(biāo)記）； ? 乙醇沉淀 DNA； ? 在測序儀上進行毛細(xì)管電泳，判讀序列； ? 與 Anderson標(biāo)準(zhǔn)序列進行比對，找出變異點。 細(xì)胞 細(xì)胞核 核 D N A 核 DNA的片段長度多態(tài)性 ?VNTR基因座（小衛(wèi)星） 重復(fù)單位 17170bp ?STR基因座（微衛(wèi)星） 重復(fù)單位 27bp 長度相差 1個重復(fù)單位就構(gòu)成一個等位基因 串聯(lián)重復(fù)序列 ? 多個特定序列首尾相連而成 (衛(wèi)星 DNA) ?在人類基因組中占 1520% 5 6 可變串聯(lián)重復(fù)數(shù)目 4 1 2 3 4 1 2 3 串聯(lián)重復(fù)序列的 遺傳多態(tài)性 ?串聯(lián)重復(fù)序列，如小衛(wèi)星 DNA (VNTR) 和微衛(wèi)星(STR) DNA，多態(tài)性表現(xiàn)為核心單元重復(fù)次數(shù)的不同。 ?當(dāng)前， STR作為主要的遺傳學(xué)標(biāo)記物，用于個體識別和親權(quán)鑒定。 入庫對象：罪犯、嫌疑人、現(xiàn)場檢材、志愿者 ?美國：庫容量已逾 300萬人份，占人口比例 1%。 ?中國：庫容量為 100萬人份左右，占人口比例 %。 美國人口 :3億 英國人口 :6千萬 中國人口 :13億 DNA數(shù)據(jù)庫功效顯著 案例： ?Jack 1979年因強奸罪入獄， 1992年被釋放。 ?4個月后，一名婦女被強暴 ,現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)精斑。 YSTR的應(yīng)用價值 XSTR的應(yīng)用價值 常染色體與性染色體標(biāo)記的聯(lián)合應(yīng)用價值 STR檢測步驟 檢材（血樣、羊水、毛發(fā)、唾液斑、精斑等） DNA的提取 15個 STR基因座的 PCR擴增 對擴增產(chǎn)物進行電泳分析，通過Collection 收集電泳信息 通過 軟件對擴增產(chǎn)物進行等位基因的命名 15個 STR基因座的分型體系 基因座 熒光素標(biāo)記 D8S1179 6FAM D21S11 6FAM D7S820 6FAM CSF1PO 6FAM D3S1358 VIC D5S818 VIC D13S317 VIC D16S539 VIC D2S1338 VIC D19S433 NED vWA NED D12S391/TPOX NED D18S51 NED Amel PET D6S1043/TH01 PET FGA PET STR基因座檢測結(jié)果的存檔 PCR技術(shù)在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （ 檢材類型 ） 血液 血痕 肌肉 毛發(fā) 羊水 精液 精斑 混合斑 骨骼 唾液斑 牙齒 尿液 石蠟包埋組織塊 PCR技術(shù)在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （案件類型） ?刑事案件的鑒定 （兇殺案、強奸案、拐賣兒童案、碎尸案、搶劫案、盜竊案） ?民事案件的鑒定 （親權(quán)糾紛、移民案、嬰兒錯抱案、石蠟包埋組織塊調(diào)錯案、超生與否的鑒定） ?其它：骨髓移植成功與否的鑒定 檢案程序 ?檢驗委托 ? 填寫委托受理合同一份，內(nèi)容包括： 委托單位（委托人）、委托日期、送檢人、檢驗材料名稱數(shù)量、有關(guān)人員姓名、性別、年齡、案情摘要、委托要求，并由委托人和受理機構(gòu)鑒定人雙方簽名和蓋章。 樣本采集 ?受理人在采樣時必須戴手套、口罩和帽子操作。 ?樣品采集方式： ? 血樣：從被檢人指尖采集，滴注在干凈紗布上，晾干后紙袋包裝 ? 毛發(fā)：小心拔取被檢人帶毛囊的毛發(fā)，將其裝入紙袋中，在紙袋上注明被采人姓名、性別及采樣人姓名、采集日期。 ? 分泌物：用拭子提取，晾干后用紙袋包裝，在紙袋上注明被采人姓名、性別及采樣人姓名、采集日期。 受害人 絨毛膜 嫌疑人 D3S1358 16,16 16,16 16,17 VWA 17,18 16,17 16,16 FGA 20,24 23,24 19,23 D8S1179 14,14 13,14 13,16 D21S11 28,30 , 30 , D18S51 17,21 13,17 12,13 D5S818 10,10 10,11 9,11 D13S317 8,11 8, 9 9,10 D7S820 12,12 8,12 8,10 D16S539 9,12 10,12 10,11 THO1 9,9 6,9 6,8 TPOX 9,11 8,9 8,8 CSF1PO 11,12 1