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蛋白組學(xué)二維電泳ppt課件-文庫吧資料

2025-05-13 13:46本頁面
  

【正文】 ( normalization) ? 便于對不同膠上的同一蛋白質(zhì)進(jìn)行定量比較 ? 基于全部點體積之和 ? 基于某一個蛋白質(zhì)點(標(biāo)志蛋白、人為添加的參照蛋白) 凝膠匹配( matching) ? 不同凝膠上蛋白質(zhì)點進(jìn)行定量比較 ? 參考凝膠 ? 其中一張 ? 幾張合并后的平均膠 ? 種子點(人工匹配):選擇明顯對應(yīng)的點使之匹配 2D數(shù)據(jù)庫的建立 ? IPG膠條的應(yīng)用,實現(xiàn)了 2D電泳的重復(fù)性 ? 大量標(biāo)準(zhǔn) 2D電泳圖譜的建立 ? 氨基酸組成分析、肽質(zhì)量指紋圖譜建立、質(zhì)譜技術(shù)發(fā)展,鑒定了大量的蛋白質(zhì) ? 計算機(jī)和網(wǎng)絡(luò)的發(fā)展 ? 有效的管理、利用和共享這些數(shù)據(jù) 哺乳動物的 2DE數(shù)據(jù)庫 酵母的 2DE數(shù)據(jù)庫 植物的 2DE數(shù)據(jù)庫 細(xì)菌和病毒的 2DE數(shù)據(jù)庫 思考題 ? 膜蛋白提取與分離最主要的困難是什么?為什么常用到去污劑? ? 簡述二維電泳中一向 IEF和二向 SDSPAGE的基本原理。 ( 2)蛋白質(zhì)被熒光共價修飾,改變了移動性能,降低了溶解性,導(dǎo)致質(zhì)譜鑒定出現(xiàn)偏差。比如用甲基 Cy3與甲基 Cy5兩種染料分別對兩個不同蛋白樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記,并在 一塊 2DE膠 上進(jìn)行運行,由于兩種染料激發(fā)波長不同,掃描時可得到兩張有差異的圖象,因此可用于差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 ( 4)靈敏度 15ng ? 原理(鋅 咪唑染料) 咪唑存在時,自由或弱結(jié)合的鋅離子以鋅 咪唑形式沉淀下來,而大部分鋅離子因與蛋白質(zhì)結(jié)合牢固而留在膠上,從而導(dǎo)致半透明背景上的空白區(qū)域,這就是負(fù)染過程。負(fù)染色結(jié)果在凝膠表面產(chǎn)生半透明背景,而凝膠顯示黑色背景或相應(yīng)底色,蛋白質(zhì)以透明形式被檢測出來,而且蛋白質(zhì)被很好地保
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