半薄超薄切片技術(shù)ppt課件-文庫吧資料
2025-05-12 12:50本頁面
【正文】 常用固定劑 (1)四氧化鋨 (OsO4) OSMIUM TETRAOXIDE ※ 強氧化劑，與氮原子有較強的親和力，可較好的固定 脂肪、蛋白質(zhì)、磷酸脂蛋白 ； ※ 固定變性 DNA及核蛋白， 不能 固定天然 DNA、 RNA及糖原； ※ 具有 固定 和 電子染色 雙重作用，樣品圖象反差較好； ▼ 酶的鈍化劑，不適合細(xì)胞化學(xué)的固定； ▼ 與乙醇 /醛類反應(yīng)生產(chǎn)沉淀－－漂洗 ● 分子較大 ,滲透速度緩慢 ,但反應(yīng)迅速 ,均勻 固定深度 ㎜ ； ● 固定時間一般為 12小時 ,時間太長易使組織變脆 ,切片困難； ● 鋨酸固定液常用濃度： 1％－ 2％ 。 ︾ 目的是盡可能使細(xì)胞中的各種 細(xì)胞器 以及大分子結(jié)構(gòu) 保持生活狀態(tài)，牢固地固定在它們 原來 所在的 位置 上，不發(fā)生位移。 植物材料的取材可以先切成薄片，經(jīng)適當(dāng)固定后再切成小方塊繼續(xù)固定。 (5)取材部位要準(zhǔn)確 。 (4)低溫操作 ，最好在低溫 (0℃ ～ 4℃ )下進(jìn)行，降低酶的活性。半薄 /超薄切片技術(shù) 背景 ： 肉眼 光學(xué)顯微鏡 透射電鏡 分辨率 應(yīng)用范圍 可觀察頭發(fā)絲、雙面刀刀刃的厚度 可觀察 細(xì)胞的結(jié)構(gòu) (最大有效倍數(shù) :1000) 可觀察 細(xì)胞內(nèi) 的結(jié)構(gòu) ,分辨 DNA、蛋白質(zhì)等生物大分子、單個金屬原子（ 放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍） 觀察半薄切片 觀察超薄切片 半薄切片 超薄切片 ？ 一、超薄切片技術(shù)介紹 固定地 好 滲透包埋地 好 切地 好 載網(wǎng)膜做地 好 染地 好 超薄切片的基本要求 : 超薄切片主要步驟 ★ 取材 ★ 固定 ★ 漂洗、脫水 ★ 滲透、包埋 ★ 超薄切片 ★ 超薄切片染色 每一步都是關(guān)鍵 ,任何 環(huán)節(jié)的疏忽 都會導(dǎo)致制片的 失敗 1 取材 取材的基本要求 (1)動作迅速 ，取材后快速放入固定液中； (2)體積要小 ，一般 1㎜ 3， 如果來不及，例如野外取材，也可將組織修成（ 1 1 2） mm大小長條形，之后再進(jìn)行分割。 (3)減小損傷 ，切割器械鋒利，操作輕，避免牽拉、挫傷與擠壓組織。所用器具和固定液都應(yīng)預(yù)冷。 取材方法 材料放在潔凈的韌性較大的紙上 滴上預(yù)冷的固定
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