【正文】 實(shí)單純用超臨界CO,很難將貫葉連翹中的金絲桃素萃取出來(lái)，應(yīng)用乙醇做改性劑回收乙醇溶液為深綠色，可見用乙醇做改性劑只能提取出葉綠素等一些親脂性物質(zhì)，這在以后用超臨界流體提取技術(shù)直接脫除貫葉連翹粗提物中的脂性物質(zhì)，提純金絲桃素具有重要作用。在提取過(guò)程中需注意出口管路應(yīng)保持在6570℃之間，防止可能由于溫度過(guò)低造成萃取物析出而堵塞管路，超臨界流體萃取物用20ml左右乙醇接收后在水浴加熱下用CO2吹干，待色譜分析。將萃取池串聯(lián)在超臨界流體萃取系統(tǒng)中。將貫葉連翹地上植株作為提取原料，粉碎至80200目，將原料直接裝入萃取池。%提高到0. 16%，這在貫葉連翹提取中是首次做到一次提取獲得合格產(chǎn)品的，這在國(guó)內(nèi)外也屬首次。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，堿性水溶液的加入和乙醇的濃度對(duì)提取有著很大的影響。至于采用何種工藝，如何改變提取劑的配比最合適，需根據(jù)提取物中有效成分的含量進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇，既要考慮到得率，又要考慮生產(chǎn)成本。作為有效活性成分的提取劑，酮類和醇類對(duì)活性成分的提取率相差不大，水、NaOH水溶液對(duì)金絲桃素的提取率非常低。%, %還有相當(dāng)大的距離，%的金絲桃素產(chǎn)品差距還很大。在目前國(guó)際上已產(chǎn)業(yè)化的貫葉連翹提取物生產(chǎn)主要采用含水甲醇、乙醇作為提取劑，本實(shí)驗(yàn)室主要對(duì)乙醇的提取條件進(jìn)行了研究，這是因?yàn)橐环矫嬉掖蓟瘜W(xué)毒性較低，即使在產(chǎn)品中有溶劑殘留也不會(huì)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成大的損害。貫葉連翹的化學(xué)成分極其復(fù)雜，如何提取出具有高含量金絲桃素類物質(zhì)的提取物是本文所要研究的主要問題。Georgios Piperopouls等應(yīng)用梯度淋洗法，分析了貫葉連翹的甲醇一丙酮提取物，實(shí)驗(yàn)很好地分離了金絲桃素與假金絲桃素，所使用流動(dòng)相為:甲醇:乙腈(5: 4), ，檢測(cè)波長(zhǎng)為590nm[z01。TheodorKartning等用HPLC法對(duì)貫葉連翹的甲醇和丙酮提取物進(jìn)行了分析測(cè)定，76min內(nèi)測(cè)出了9種化合物。在己報(bào) 道 的文獻(xiàn)中，對(duì)貫葉連翹提取物的分析主要集中在高效液相色譜法上。雖然日前 國(guó)內(nèi)外對(duì)金絲桃素含量的分析測(cè)定報(bào)道較多，但有許多方法僅適于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析研究，分析方法復(fù)雜，可操作性差，不適于大批量樣品的分析和工業(yè)生產(chǎn)上的常規(guī)分析。建 立一 個(gè) 快速、準(zhǔn)確和穩(wěn)定的金絲桃素分析方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)的順利開展具有重要意義。該法不須經(jīng)梯度淋洗，提取物不經(jīng)純化可直接進(jìn)樣，金絲桃素的保留時(shí)間為8min左右，該法方便、快速、準(zhǔn)確性高，適于企業(yè)作常規(guī)分析。此外Giuseppe Micali et 。Schuet,Heide et ，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在定量分析上分光光度法不如HPLC法，而且HPLC法適用于進(jìn)行例行分析。 Daniel Merulo ，應(yīng)用二氯甲烷:丙酮:甲醇(::)作為展開劑，在紫外光下能觀測(cè)到金絲桃素和偽金絲桃素所發(fā)出的熒光。 TheodorKartnigel al應(yīng)用UV檢測(cè)器在254nm采用不同洗脫劑進(jìn)行梯度淋洗成功的分離了貫葉連翹提取物中9種成分。在用 H PL C 進(jìn)行分析時(shí)，流動(dòng)相一般為酸性磷酸鹽緩沖溶液，也有報(bào)道采用中性洗脫劑。由于貫 葉 連 翹 植株內(nèi)含有成千上萬(wàn)種化學(xué)成分，且每種成分含量甚微，因而開發(fā)和改進(jìn)分離、分析技術(shù)對(duì)植株內(nèi)有效成分的結(jié)構(gòu)鑒定、生物活性評(píng)價(jià)、半合成、為臨床提供樣品以及對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量控制等具有重要意義。目前在工業(yè)生產(chǎn)上金絲桃素類物質(zhì)的提取主要采用乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑，由于市場(chǎng)對(duì)其需求量逐年增加，對(duì)其提取、純化工藝的研究仍是今后研究的熱點(diǎn)之一。 Southwell,Ian A. et al等用索氏提取法系統(tǒng)研究了寬葉貫葉連翹與窄葉貫葉連翹中金絲桃素的含量，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)窄葉貫葉連翹中金絲桃素含量約是寬葉貫葉連翹含量的3倍。他們用新鮮的植株擠出的汁液加入少量的維生素C，在55℃條件下加入庚烷萃取1h，經(jīng)分析測(cè)定其有效成分含量比一般提取干植株的含量要高許多。DANIELMERUELO等將粉碎的貫葉連翹放入索氏提取器，首先用二氯甲烷提取，拋棄提取物，然后用丙酮提取，所得提取物用硅膠柱純化，純化后的產(chǎn)品再用薄層色譜法制得較為純凈的金絲桃素和假金絲桃素[49[o KarlH等系統(tǒng)的研究了貫葉連翹中金絲桃素在地上植株和地下根部以及花、葉中不同部位含量，發(fā)現(xiàn)地上植株明顯高于根部，花中金絲桃素含量為葉中的四倍。Piperopoulos等用甲醇丙酮(1: 1)溶液從貫葉連翹花中經(jīng)索氏提取至溶液無(wú)色為止，用HPLC分離、分析金絲桃素類有效成分，測(cè)得金絲桃素在干花中含量為2. 1mg/g，金絲桃素類化合物在干花中總含量為6. 3mg/g。 G enius,OtoB .研究了丙酮浸漬的提取工藝，將貫葉連翹葉用丙酮在室溫下浸泡23天，所得提取物用交聯(lián)葡聚糖柱純化可得金絲桃素的純品。Bernard,Claudeet ，他采用60%內(nèi)酮溶解提取物，用石油醚萃取除去類葉紅素，所得提取物再用水溶解振蕩除去糖類物質(zhì)進(jìn)行純化，產(chǎn)品中金絲桃素類物質(zhì)含量較高。由于金絲桃素分子量較大，且具有一定極性，它易溶于極性及中等極性的有機(jī)溶劑，在水中溶解度較差，能溶于堿性水溶液，因此對(duì)貫葉連翹的提取主要是極性或中等極性的有機(jī)溶劑。在13個(gè)男性正常人每月服用900mg和3600mg貫葉連翹提取物試驗(yàn)中，每月900mg是大多數(shù)臨床試驗(yàn)采用的安全有效劑量。雖然在體外細(xì)胞培養(yǎng)中偶爾出現(xiàn)過(guò)致誘變現(xiàn)象，但這種致誘變性最終被規(guī)因于槲皮素。毒理學(xué)研究亦表明貫葉連翹及其制劑是安全的。同時(shí)接受超聲波治療或紫外線照射(包括強(qiáng)光)，可使光敏加重，個(gè)別病人會(huì)形成皮膚水泡。高劑量時(shí)除了可引起局部皮膚紅斑即光敏反應(yīng)之外，余亦無(wú)它。貫葉連翹及其制劑在正常的劑量下，毒副作用很小。馬傳庚等研究了金絲桃甙的止痛作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，金絲桃甙有顯著的中樞鎮(zhèn)痛作用，其作用效果約等于嗎啡的1/20，并測(cè)得金絲桃甙產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用時(shí)，動(dòng)物腦內(nèi)Ca含量顯著地減少14010臨床還發(fā)現(xiàn)金絲桃甙具有降膽固醇、抗炎和鎮(zhèn)咳作用。有人還認(rèn)為，少量食入貫葉連翹制劑有益于人體健康。ouldwellW . l報(bào)道金絲桃素能有效地抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)。然而，近來(lái)另一些研究表明，金絲桃素抗病毒活性并不總是靠氧來(lái)實(shí)現(xiàn)，雖然在一些實(shí)驗(yàn)中氧起了作用。此外，國(guó)外對(duì)貫葉連翹的抗病毒研究認(rèn)為，金絲桃素與偽金絲桃素是親酷性分子，它們能與病毒細(xì)胞膜的雙層磷脂相結(jié)合，在光照射下，能產(chǎn)生游離氧原子和自由基殺死病毒。Daniel Meruelo et al，研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃素對(duì)HIV有獨(dú)特作用方式，它可使病毒粒子失活，作用機(jī)理可能是由病毒體殼RNA的交聯(lián)所致[321。 Isami Takahashi et ，金絲桃素和偽金絲桃素的抗HIV活性是通過(guò)抑制蛋白激活酶C(PKC)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，PKC是HIV感染健康細(xì)胞的媒介。貫葉連翹在抗病毒方面的應(yīng)用成為近年來(lái)研究的又一熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)金絲桃素能影響腦內(nèi)5HT,去甲腎上腺素和多巴胺，并具有單胺氧化酶抑制作用。臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，金絲桃素純品的抗抑郁功能不如貫葉連翹提取物中未經(jīng)分離的金絲桃素，臨床應(yīng)用貫葉連翹提取物與卡瓦胡椒或西伯利亞人參合用成功地治愈了焦慮癥和嚴(yán)重的緊張感。近年來(lái)在歐美等國(guó)家貫葉連翹己成為治療抑郁癥和焦慮癥的主要藥物之一，并就此進(jìn)行了廣泛的研究。就整株而言，花前揮發(fā)油總量高于花期，%，%?；ê臀闯墒斓乃饭胸炄~金絲桃素的含量分別為3%%左右，%%左右?；ㄖ械狞S酮以金絲桃試和槲皮素為主，葉中的黃酮以金絲桃甙和蘆丁為主。花同時(shí)也是黃酮類和藤黃酚衍生物的富集部位。葉和側(cè)莖中含量相近，%左右。 金絲桃素和假金絲桃素等蔡驕雙蔥酮類化合物主要集中在貫葉連翹的花中，并且以即將開放和剛剛開放的花中含量最高，一旦授粉，含量即迅速下降。主要存在與植株的花中，在早期采集的貫葉連翹花中，金絲桃素含量較高，晚期采集的花中貫葉金絲桃素的含量較高，如其采收、加工不當(dāng)則易招致?lián)p失。貫葉金絲桃素能作用于去甲腎上腺素、多巴胺和5HT，是貫葉連翹中治療抑郁癥、治愈傷口的主要成分之一，同時(shí)其還表現(xiàn)出了很強(qiáng)的抗菌活性和強(qiáng)的腸胃作用。,118biapigenin), Ⅰ3,Ⅱ8一雙芹菜素(biapigenin)、白矢車菊試元(Leucocyanidin)等等，部分分子結(jié)構(gòu)見圖5。目前，金絲桃素與假金絲桃素被廣泛應(yīng)用于治療精神抑郁癥，國(guó)際上評(píng)價(jià)貫葉連翹提取物的質(zhì)量，就是看其提取物中金絲桃素的含量多少。原金絲桃素和原假金絲桃素僅存在于新鮮植物中，光照后即分別轉(zhuǎn)化為金絲桃素和假金絲桃素。另外，大黃素蒽酮(Emodinanthrone)也規(guī)入此類。 萘駢雙蒽酮類化合物是貫葉連翹中主要的藥用成分，也是目前研究的最多和較透徹的一類化合物，此類化合物在貫葉連翹及其同種屬植物中普遍存在，但較難在其它高等植物中找到，因此可以看成是貫葉連翹及其同屬植物的特性成分。在揮發(fā)油成分中，%, %。植株中兒茶素和表兒茶素的二、三、四聚體等原花色甙元的含量有時(shí)多達(dá)植株干重的12%。 貫葉連翹成分非常復(fù)雜，除含有萘駢雙蒽酮(Naphthodianthrones) 等主要藥用成分外還含有黃酮(Flavonoids)類化合物，藤黃酚衍生物(Phloroglucinols),有機(jī)酸類、甾類、糖類、樹脂、葉綠素及微量元素等成分。年生長(zhǎng)期200天左右，5月萌芽，枝葉生長(zhǎng)集中在6. 7月，8月開花，9月果熟，它喜溫暖濕潤(rùn)氣候，亦耐干旱。貫葉連翹可用種子和根繁殖。目前在澳洲人工種植面積很大。貫葉連翹屬溫帶植物，喜溫暖濕潤(rùn)的環(huán)境和堿性土壤。其子房一室，花柱三裂，葫果長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)約5毫米，寬約1毫米，具有縱棱，表面有細(xì)蜂窩紋。其花生于莖頂端或枝端，成聚傘花序，花粵為5，長(zhǎng)圓形或披針形，邊緣有黑色腺點(diǎn)。葉較密、無(wú)柄、對(duì)生，基部近心形抱莖，好象莖從葉片間穿過(guò)，“貫葉”即為此意。貫葉連翹是屬于藤黃科金絲桃屬的一種多年生草本植物。但按文獻(xiàn)記載，趕山鞭是與貫葉連翹非常相似的同屬異種。但是，在貫葉連翹提取物的市場(chǎng)份額中，該公司可能會(huì)占據(jù)半壁河山。該公司的提取物大多為特殊品種，即使達(dá)產(chǎn)后年銷售額也只有約2億元，僅僅占目前市場(chǎng)份額的1%。20012006年植物提取物銷量情況（單位：億美元） 年度總銷售額出口額備注200120022003200420052006 (來(lái)源于海關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù))目前，全國(guó)共有不同規(guī)模的植物提取物生產(chǎn)企業(yè)近1000家，主要以保健品企業(yè)和外貿(mào)經(jīng)濟(jì)型企業(yè)為多，近80%都有外貿(mào)出口記錄。而且，由于植物提取物在制藥、化工、食品、保健等行業(yè)的廣泛應(yīng)用，無(wú)論是國(guó)內(nèi)還是國(guó)際，植物提取物市場(chǎng)將會(huì)獲得長(zhǎng)足發(fā)展。加盟中國(guó)植物提取網(wǎng)、中藥信息網(wǎng)、中國(guó)中藥資源網(wǎng)、中國(guó)中藥協(xié)會(huì)網(wǎng)、中國(guó)中藥交易市場(chǎng)網(wǎng)等網(wǎng)站，擴(kuò)大企業(yè)知名度，必要時(shí)可進(jìn)行網(wǎng)上定貨。、經(jīng)貿(mào)活動(dòng)相結(jié)合，加強(qiáng)地方特色中藥材的推介，擴(kuò)大產(chǎn)品及企業(yè)知名度。，介紹產(chǎn)品的品質(zhì)及特點(diǎn)。充分利用經(jīng)銷商已有的銷售網(wǎng)絡(luò)，建立起利益共享機(jī)制，共同拓展該項(xiàng)目產(chǎn)品銷售市場(chǎng)。招聘有銷售經(jīng)驗(yàn)和新銷售理念的專業(yè)人員組成全新的銷售隊(duì)伍，銷售業(yè)績(jī)和回款多少與個(gè)人經(jīng)濟(jì)效益掛鉤。綜上所述，該項(xiàng)目的實(shí)施，對(duì)*云陽(yáng)中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和*經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有很大的推動(dòng)作用，并且該項(xiàng)目具有較強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力。其中，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院根據(jù)*農(nóng)業(yè)和農(nóng)村工作的實(shí)際需要，抽派30名博導(dǎo)級(jí)專家在萬(wàn)州組建了“中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院三峽生態(tài)可持續(xù)發(fā)展工程技術(shù)中心”，可確保該項(xiàng)目在高技術(shù)支撐下高起點(diǎn)建設(shè)和高效益發(fā)展。該項(xiàng)目業(yè)主***，是北京大學(xué)在*資源開發(fā)與利用上的唯一項(xiàng)目，對(duì)庫(kù)區(qū)特色植物藥材資源的挖掘與開發(fā)，具有良好的品牌優(yōu)勢(shì)。云陽(yáng)由于工業(yè)不發(fā)達(dá)，工業(yè)污染相對(duì)較輕。云陽(yáng)地處*，在中藥產(chǎn)業(yè)管理、資本投入、新技術(shù)應(yīng)用和中藥產(chǎn)品可持續(xù)性發(fā)展等方面，近年來(lái)得到地方政府的重視，并隨著國(guó)家現(xiàn)代企業(yè)制度的推行和資本市場(chǎng)的不斷健全而逐步開始完善，項(xiàng)目業(yè)主采取重點(diǎn)產(chǎn)品戰(zhàn)略，不斷提高中藥產(chǎn)品質(zhì)量和銷售量，提升產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。國(guó)家也在大力推行中藥產(chǎn)業(yè)的GMP、GSP、GLP、GAP、GCP等國(guó)家規(guī)范，國(guó)家的政策支持和當(dāng)今中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展形勢(shì)為云陽(yáng)中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了良好的機(jī)遇。國(guó)家和市在*產(chǎn)業(yè)空虛化問題和移民搬遷給予了大量政策與資金支持，重點(diǎn)支持*中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，解決移民增收增效問題。云陽(yáng)是*最大的移民淹沒搬遷縣，動(dòng)遷人口16萬(wàn)多人，搬遷企業(yè)181家。國(guó)家在推行退耕還林的過(guò)程中，為了兼顧農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收益，鼓勵(lì)發(fā)展有生態(tài)效益的中藥農(nóng)業(yè)，并按政策給予28年每畝每年300斤糧食及50元種苗款的無(wú)償補(bǔ)助。這些特色中藥材資源、種植實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)等技術(shù)資源將成為云陽(yáng)中藥產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的核心支柱，擁有發(fā)展現(xiàn)代中藥農(nóng)業(yè)的資源優(yōu)勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，云陽(yáng)縣擁有中藥資源1102種，種植黃連、黨參、杜仲、佛手、厚樸、金銀花等主要中藥材品種達(dá)118個(gè)，其中厚樸、佛手、枳殼、小茴、杜仲等20多種名特中藥材產(chǎn)量均在千噸以上。其余5噸為厚樸、佛手、枳殼、小茴、杜仲等的純化物。 ：25噸。 ：500噸。由此可見，該項(xiàng)目運(yùn)用現(xiàn)代植物原料提取純化技術(shù)，根據(jù)下游產(chǎn)品生產(chǎn)相應(yīng)純度的植物原料，具有廣闊的市場(chǎng)前景。運(yùn)用超臨界流體萃取技術(shù)對(duì)貫葉連翹的初級(jí)產(chǎn)品進(jìn)行處理，與化學(xué)純化法相比不僅能大大降低生產(chǎn)的成本，而且減少了化學(xué)溶劑對(duì)產(chǎn)品的污染，簡(jiǎn)化了操作步驟，大大提高了產(chǎn)品的科技含量，增強(qiáng)了產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，對(duì)促進(jìn)民族醫(yī)藥業(yè)的發(fā)展具有重大意義。這不僅影響了出口創(chuàng)匯，而且使我國(guó)在該醫(yī)藥領(lǐng)域仍處于空白。%，還遠(yuǎn)沒有達(dá)到出口標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅美國(guó)的Manuel Colado公司1998年原材料就需求6000多噸，比其1995年需求量的500噸就增加了12倍多。隨著貫葉連翹產(chǎn)品在歐美市場(chǎng)銷售的突飛猛進(jìn)，歐美國(guó)家對(duì)貫葉連翹原材料及粗提物的需求量也猛增了十多倍，僅靠其國(guó)內(nèi)原料供應(yīng)已遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的需求。在美國(guó)和歐洲許多國(guó)家，貫葉連翹不僅作為一種藥物，而且其產(chǎn)品還用作食品添加劑，作為調(diào)味品。幾個(gè)世紀(jì)的應(yīng)用和包括7000多例的33項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)了它的安全性(僅有個(gè)別、輕度的副作用)。在美國(guó)，據(jù)1997年Gallup poll民意測(cè)驗(yàn)，美國(guó)有25%的職員患有焦慮癥和慢性抑郁癥，每年的治療花費(fèi)達(dá)600750億美元。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)貫葉連翹在治療抑郁癥、抗菌、抗HIV病毒