【正文】 紫或石碳酸復紅。 儀器 顯微鏡；二、實驗器材常用的有加熱和化學固定兩種方法。中性染料是前兩者的結合物又稱復合染料，如伊紅美藍、伊紅天青等。酸性染料的離子帶負電荷，能與帶正電荷的物質結合。methylene blue++ chloride帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色。因細菌蛋白質等電點較低，當它生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，所以通常采用堿性染料使其著色。用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。所謂簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。Ⅰ、細菌簡單染色法一、實驗原理細菌的涂片和染色是微生物學實驗中的一項基本技術。3）平板培養(yǎng)基置于恒溫箱內倒置培養(yǎng)。3. 培養(yǎng)1）將接種的細菌培養(yǎng)基放在32～37℃恒溫箱內培養(yǎng)24h后觀察。③將菌種接種到平皿上，立即蓋上平皿。（2）試管菌種接到平板培養(yǎng)基的方法①左手持平板和試管菌種，右手松動試管試管棉塞，燒接種工具。⑥重新塞上棉塞。④用接種工具取少許菌種置于另一支試管中，按一定的接種方式把菌種接種到新的培養(yǎng)基上。2．接種方法（1）試管接種方法①將菌種試管與待接種的試管培養(yǎng)基依次排列，挾于左手的拇指與食指之間，用右手的中指與食指或食指與小指拔出棉塞并挾出。（2）在欲接種的培養(yǎng)基試管或平板上貼好標簽，標上接咱的菌名、操作者、接種日期等。鑷子、酒精燈、火柴、酒精棉、試管架、漿糊、標簽紙、恒溫培養(yǎng)箱等。三、材料與儀器（一）菌種大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌、青霉菌（二）緩沖葡萄糖肉湯培養(yǎng)基試管垂直；緩沖葡萄糖肉湯半固體培養(yǎng)基試管垂直；緩沖葡萄糖肉湯固體培養(yǎng)基試管斜面；緩沖葡萄糖肉湯固體培養(yǎng)基平板；察氏培養(yǎng)基試管斜面；察氏培養(yǎng)基平板。將一種微生物移到另一種滅菌的培養(yǎng)基上稱為接種。二、實驗原理在自然界中，各種微生物是在互為依賴的關系下共同生活的。問題與思考1．干熱滅菌操作過程中應注意哪些問題，為什么？2．為什么干熱滅菌所需溫度要比濕熱滅菌高？3．高壓蒸汽滅菌時，為什么要排盡鍋內的空氣？實驗四、微生物接種技術一、實驗目的1. 掌握微生物各種接種方法。注意：當壓力不為零時，不能開蓋取物否則由于壓力突然下降，容器內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染而發(fā)生污染，甚至灼傷操作者。3．用電爐或其他方法加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣，待冷空氣排盡后，關上排氣閥讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升，當鍋內達到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。2．放回內層鍋，并裝入待滅菌物品（內裝培養(yǎng)基或小的三角瓶），不要裝得太擠，以免妨礙汽流通影響滅菌效果，三角瓶口不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋溫包口的紙而透入棉塞。4．切斷電源，冷卻至70℃時，打開箱門，取出滅菌物品（未降至70度以前，切勿打開箱門，否則溫度驟降導致玻璃器皿炸裂）。2．接通電源，打開排氣孔，使箱內濕空氣能逸出，旋動恒溫調節(jié)器，保持加熱升溫狀態(tài)，至箱內達到100℃時關閉排氣孔。培養(yǎng)基不適用。、℃.15～30min可達到徹底滅菌,滅菌的溫度及維持的時間隨滅菌物品的性質和容量等具體情況而有所改變.三、材料與儀器吸管、培養(yǎng)皿、試管、電熱干燥箱，手提試高壓蒸汽滅鍋，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、蒸餾水。因此與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160～170℃），時間長（1～2h）。在本實驗中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關的部份滅菌方法。在微生物實驗、生產和科研工作中，需要進行純培養(yǎng) 不能有任何雜菌，因此，對所用器材、培養(yǎng)基要進行嚴格滅菌，對工作場所進行消毒，以保證工作順利進行。消毒是用物理或化學的方法殺死物體上絕大部分微生物(主要是病原微生物和有害微生物)。問題與思考：1．培養(yǎng)基配制時應注意什么問題？為什么？2．分裝培養(yǎng)基時為什么要使用彈簧夾？3．培養(yǎng)基配好后，為什么要立即滅菌？實驗三 消毒和滅菌一、實驗目的了解干熱滅菌及高壓蒸汽滅菌的操作方法。7. 包扎 棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進行滅菌。3）半固體分裝 裝置以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。2）固體分裝 分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，斜面長度不超過管長的1/2（圖1）。5. 分裝 按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內或三解瓶內分裝時注意，勿使培養(yǎng)基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。3. 調PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH調至所需范圍。加熱時應注意火力，勿使培養(yǎng)基燒焦或溢出。四、實驗步驟 根據(jù)用量按比例依次稱取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時要迅速。三、材料與儀器1. 試劑 牛肉膏，蛋白胨、NaCl、瓊脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。牛肉膏蛋白培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質，可供作繁殖之用，制作固體培養(yǎng)基時須加2%瓊脂，培養(yǎng)細菌時，應用稀酸或稀堿將PH調至中性或微堿性。瓊脂是從海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。微生物最常用的凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2％左右的凝固劑的固體狀培養(yǎng)基或固體狀農副產品培養(yǎng)基。天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機物配制而成的。培養(yǎng)基的種類：根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分，可將培養(yǎng)基分為三類：合成培養(yǎng)基：由各種純化學物質按一定比例配制而成。所以培養(yǎng)基是培養(yǎng)微生物所必需的最主要材料。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質和生存空間。2. 制備牛肉膏蛋白瓊脂培養(yǎng)基。 同法逐個觀察顫藻、魚腥藻或念珠藻的示范片，分別繪出其形態(tài)圖。二、試驗內容和操作方法 嚴格按照光學顯微鏡操作方法，依低倍、高倍和油鏡的次序觀察桿狀、球狀、弧狀和絲狀的細菌示范片，用鉛筆分別繪出各種細菌的形態(tài)圖。第二節(jié) 微生物形態(tài)觀察一、儀器和材料 顯微鏡、擦鏡紙、香柏油或液體石蠟、二甲苯。使反光鏡垂直于鏡座，以防受損。降低鏡筒，將物鏡轉成“八”字形置于載物臺上。調換標本：觀察新標本片時，必須重新從第3步開始操作。如果油鏡上升至離開油面還未看清物像，則需重新調節(jié)。找出所需目標，將其移至視野中央。 圖112 轉動細調螺旋 將載玻片標本（涂面朝上）置于載物臺中央（圖19），用壓片夾固定（圖110），并將標本部位移到正中，轉動粗調螺旋（圖111），使鏡頭與標本的距離降到10mm左右。然后，調節(jié)聚光器的位置（酌予升降），直至視野內得到均勻適宜的亮度?！　　D18 顯微鏡的放置光源：良好的照明是保證顯微鏡使用效果的重要條件。 從顯微鏡箱中取出顯微鏡時，用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，直立平移（圖17），輕輕放