生物化學(xué)第二章核酸化學(xué)2性質(zhì)研究方法-文庫吧資料
2025-01-22 13:52本頁面
【正文】 遺傳性疾病已在臨床上開展。 例如診斷地中海貧血或血紅蛋白病，可以由已確診的病人白細(xì)胞中提取 DNA， 這就是診斷探針。 B代表天然 DNA； C是 B的缺失突變體；虛線框內(nèi)是已缺失的部分； D是顯示從天然 DNA鏈鼓出小泡 Ⅲ. 粗線代表探針，粗線上的 X表示放射性標(biāo)記 ? 在核酸雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種用于研究和診斷的非常有用的技術(shù)稱 探針技術(shù) (Probe)。粗細(xì)線分別代表不同 DNA。測定小泡位置和長度，可確定缺失突變發(fā)生的部位和缺失的多少。 ? 雜交可以發(fā)生于 DNA與 DNA之間，也可以發(fā)生于 RNA與 RNA之間和 DNA與 RNA之間。如核酸雜交與探針技術(shù)，聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)等。真核基因組中因含有許多不同程度的 重復(fù)序列 (repetitive sequence)， 所得到的 Cot曲線更為復(fù)雜。在標(biāo)準(zhǔn)條件下 (一般為 ， 400核苷酸長的片段 )測得的復(fù)性率達(dá) Cot值 (稱 Cot1/2)， 與核苷酸對的復(fù)雜性成正比。如多聚 (A)的復(fù)雜性為 1，重復(fù)的 (ATGC)n組成的多聚體的復(fù)雜性為4，分子長度是 105核苷酸對的非重復(fù) DNA的復(fù)雜性為 105。 ? 在核酸復(fù)性研究中，定義了一個 Cot的術(shù)語， (Co為單鏈DNA的起始濃度， t是以秒為單位的時間 )，用以表示復(fù)性速度與 DNA順序復(fù)雜性的關(guān)系。 DNA順序的復(fù)雜性： ? 簡單順序的 DNA分子，如多聚 (A)和多聚 (U)這二種單鏈序列復(fù)性時，互補(bǔ)堿基的配對較易實(shí)現(xiàn)。這說明降溫時間太短以及溫差大均不利于復(fù)性。 ? DNA的復(fù)性不僅受溫度影響，還受 DNA自身特性等其它因素的影響： 溫度和時間： 一般認(rèn)為比 Tm 低 25℃ 左右的溫度是復(fù)性的最佳條件，越遠(yuǎn)離此溫度，復(fù)性速度就越慢。熱變性 DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，此過程稱之為 退火 (annealing)。特定核酸分子的Tm值與其 G＋ C所占總堿基數(shù)的百分比成正相關(guān)，兩者的關(guān)系 Tm = ＋ (G+C)% 一定條件下 (相對較短的核酸分子 )， Tm值大小還與 核酸分子的長度 有關(guān)，核酸分子越長， Tm值越大；另外， 溶液的離子強(qiáng)度 較低時， Tm值較低，融點(diǎn)范圍也較寬，反之亦然，因此 DNA制劑不應(yīng)保存在離子強(qiáng)度過低的溶液中。通常將核酸加熱變性過程中，紫外光吸收值達(dá)到最大值的 50%時的溫度稱為核酸的解鏈溫度，由于這一現(xiàn)象和結(jié)晶的融解相類似，又稱 融解溫度 (Tm,melting temperature)。若以溫度對DNA溶液的紫外吸光率作圖，得到的典型 DNA變性曲線呈 S型如上圖所示。 DNA分子中堿基間電子的相互作用使 DNA分子具有吸收 260nm波長紫外光的特性。 （ 3）紫外吸收增強(qiáng) 。 導(dǎo)致 DNA變性的因素： 凡能破壞雙螺旋穩(wěn)定性的因素，如加熱、極端的 pH、 有機(jī)試劑甲醇、乙醇、尿素及
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