【正文】 正常 雜交 結(jié)果完全不同。 母本 父本 母本 父本 正交 ? 子代 ? 反交 子代 細(xì)胞質(zhì)遺傳： 由細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的基因決定的遺傳現(xiàn)象和遺傳規(guī)律。 轉(zhuǎn)座模型 1）給體轉(zhuǎn)座元兩側(cè)和受體靶序列兩側(cè)各一單鏈產(chǎn)生切口 2）二者相連，產(chǎn)生 X 結(jié)構(gòu) 3）轉(zhuǎn)座元復(fù)制形成共和體 4）兩個(gè)轉(zhuǎn)座元發(fā)生重組和拆分，重新產(chǎn)生各含一個(gè)拷貝轉(zhuǎn)座元的給體和受體 DNA. 第三節(jié) 真核微生物的核外遺傳物質(zhì) 生物的遺傳 DNA的分布 主要在染色體上 細(xì)胞質(zhì)內(nèi) 細(xì)胞核遺傳 細(xì)胞質(zhì)遺傳 （所以說，染色體是 DNA的主要載體） 遺傳性狀受細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)控制的遺傳現(xiàn)象，叫做細(xì)胞核遺傳（核遺傳）。 ? 解離酶識(shí)別位點(diǎn)是一個(gè)回文對(duì)稱序列 ? 5’一 TATAA一 3’ ? ． 3’AATATT5’ ? 當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中不含 Mg2+時(shí)，解離酶分子附著在 酶解后出現(xiàn)的黏端上，因而酶解得到的是兩個(gè)線 ? 狀分子 ? 5’一 TTAT AA一 3’ ? 339。 ? 這一現(xiàn)象可以這樣解釋： 含 Tn3的細(xì)菌細(xì)胞存在著基因 tnpR所編碼的阻遏蛋白， 這一阻遏蛋白同時(shí)具有解離酶功能 ，它作用于 pRR51的兩個(gè)解離位點(diǎn)， ? 通過解離酶作用之后出現(xiàn)的帶有 ampr的片段上有復(fù)制起點(diǎn)，因而能復(fù)制，但是帶有 tetr片段上沒有復(fù)制起點(diǎn)，因而消失。 五 Tn3轉(zhuǎn)座模型 ? 質(zhì)粒 pBR322上有兩個(gè)抗藥性基因：氨芐青霉素抗性基因 和四環(huán)素抗性基因， ? 在 ampr附近有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn) (ori)。 ? 使轉(zhuǎn)座功能下降的突變型都屬于轉(zhuǎn)座酶 (transposase， TnpA)基因。每一個(gè)點(diǎn)突變都由一個(gè) 8一核苷酸片段的插入所造成。它們的缺失都包括一端的反向重復(fù)序 (IR) 。 ? 然后，用一個(gè)對(duì)氨芐青霉素和卡那霉素都呈敏感狀態(tài)的菌株作為受體， 與這一 recA菌株在含有兩種抗生素并能排斥 recA細(xì)菌生長的培養(yǎng)基上進(jìn)行混合培養(yǎng)，選取抗卡那霉素的菌落， 測(cè)定其中的ApRKmR菌落數(shù) （轉(zhuǎn)座功能和 ApR要互補(bǔ)）。 ? 后兩類的功能通過下列互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)鑒定。 RSFl050經(jīng)離體誘變處理后得到了一系列缺失突變型。包括三個(gè)結(jié)合位點(diǎn) ? tnpR蛋白質(zhì)通過與 res位點(diǎn)結(jié)合而行使拆分酶功能的。 ? Tn3有 三個(gè)結(jié)構(gòu)基因 ： tnpA基因、 tnpR基因和 ampr ? tnpA基因： 編碼轉(zhuǎn)座酶（ 識(shí)別和切割給體轉(zhuǎn)座元兩側(cè)和受體靶序列兩側(cè)各一單鏈） tnpR ampr tnpA res 內(nèi)酰胺酶 ? tnpR基因 ：編碼的蛋白質(zhì)具有 拆分酶活性 （共和體拆分） ? tnpA和 tnpR基因轉(zhuǎn)錄方向相反。 Tn3具有一個(gè)氨芐青霉素抗性基因，它位于兩個(gè) IR序列的中間。由于兩端的反向重復(fù)序列的存在，一個(gè)帶有某一轉(zhuǎn)座子的質(zhì)粒 經(jīng)熱變性并復(fù)性后，在電子顯微鏡下可以看到一個(gè)莖一環(huán)結(jié)構(gòu) 三 轉(zhuǎn)座子的一般結(jié)構(gòu) 四 轉(zhuǎn)座機(jī)制 ? 各類轉(zhuǎn)座子有各自的獨(dú)特的轉(zhuǎn)座機(jī)制。接受轉(zhuǎn)座子的位置上或是一個(gè)雙鏈 ，或是一 個(gè)單鏈 。 3 切離型轉(zhuǎn)座子：在轉(zhuǎn)座過程中首先使轉(zhuǎn)座子從原來位置上切離 ，然后切離下來的轉(zhuǎn)座子 整合到所轉(zhuǎn)移到的位置上 。 3 Mu噬菌體 二 轉(zhuǎn)座子按轉(zhuǎn)座行為可以分為下列幾類 1 保守型轉(zhuǎn)座子：轉(zhuǎn)座過程中將轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)移到別的位置以后，原來位置上的轉(zhuǎn)座子便不再存在 ，所以它也稱為非復(fù)制型轉(zhuǎn)座子。 2） MuDNA左端含有與 轉(zhuǎn)座 有關(guān)的 A基因和 B基因 ，分別編碼分子量為 70kb和 33 kb的兩種蛋白。 2 復(fù)合轉(zhuǎn)座元 （ posite transposon） ?復(fù)合轉(zhuǎn)座元：除含有與自身轉(zhuǎn)座相關(guān)基因 ,還含有其他基因。 F traJ產(chǎn)物 (轉(zhuǎn)移因子 ) 松弛蛋白 （誘動(dòng)基因 mob編碼） bom（與 F質(zhì)粒的 oriT類似） 一 轉(zhuǎn)座因子類別 第二節(jié) 轉(zhuǎn)座因子 ① 除了與轉(zhuǎn)座行為有關(guān)的基因以外不帶 有任何其他基因的最簡單的轉(zhuǎn)座因子，即插入序列 (insemon sequence， IS)， ②除了與轉(zhuǎn)座有關(guān)的基因以外還帶有其他基因的轉(zhuǎn)座因子，即轉(zhuǎn)座子 (transposOn， Tn)， ③某些具有轉(zhuǎn)座功能的溫和噬菌體如大腸桿菌的 Mu噬菌體。 ☆ 松弛蛋白在單鏈切口 5＇ 端結(jié)合作為引導(dǎo)蛋白。coli為供體菌 ， 對(duì) F菌株進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn) . ★ 90％ 以上獲得 ColE1質(zhì)粒的受體菌為 F+， 5％ 以上獲得 ColE1質(zhì)粒的受體菌為 F， ★ 誘動(dòng)轉(zhuǎn)移不一定需要 F質(zhì)粒共轉(zhuǎn)移 。 ★許多 R質(zhì)粒由于 含有轉(zhuǎn)移操縱子和抗性基因 ，能在較廣的宿主范圍內(nèi)轉(zhuǎn)移。 在轉(zhuǎn)移的同時(shí)進(jìn)行復(fù)制 。 ? 限制缺陷型 (restrictionless， r)宿主可由原來不易接受質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的狀態(tài)變?yōu)槿菀捉邮苻D(zhuǎn)移的狀態(tài)。 ? 轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒多是 低拷貝的大質(zhì)粒 . ? 非轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒多是 多拷貝的小質(zhì)粒 ,大多數(shù)細(xì)菌素質(zhì)粒 . 2 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移受到限制修飾系統(tǒng)的影響 ? 轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒在同一種細(xì)菌間轉(zhuǎn)移時(shí)不為限制酶所分解，因?yàn)樗厝灰呀?jīng)被修飾，如果由一種細(xì)菌轉(zhuǎn)移到另一種細(xì)菌則常受限制。 一般含有質(zhì)粒的細(xì)胞的生長速度低于無質(zhì)粒細(xì)胞， 在相同條件下混合培養(yǎng)時(shí)，含質(zhì)粒細(xì)胞所占的比例將逐漸下降 . 八、質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移 質(zhì)粒根據(jù)其轉(zhuǎn)移性可分為轉(zhuǎn)移性和非轉(zhuǎn)移性兩大類型。 沒有 par基因的質(zhì)粒的隨機(jī)分配 無質(zhì)粒子細(xì)胞 ColE1質(zhì)粒上有 cer基因?qū)ｉT負(fù)責(zé) 多聚體的解聚 作用，能使之重新轉(zhuǎn)變?yōu)閱误w質(zhì)粒。 沒有 par基因的高拷貝質(zhì)粒ColE1依賴于 質(zhì)粒的隨機(jī)分配 來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分裂過程中的穩(wěn)定性。 Par稱分配區(qū)。 七、質(zhì)粒的穩(wěn)定性 質(zhì)粒遺傳的穩(wěn)定性： ?質(zhì)粒應(yīng)在細(xì)胞分裂前復(fù)制，然后 均等 地分配到子代細(xì)胞中，從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒遺傳的穩(wěn)定性。在 DNA聚合酶 I發(fā)生缺陷的宿主 W3110polAl)中它的行為不論從質(zhì)粒數(shù)、抗藥性和電子顯微鏡下觀察到的復(fù)制開始部位來看都和 pSCl01相同，但是在 DNA聚合酶正常的宿主細(xì)菌中這些行為則都和 ColEl相同。 ? 只有 pSCl01帶有四環(huán)素抗性基因，所以帶有這兩種質(zhì)粒的細(xì)菌的抗藥性并不因?yàn)橘|(zhì)粒的總數(shù)的增加而提高。 ? 在具有正常的 DNA聚合酶 I的細(xì)菌 (CR34polAl+和C600polAl+)中， pSCl01可進(jìn)行正常的復(fù)制，每一細(xì)胞中可產(chǎn)生相當(dāng)于每一染色體的 pSCl01質(zhì)粒 5個(gè)，它所帶有的四環(huán)素抗藥性因子使宿主細(xì)胞所呈現(xiàn)的抗藥性為 2530單位／ ml。 3一個(gè)能復(fù)制的和一個(gè)不能復(fù)制的復(fù)制子相結(jié)合后，復(fù)制由前者所控制 4 兩個(gè)都能進(jìn)行復(fù)制的復(fù)制子結(jié)合后，復(fù)制又由誰控制呢？ ? pSCl01和 ColEl是大腸桿菌的兩種質(zhì)粒。 選取個(gè)別能在 42℃ 中出現(xiàn)的菌落，發(fā)現(xiàn)這些菌落中的細(xì)菌也變成了 Hfr細(xì)菌。帶有 Flac+的這一菌株可以寫作 dnaAts／ Flac+。 1） 例 2 大腸桿菌突變型 dnaA在 DNA復(fù)制發(fā)動(dòng)方面有缺陷。 這些 Hfr細(xì)菌的 Ftslac已和染色體相結(jié)合，它的復(fù)制為染色體所帶動(dòng)而不受它自己的控制 。 這些紅色菌落中的細(xì)菌已經(jīng)變?yōu)?Hfr。其中一種是 F因子突變的結(jié)果，這種細(xì)菌可以寫作 lac／ Ftslac。 由此可見 F因子的復(fù)制受染色體和因子本身的雙重控制。否則反之。 這一發(fā)酵特性如果是溫度敏感的，就說明溫度敏感這一特性屬 Flac質(zhì)粒本身 。 如果是溫度敏感的，就說明溫度敏感這一特性不屬于 Flac本身而屬于宿主染色體 ， 如果是不敏感的，則說明在這一溫度敏感細(xì)菌中這一特性可能屬于 Flac本身。 2）用吖啶橙處理溫度敏感的 lac+／ Flac+細(xì)菌，使它成為失去 Flac+的乳糖不發(fā)酵細(xì)菌 lac。 ? 另一類在 42℃ 中呈白色，再把培養(yǎng)皿放到 30℃ 中后菌落并不轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色 ， 這一類細(xì)菌中 Flac的復(fù)制呈溫度敏感突變狀態(tài)。 這些菌落有兩類。 ? 把經(jīng)誘變劑處理的 lac／ Flac+細(xì)菌涂在培養(yǎng)基表面；待生長出菌落后影印到兩個(gè)含乳糖的 EMB培養(yǎng)皿上，把一個(gè)放在30℃ 中培養(yǎng)；把另一個(gè)放在 42℃ 中培養(yǎng)。 ? 例如在含有氯霉素的培養(yǎng)液中的大腸桿菌停止了分裂，同時(shí)也停止了染色體 DNA的復(fù)制，可是 ColEl質(zhì)?？沙掷m(xù)復(fù)制 10～ 15h，直到每一個(gè)細(xì)胞中含有 1000～ 3000個(gè)質(zhì)粒。 ? 松弛型復(fù)制質(zhì)粒：質(zhì)粒復(fù)制不受到細(xì)胞核嚴(yán)格控制，復(fù)制與染色體不同步，質(zhì)粒分子量較小但拷貝數(shù)較多。 六 、質(zhì)粒的復(fù)制 質(zhì)粒的復(fù)制類型 ? 嚴(yán)緊型復(fù)制質(zhì)粒：質(zhì)粒復(fù)制受到細(xì)胞核嚴(yán)格控制，復(fù)制與染色體同步，質(zhì)粒分子量較大但拷貝數(shù)較少。 ▲ 相容性： 表現(xiàn)為不同質(zhì)粒在同一宿主細(xì)胞內(nèi)的共存性 ， 能在同一細(xì)胞內(nèi)共存的質(zhì)粒應(yīng)屬于不同的 不親和群 。 質(zhì)粒的相容和不相容性 ▲ 不親和群 :特性和來源 相近的質(zhì)粒通常屬于同一個(gè)不親和群 。 質(zhì)粒不親和性的原因 ? 質(zhì)粒不親和性主要是由于它們?cè)?復(fù)制功能之間的相互干擾造成的 。 ?在細(xì)胞的增殖過程中，其中必有一種會(huì)被逐漸地排斥（稀釋）掉。 ? fi+類型的 R因子在抑制 F因子的同時(shí)也抑制它自己，一般認(rèn)為這就是所謂低頻轉(zhuǎn)移的原因。所以把對(duì) F因子沒有抑制作用的質(zhì)粒稱為 fi。所以把對(duì) F因子沒有抑制作用的質(zhì)粒稱為 fi。屬于 fi+類型的 R因子當(dāng)和 F因子同處于一個(gè)細(xì)胞中時(shí)， F因子的許多表型效應(yīng)會(huì)遭到抑制，包括細(xì)胞接合能力，接受雄性專一噬菌體感染的能力等。 革蘭氏陽性細(xì)菌金黃色葡萄球菌 (Staphlococcusaureus)的質(zhì)粒 pUB110則可以轉(zhuǎn)移到枯草芽孢桿菌中去。例如在假單胞菌屬中有兩類質(zhì)粒 ? P1一類的質(zhì)粒能在假單胞菌屬中進(jìn)行種間轉(zhuǎn)移， 也能轉(zhuǎn)移到大腸桿菌中。 ColEl是屬于非轉(zhuǎn)移性的， ColV2和 ColIb屬于轉(zhuǎn)移性。原來約有 26個(gè)質(zhì)粒 ★即原來細(xì)胞中含有為 2n1個(gè)質(zhì)粒 .