【正文】 geting） ? 細(xì)胞內(nèi)基因同源重組的發(fā)生率很低 。 目 錄 ? 定向整合的條件 :轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列 。 目的： 將缺陷基因的異常序列進(jìn)行橋正。 廣義基因治療： ①外源正?；?qū)氩∽兗?xì)胞，產(chǎn)生正常基因的表達(dá)產(chǎn)物以補(bǔ)充缺失的或失去正常功能的蛋白質(zhì)； ②采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)抑制細(xì)胞內(nèi)過度表達(dá)的基因； ③將特定的基因?qū)敕遣∽兗?xì)胞，在體內(nèi)表達(dá)特定產(chǎn)物； ④向功能異常的細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞）中導(dǎo)入該細(xì)胞中本來不存在的基因（如自殺基因），利用這些基因的表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的。 基因治療的概念及策略 Concept and Strategy of Gene Therapy 目 錄 ? 基因治療： 指將目的基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)（病毒載體介導(dǎo)或者非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)）導(dǎo)入靶細(xì)胞內(nèi)，目的基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)疾病起治療作用。 一、 DNA指紋與多態(tài)性遺傳標(biāo)記 目 錄 目 錄人類 DNA指紋圖 目 錄 目 錄 二、 DNA指紋與法醫(yī)學(xué)診斷 ? 個(gè)體識(shí)別和親子鑒定： DNA指紋技術(shù)是從基因水平檢測(cè) DNA的高度多態(tài)性 ， 個(gè)體識(shí)別率高 。 ? 重復(fù)單位 6～ 25 bp長(zhǎng)，稱為小衛(wèi)星 DNA。 2. ras原癌基因突變常用的檢測(cè)方法 目 錄 目 錄 3．抑癌基因 p53的檢測(cè) ? p53的基因診斷方法有 （ 1） PCRSSCP分析技術(shù) （ 2） DNA序列分析 （ 3） PCRRFLP分析 基因診斷在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 Application of Gene Diagnosis in Forensic Medicine 目 錄 目 錄 目 錄 ? 重復(fù)序列以各自核心序列（重復(fù)單元）首尾相連多次重復(fù)，稱為串聯(lián)重復(fù)序列，其重復(fù)次數(shù)在人群中存在變異，形成多態(tài)性。 目 錄 目 錄 PCR 及 PCRSSCP分析： 擴(kuò)增 ras 基因第12位密碼子點(diǎn)突變部位 ， 再用 SSCP技術(shù)進(jìn)行分析 ， 或者直接測(cè)序確定患者 ras原癌基因的點(diǎn)突變 。 胰腺癌 、 結(jié)腸癌 、 肺癌 以 Kras突變?yōu)橹?， 如第 12位密碼子突變 ， 由編碼甘氨酸的 GGT突變?yōu)?TGT、GTT或 GAT， 少數(shù)突變?yōu)?GCT。 目 錄 目 錄 三、寄生蟲及衣原體感染 ? 瘧原蟲 ? 卡氏肺孢子蟲 ? 衣原體感染 診斷方法：核酸雜交和 PCR技術(shù) 目 錄 目 錄 腫瘤的基因診斷 Gene Diagnosis of Malignant Tumors 目 錄 目 錄 一、原癌基因與抑癌基因的檢測(cè) 二、常見腫瘤的基因診斷 乳腺癌 結(jié)腸癌 目 錄 目 錄 一、原癌基因與抑癌基因的檢測(cè) 1．原癌基因的檢測(cè) ras 基因家族 由 Hras、 Kras和 Nras組成 。 目 錄 目 錄 目 錄 二、細(xì)菌引起的疾病 ? 結(jié)核分枝桿菌 先設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物 ， 用 PCR技術(shù)擴(kuò)增出一 383 bp序列 ， 再用探針雜交 ， 靈敏度可達(dá)到 100個(gè)細(xì)菌水平 。 ? 乙型肝炎病毒（ HBV） 設(shè)計(jì)保守區(qū)序列引物 ， 擴(kuò)增各型 HBV DNA片段；設(shè)計(jì)位于可變區(qū)的引物擴(kuò)增某一亞型 HBV DNA，以便分型 。 ? 全突變可關(guān)閉相鄰 FMR1基因的表達(dá)， FMR1 mRNA在幾乎所有患者不表達(dá)或只有低表達(dá)，從而出現(xiàn)臨床癥狀。 ? 男性和女性攜帶者增多到 52～ 200拷貝，相鄰的 CpG 島未被甲基化，稱為前突變（ premutation）。 目 錄 目 錄 2. FVIII基因突變的檢測(cè) （ 1）依賴于 FVIII基因內(nèi)或旁側(cè)的多態(tài)性標(biāo)記的連鎖分析 （ 2） RFLP連鎖分析 （ 3） VNTR分析 （ 4）短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR）的連鎖分析 目 錄 目 錄 三、脆性 X綜合征 ? 脆性 X 智力低下基因 1（ FMR1） 5ˊ非翻譯區(qū)遺傳不穩(wěn)定的 (CGG)n 三核苷酸重復(fù)序列的異常擴(kuò)增以及相鄰CpG 島的異常甲基化。 I型倒位患者表現(xiàn)為 14 kb三種類型；Ⅱ 型倒位患者表現(xiàn)為 16和 kb三種帶型 。 ? 甲型血友病的基因突變類型已有 300余種 ，其中點(diǎn)突變占 174種；另有部分患者是由于缺失或插入突變或內(nèi)含子 22的基因倒位所致 。 突變基因 (CCT GTG G) 鐮狀紅細(xì)胞貧病的限制性內(nèi)切酶譜分析 MstⅡ 酶切位點(diǎn) （ CCTNAGG） 2. HBS的 限制性內(nèi)切酶譜分析 目 錄 正常人 突變攜帶者 患者 鐮狀紅細(xì)胞貧血病的限制性內(nèi)切酶譜分析 目 錄 目 錄 目 錄3. HBS的 PCRRFLP分析 正常人的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) Mst Ⅱ 消化可生成 54bp和 56bp兩個(gè)片段，而鐮狀細(xì)胞貧血癥患者的 DNA片段不被酶切，仍為 110bp，雜合子可見三條帶 正常人 雜合體 患者 Marker 目 錄 目 錄 1. PCRRFLP分析 ?珠蛋白生成障礙性貧血癥基因密碼子 17突變的檢測(cè) M： pBR322 DNA/Msp I。 正?；? (CCT GAG G) 5180。 ASO雜交法 目 錄 目 錄 斑點(diǎn)雜交結(jié)果 N：正常； M突變 鐮狀紅細(xì)胞貧血患者 ASO雜交法檢測(cè) NASO MASO 正常 突變 突變 純合子 雜合子 純合子 5180。 ? 突變 的（ M）的 ASO探針： 5180。 STR (short tandem repeats) ③ SNP(single nucleotide polymorphism) 目 錄 目 錄 13kb 患者 正常 HBS的間接基因診斷 —— RFLP標(biāo)記的連鎖分析 HapⅠ 13kb Southern印跡雜交 N H P N：正常； H：雜合子； P：患者（純合子）；黃色區(qū)域?yàn)樘结? 目 錄 目 錄 遺傳病的基因診斷 Gene Diagnosis of Hereditary Diseases 目 錄 目 錄 一、血紅蛋白病（ hemoglobinopathy） （一）鐮狀細(xì)胞貧血病 （二） β珠蛋白生成障礙性貧血癥 二、血友?。?Hemophilia） 甲型血友病基因診斷 三、脆性 X綜合征