堿性磷酸酶的分離提取-文庫(kù)吧資料
2025-01-12 06:39本頁面
【正文】 體硫酸銨至 （ 100 mL加入 g），不斷攪拌溶解，置冰箱靜置 1 h。 20 g牡蠣 加入 50 mL預(yù)先冷卻的 mol/L TrisHCl 緩沖液（ pH ，含 mol/L NaCl），于高速組織搗粹機(jī)勻漿 1 min，于冰箱4℃ 放置 1 h進(jìn)行抽提。 (9) 離心上清液即為粗酶制劑，檢測(cè)酶的比活力。裝入透析袋，對(duì) mol/L TrisHCl pH ，至無 SO42被檢測(cè)出為止（可用一定濃度 BaCl2溶液檢驗(yàn)）。 (6)室溫離心， 4000 r/m 20 min，收集沉淀物。（不做）） (5) ，加入固體研磨細(xì)粉的硫酸銨至 （ 100 mL加入 g）。 (4) 室溫離心， 4000 r/m 20 min，收集離心上清液，并量體積。） (3) 在上清液中加入研磨細(xì)粉的固體硫酸銨至 和度（ 100 mL加入 g）。 (2) 室溫離心， 4000 r/m 20 min，收集離心上清液，（兩組分開） 并量體積。酶的比活力定義為每 mg蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。產(chǎn)物 pNP在405 nm處有最大的吸收峰，可以根據(jù) OD405 nm 值的增加計(jì)算酶活力的大小。唯有比活力提高較大，提純步驟才有效。由于硫酸銨在水中溶解度很大（ 20℃ ，每升可溶 760克），并且對(duì)許多酶沒有很大的影響，因此它是最常用的鹽。選擇來源豐富，酶含量高的材料。它也可以催化磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，磷酸基團(tuán)從磷酸酯轉(zhuǎn)移到醇、酚或糖等磷酸受體上。實(shí)驗(yàn) 堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測(cè)定 ? 目的要求： 測(cè)定的方法 ? 堿性磷酸酶 (Alkaline phosphatase EC 簡(jiǎn)稱為 ALPase)廣泛存在于微生物界和動(dòng)物界。ALPase能催化幾乎所有的磷酸單酯的水解反應(yīng)，產(chǎn)生無機(jī)磷酸和相應(yīng)的醇、酚或糖。
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