【正文】 . 五味子酯甲 d. 五味子甲素 e. 五味子乙素 總離子流圖（ TIC） A：對照品 B：體外制劑 木 脂 素 類 成 分 體外制劑 UPLCMS/MS檢測 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 共有峰與相應(yīng)對照品峰紫外光譜圖比較 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 ELSD UV at 210nm HPLCDAD/ELSD 檢測結(jié)果 a. 三七皂苷 R1 b. 人參皂苷 Rg1 Rb1 d. 柴胡皂苷 a e. 柴胡皂苷 d Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 原料藥材與制劑指紋圖譜相關(guān)性分析 A、全方制劑 B、單味柴胡制劑 C、柴胡陰性制劑 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 A、全方制劑 B、單味五味子制劑 C、五味子陰性制劑 原料藥材與制劑指紋圖譜相關(guān)性分析 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 體外制劑 HPLC指紋圖譜研究 一、體外制劑成分分析 五味子醇甲 基于血清藥理學(xué)與血清藥化學(xué)相結(jié)合的中藥復(fù)方保肝作用及機理研究思路與方法 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 含藥血清 定性定量分析 肝細胞 損傷模型 保肝藥理試驗 譜 效 關(guān) 系 分 析 藥 效 物 質(zhì) 基 礎(chǔ) 體 外 化 合 物 結(jié)果驗證 技術(shù)路線圖 Nantong Third People39。 Nantong Third People39。 血清藥理學(xué) ， 指將含藥血清作用于體外細胞模型進行藥效評價 。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 四 、 活性組分及其主要成分作用機理研究及藥效驗證 基于成分分離的中藥保肝作用及機理研究 赤芍總苷對小鼠膽汁分泌 、 戊巴比妥鈉睡眠時間及 UDPGT活性的影響 （ 略 ） 芍藥苷的保肝退黃作用評價 （ 略 ） Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 赤芍醇提 浸膏中不同部位 對膽汁淤積肝損傷小鼠肝組織的影響（ HE 300倍） A正常對照組 B模型對照組 C總苷中劑量組 D沉淀中劑量組 E其余中劑量組 D E C A B Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 a b a c b b c b b b b a b b b b b b 0400800120016002022正常組 模型組 總苷低 總苷中 總苷高 沉淀低 沉淀中 沉淀高 其余低 其余中 其余高 ALT AST ALP小鼠血清 ALT、 AST及 ALP測定結(jié)果（ ?x177。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 a b a c b b b b b b b b a b b b b b 060120180240300正常組 模型組 總苷低 總苷中 總苷高 沉淀低 沉淀中 沉淀高 其余低 其余中 其余高 TBIL DBIL TBA小鼠血清 TBIL、 DBIL及 TBA測定結(jié)果（ ?x177。 (1)、 (2)、 (3)合并 ，回收乙醇 、 濃縮 ，為 其余部分 醇提部位 3個組分分離及相關(guān)成分的含量測定 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 洗脫量 (mg) 吸附量 (mg) 洗脫率 (%) 洗脫液干重 (mg) 純化后純度 (%) 芍藥苷 % % 內(nèi)酯苷 芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷的洗脫率 基于成分分離的中藥保肝作用及機理研究 小試結(jié)果 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 8倍量 20%乙醇洗脫后 ， 洗脫液中芍藥內(nèi)酯苷 、 芍藥苷不再明顯減少 ， 故確定洗脫劑用量為 8倍樹脂體積 。mL1 沉淀 上柱樣品液的制備 大孔樹脂從醇提部位赤芍總苷分離 基于成分分離的中藥保肝作用及機理研究 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 赤芍醇提浸膏 30g 加蒸餾水 1000mL超聲溶解，離心 上清液 含芍藥內(nèi)酯苷 s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 含量測定方法的建立及赤芍飲片 、 醇提部位和水提部位的含量測定 aalbiflorin； bpaeoniflorin 對照品（ A）、赤芍飲片（ B）、醇提部位（ C）和水提部位（ D） HPLC色譜圖 Nantong Third People39。為進一步跟蹤研究活性成分 ， 本章隨后采用 D101型大孔樹脂考察了從醇提浸膏中純化赤芍總苷的技術(shù)參數(shù) ， 并將醇提部位進一步分離為加水溶解后的沉淀部分 、 赤芍總苷及其余部分 ， 為下一步繼續(xù)跟蹤有效組分提供了實驗材料 。 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 A B C D 醇提部位和水提部位對膽汁淤積肝損傷小鼠肝組織的影響 （ HE 300倍） A正常對照組 B模型對照組 C醇提部位中劑量組 D水提部位中劑量組 Nantong Third People39。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 c b b a a a b c b c b 0450900135018002250正常組 模型組 醇提低 醇提中 醇提高 水提低 水提中 水提高 ALT AST ALP小鼠血清 ALT、 AST及 ALP測定結(jié)果（ ?x177。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 c c b a a a c aP＜ vs normal group； bP＜ ， cP＜ vs model group（以下所有柱形圖均同） 080160240320400正常組 模型組 醇提低 醇提中 醇提高 水提低 水提中 水提高 TBIL DBIL TBA 小鼠血清 TBIL、 DBIL及 TBA測定結(jié)果（ ?x177。 s表示 ， 使用 ， 組間比較采用 Scheffe法檢驗 ， 以 P 。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 ICR 小鼠 正常 對照組 模型 對照組 醇提 部位 低劑 量組 中劑 量組 高劑 量組 水提 部位 低劑 量組 中劑 量組 高劑 量組 生理鹽水灌胃 CCL4造模 CCL4造模，藥物干預(yù) ?觀察指標 血清學(xué)指標： 總膽紅素 (TBIL)、 直接膽紅素 (DBIL)、 總膽汁酸 (TBA)、 丙 氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、 天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、 堿性磷酸酶 (ALP) 。s Hospital 南通市第三人民醫(yī)院 南通大學(xué)附屬南通第三醫(yī)院 總體方案設(shè)計圖 活性組分篩選 3個組分藥效試驗比較 HPLC 法同時測定芍藥苷 、芍藥內(nèi)酯苷含量方法建立及應(yīng)用 活性部位成分分析和組分分離 ?醇提部位與水提部位的含量測定 ?大孔樹脂從醇提部位分離赤芍總苷