hplc分離條件的優(yōu)化步驟以及定量計(jì)算公式的選擇-文庫吧資料
2025-05-19 22:11本頁面
【正文】 適用范圍：樣品中所有組分均能流出色譜柱，并在檢測器上產(chǎn)生信號(hào)。 (二 )梯度洗脫：在同一分析周期內(nèi)．按 — 定程度不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使每個(gè)組分都在適宜的條件下獲得分離的一種洗脫方法。 流動(dòng)相的選擇 pH的選擇： 反相色譜法分離弱酸（ 3≤pKa≤7 ）或弱堿（ 7≤pKa≤8 ）樣品 調(diào)節(jié)流動(dòng)相的 pH值： 抑制樣品組分的解離 增加組分在固定相上的保留 改善峰形 ，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象 流動(dòng)相調(diào)整的三原則 （ 1）由強(qiáng)到弱 （ 2）三倍規(guī)則 （ 3）粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào) 流動(dòng)相流速的選擇 對內(nèi)徑為 ，流速一般選擇 1ml／ min，對于內(nèi)徑為 ，流速選擇 ／ min為佳。） 相鄰組分的選擇性系數(shù)和分離度的選擇 為達(dá)到某一確定分離度，選擇性系數(shù)的優(yōu)化十分重要，對預(yù)期柱效 10 3~ 10 5塊 /m理論塔板的色譜柱，若相鄰組分 k在 1~10，且 α＞ ~，則易達(dá)到 多組分優(yōu)化分離的最低指標(biāo)（ R= ） 選定一種高效液相色譜方法時(shí)，很難將各組分間的分離度都調(diào)至最佳，只能使少數(shù)幾對難分離物質(zhì)對的分離度至少保持 R=。 對組成復(fù)雜、由具有寬范圍 k′ 值組分構(gòu)成的混合物，需用梯度洗脫技術(shù)，才能使樣品中每個(gè)組分都在最佳狀態(tài)下洗脫出來。 保留時(shí)間和容量因子由色譜過程的熱力學(xué)因素控制，可通過改變流動(dòng)相的組成和使用梯度洗脫來進(jìn)行調(diào)節(jié)。 分析型色譜柱，選擇操作參數(shù)的一般原則如下： 色譜柱長 L 10~25cm；柱內(nèi)徑 Φ （直徑） 4~6mm；固定相的粒度 d p 5~10181。正相可用四氯乙烯、四氟乙烯作探針測死時(shí)間。 用 UVD（紫外吸收檢測器）檢測：可以苯、四氯乙烯或 KNO3水溶液作探針測死時(shí)間 用 RID檢測：可以重水（ D2O）、重氫
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