基因表達(dá)調(diào)控及重組dna技術(shù)(參考版)
2025-01-09 18:06本頁面
【正文】 5. 遺傳病的預(yù)防 77 本章重點(diǎn) ? 基本概念 基因表達(dá)、操縱子、 DNA元件、順式作用元件、 反式作用因子（轉(zhuǎn)錄因子）、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、 基因工程、限制性核酸內(nèi)切酶、管家基因 ? 原核基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn) ? 乳糖操縱子結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制 ? 基因表達(dá)調(diào)控的規(guī)律、方式、要素 78 ? PCR原理及基本過程 ? 重組 DNA技術(shù) 基本原理 ? 真核基因轉(zhuǎn)錄特點(diǎn) ? 真核基因轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié) ? 真核基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 79 演講完畢，謝謝觀看！ 。 4. 基因治療 所謂 基因治療 就是向功能缺陷的細(xì)胞 補(bǔ)充相應(yīng)功能的基因 ， 以糾正或補(bǔ)償其基因缺陷，從而達(dá)到治療的目的。如生產(chǎn)干擾素、胰島素、細(xì)胞因子等。 常用載體： 質(zhì)粒 噬菌體 DNA 病毒 DNA 質(zhì)粒 （ 1）雙鏈環(huán)狀 DNA，細(xì)菌染色體外 （ 2） 2 3kb 或 數(shù)百 kb （ 3）獨(dú)立自主復(fù)制，穩(wěn)定遺傳 （ 4）遺傳標(biāo)志 (五 ) 基因載體 （克隆載體） 66 三、重組 DNA技術(shù) 的原理 與基本過程 * 1. 獲取目的基因 2. 選擇、構(gòu)建基因載體 3. 目的基因與載體連接，形成重組分子 4. 重組分子導(dǎo)入受體細(xì)胞 5. 篩選、擴(kuò)增 6. 表達(dá)目的基因 67 + 載體 目的基因 重組 DNA分子 細(xì)菌 轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染 擴(kuò)增 篩選 68 （ 1） 化學(xué)合成 （ 4） PCR （ 2） 基因組 DNA文庫 （ 3） cDNA文庫 1. 獲取目的基因 69 組織或細(xì)胞染色體 限制性內(nèi)切酶 多個(gè) DNA片段 載體 多種轉(zhuǎn)化子 （基因文庫） 重組 DNA 導(dǎo)入宿主細(xì)胞 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄 cDNA cDNA文庫 70 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR） 在有特定模板、特異 DNA引物及合成 DNA所需要的dNTP存在時(shí)，向 DNA合成體系內(nèi)加入耐熱的 DNA聚合酶（ 如 Taq DNA聚合酶 * ），經(jīng)反復(fù)變性、退火及延伸的多個(gè)循環(huán)反應(yīng)，生成特異 DNA產(chǎn)物的過程。 基因組 DNA(genomic DNA) 代表一個(gè)細(xì)胞或生物體整套遺傳信息的 所有 DNA序列。 限制性核酸內(nèi)切酶共分三類，基因工程常用 II類酶，這類酶常識(shí)別 DNA的回文序列 * 。轉(zhuǎn)化子細(xì)胞經(jīng)擴(kuò)增、提取，獲得大量目的 DNA的無性繁殖系，即DNA克隆，基因工程。 分子克隆： 從眾多不同的分子群體中分離到的很多相同分子的集合。 二、重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 母本 克隆 clone cloning （一） 克隆與克隆化 57 細(xì)胞克隆： 從大量群體細(xì)胞中分離出某一種類型細(xì)胞 ， 經(jīng)擴(kuò)增獲得這樣一類相同的細(xì)胞 。 3． mRNA轉(zhuǎn)錄激活及其調(diào)節(jié) 54 第三節(jié) 重組 DNA技術(shù) 55 基因重組（ geic rebination） ? 自然發(fā)生的基因重排 ? 真核、原核均會(huì)發(fā)生 ? 基因變異、物種演變、生物進(jìn)化的基礎(chǔ) 基因工程（ geic engineering）重組 DNA技術(shù) 人工進(jìn)行基因重組 56 克隆 *(名詞 )： 就是指來自同一母本的所有副本或 拷貝的集合 。 ? 轉(zhuǎn)錄抑制因子 （負(fù)性調(diào)節(jié)因子） 通過 DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用起負(fù) 性調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子。 ? 抑制子 * ： 對(duì)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性起抑制作用的 DNA序列 負(fù)性調(diào)節(jié)元件 48 反式作用因子（轉(zhuǎn)錄因子） 轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白 ? 基本轉(zhuǎn)錄因子 ? 轉(zhuǎn)錄激活因子 ? 轉(zhuǎn)錄抑制因子 49 絕大多數(shù)轉(zhuǎn)錄因子屬于 反式作用因子 * 真核生物： 由某一基因表達(dá)后，通過 DNA蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)相互作用控制另一基因的轉(zhuǎn)錄。 根據(jù)位置 、 性質(zhì)及作用方式的不同分為 啟動(dòng)子 、 增強(qiáng)子和抑制子 。 26 2. 真核生物 （ 1）
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