核酸的結(jié)構(gòu)與功能(10)(參考版)
2024-08-27 01:49本頁面
【正文】 返回 。 79 （三）核酸的雜交 ? （ hybridization）：不同來源的核酸變性后，合并在一處進(jìn)行復(fù)性；這時(shí)，只要這些核酸分子的核苷酸序列含有可以形成堿基互補(bǔ)配對(duì)的片段， 復(fù)性也會(huì)發(fā)生于不同來源的核酸鏈之間，即形成所謂的雜化雙鏈 。 （ 3） DNA片段的大小 —— DNA片段越大，復(fù)性越慢。 ? 退火 (annealing)：熱變性 DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，此過程稱之為 ~。 77 （二）核酸的復(fù)性 DNA的復(fù)性 ：變性因素解除后，因變性而分開的 DNA兩條單鏈即可再聚合成原來的雙螺旋，其原有的性質(zhì)，可得到部分恢復(fù)。因此， DNA制劑不應(yīng)保存在離子強(qiáng)度過低的 ? ③ 均一性 ? 均質(zhì) DNA：熱變性溫度范圍較小； ? 異質(zhì) DNA：熱變性溫度范圍較寬。（ 即在 260nm下光吸收達(dá)到最大光吸收一半是的溫度 ） ? DNA的 Tm值一般在82~95℃ 之間。 74 DNA的熱變性 ? DNA熱變性是在一個(gè)很窄的溫度范圍內(nèi)發(fā)生的。 引起核酸變性的因素 ? 加熱 、 強(qiáng)酸 、 強(qiáng)堿 、 有機(jī)試劑 （尿素、甲醛、甲醇、乙醇、甲酰胺等）或 射線 等一切可以破壞核酸分子氫鍵的處理，都可使核酸變性。 73 四、核酸的變性、復(fù)性和雜交 （一）核酸的變性 (denaturation) 核酸的變性 ：核酸雙鏈螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈，不涉及共價(jià)鍵的斷裂。 ①增色效應(yīng) （ hyperchromic effect）：當(dāng)核酸變性或降解時(shí)，其紫外線吸收強(qiáng)度顯著增高 ②減色效應(yīng) （ hypochromic effect）：變性的核酸在一定條件下恢復(fù)原有性質(zhì)時(shí)，其紫外線吸收強(qiáng)度又可回復(fù)到原有水平。 A260/A280比值：純 DNA=；純 RNA=；樣品中含有雜蛋白， A260/A280比值明顯降低。 72 （二）核酸的紫外吸收特性的應(yīng)用 1. 作為定量測(cè)定核酸的方法。 DNA的 pI約為 4~5， RNA的 pI約為~， 在 pH7~8電泳時(shí)泳向正極 。 70 二、核酸的酸堿性質(zhì) ? 核酸的磷酸基具有酸性，堿基具有堿性，因此，核酸具有兩性電離的性質(zhì)，為兩性電解質(zhì) 。如： 3`， 5`cAMP磷酸二酯酶。 69 （三）酶水解 水解核酸的酶 （ 1） 磷酸二酯酶 ： 非特異性 水解磷酸二酯鍵的酶。 ? 原因： RNA的核糖上有 2`OH羥基，在堿作用下形成 磷酸三酯 ；磷酸三酯極不穩(wěn)定，隨即水解，產(chǎn)生核苷 2`， 3`環(huán)磷酸酯；環(huán)磷酸酯繼續(xù)水解，產(chǎn)生 2`核苷酸 和 3`核苷酸 。如： ? DNA在 37℃ 對(duì)水透析，可完全除去嘌呤堿，得到 無嘌呤酸 （ apurinic acid）。 63 tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) ? 倒 “ L”形 ，所有的 tRNA折疊后形成大小相似及三維構(gòu)象相似的三級(jí)結(jié)構(gòu)。 ? （ 5） TψC 環(huán) ：由 7個(gè)核苷酸組成。 ? （ 4） 額外環(huán) ：有 3~18個(gè)核苷酸組成。環(huán)中部為反密碼子，由 3個(gè)堿基組成。 ? （ 2） 二氫尿嘧啶環(huán) ：由 8~12個(gè)核苷酸組成，具有兩個(gè)二氫尿嘧啶，故得名。 （ 2）組成： 4臂 4環(huán)組成 ? 4臂 ：氨基酸接受臂、反密碼臂、二氫尿嘧啶臂、TΨC 臂。螺旋部分稱為 “ 莖 ” 或“ 臂 ” ；非螺旋部分稱為 “ 環(huán) ” ； 在螺旋區(qū)， A與U配對(duì)， G與 C配對(duì) 。 （圖） 58 四、 RNA的高級(jí)結(jié)構(gòu) ? RNA通常是 單鏈線形分子 ，但可自身回折形成局部雙螺旋 （ 二級(jí)結(jié)構(gòu) ），進(jìn)而 折疊 （ 三級(jí)結(jié)構(gòu) ）。如：病毒、 真核生物的染色體 。 ? ⑵ 正超螺旋 （ positive superhelix） ：向 DNA雙螺旋的相同方向纏繞而成
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