第二章--樣品預(yù)處理方法(參考版)
2024-08-20 15:40本頁(yè)面
【正文】 ?實(shí)驗(yàn)環(huán)境和器皿、材料的污染 實(shí)驗(yàn)室的去污劑、潤(rùn)滑油、濾紙、玻璃器皿不夠潔凈，蒸餾水純度不夠等。 解決方法： ? 采用高純度溶劑（價(jià)貴） ? 溶劑在使用前重新應(yīng)用全玻璃儀器重蒸餾 ? 采用專(zhuān)屬的檢測(cè)方法。 ?溶劑中雜質(zhì) 原因： ? 由于溶劑體積較其它試劑為大，即使原來(lái)雜質(zhì)濃度較低，濃集時(shí)或通過(guò)色譜柱時(shí)，濃度顯著增大而干擾測(cè)定。 ?脂肪酸及酯類(lèi) 血樣中濃度約為 350μ g/ml（ 103mol/L），較待測(cè)藥物高 102～ 103倍以上 ,易被提入。 ?蒸發(fā)： ? 有的是藥物本身的揮發(fā)性（如苯丙胺） ? 因蒸發(fā)所得殘?jiān)茨芡耆苡谒拥男◇w積溶劑中 ? 因減壓濃縮引起溶液暴沸而導(dǎo)致?lián)p失 ? 在吹氮過(guò)程中使樣品以氣溶膠形式逸出 。 ?化學(xué)降解： 原因： ? 樣品的化學(xué)和生物學(xué)不穩(wěn)定性常引起化學(xué)分解 ? 光化學(xué)及熱穩(wěn)定性（尤其在凈化步驟中強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的中和所產(chǎn)生的熱）引起的損失，也應(yīng)加注意。 ? 這樣血球散開(kāi)，藥物可從血球表面解吸，以減少共沉淀的損失。 原因之二： 血樣中紅血球和纖維蛋白元凝塊的形成，常能引起待測(cè)物的共沉淀。 (續(xù) ) 用于 HPLC法測(cè)定的樣品制備方法： ? ml 血清或 1 ml 尿 ↓ 分別加入 ml 甲醇，離心 取上清液 ml ↓ 加入 mol/l 的冰醋酸 ml ， ↓ 搖勻； ↓ 用乙酸乙酯和乙醚混合液（ v/v為 1： 1） ↓ 2 ml 萃取 離心后，取 1 ml 有機(jī)相置尖底試管 ↓ 在 45℃ 水浴中用氮?dú)饬鞔蹈桑? ↓ 加入 HPLC用流動(dòng)相 ml 分析樣品 五、 導(dǎo)致待測(cè)物損失的因素 ?吸附： 原因之一： 玻璃表面或橡膠塞會(huì)吸附藥物，特別是脂肪胺類(lèi)及含硫化合物。 ? 微透析技術(shù) ： 實(shí)質(zhì)上是一種膜分離技術(shù)，它利用膜透析原理，微量地對(duì)細(xì)胞液進(jìn)行流動(dòng)性連續(xù)采樣的新型采樣和色譜樣品制備技術(shù) 。使含蛋白質(zhì)的樣品流過(guò)，樣品中的蛋白質(zhì)被柱填料吸附，而待測(cè)組分則流出小柱。 細(xì)胞破碎方法的分類(lèi) ? 提取生物大分子樣品時(shí)條件的選擇： （ 1）溶劑 常用的溶劑有水、稀酸、稀堿、稀鹽等，也可以采用不同比例的有機(jī)溶劑，如：乙醇、丙酮、氯仿、四氯化碳 選擇溶劑時(shí)要注意物質(zhì)的溶解性，如極性物質(zhì)易溶于極性溶劑；堿性物質(zhì)易溶于酸性溶劑；溫度升高時(shí)一般溶解度相應(yīng)增大；遠(yuǎn)離等電點(diǎn)時(shí)溶解度增大 （ 2） pH值 ? 在穩(wěn)定的范圍內(nèi)， pH選擇在偏離 pI的兩側(cè) ? 注意測(cè)量 pH值的準(zhǔn)確性，誤差不應(yīng)超過(guò) （ 3）溫度 一般提取溫度在 5℃ 以下 ? 除此之外，還應(yīng)考慮溶劑的離子強(qiáng)度、介電常數(shù)等對(duì)提取效果的影響 （ 1）加熱法 ? 前提條件 ： 待測(cè)組分熱穩(wěn)定性好，而其它易產(chǎn)生熱變性 ? 該法最簡(jiǎn)單，但只能除去熱變性蛋白 （續(xù)） （ 2）鹽析法 ? 原理 ： 利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度有不同程度的降低來(lái)沉淀去除蛋白質(zhì) ? 常用的中性鹽 有：硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉 ? 影響鹽析的條件 鹽的飽和濃度 pH的選擇 蛋白質(zhì)的濃度 溫度的影響 （續(xù)） （ 3）有機(jī)溶劑沉淀法 ? 蛋白質(zhì)的沉淀和
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