化驗技術(shù)協(xié)會第八期企業(yè)知識管理培訓(xùn)資料(參考版)
2025-06-30 23:42本頁面
【正文】 試驗若經(jīng)確認無效，應(yīng)重試時，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有生長，判供試品不符合規(guī)定。(3)陰性對照管有菌生長。當(dāng)符合下列至少一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：(1)無菌檢查試驗所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。如加入供試品后，或在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14日后，不能從外觀上判斷無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量接種于同種新鮮培養(yǎng)基中或斜面上，繼續(xù)培養(yǎng)，細菌培養(yǎng)48小時，真菌培養(yǎng)72小時，觀察是否再現(xiàn)渾濁或斜面上有無菌生長；或用接種環(huán)取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，進行判斷。每次操作時，均應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋劑，同法操作，作為陰性對照。無菌試驗過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對微生物生長及存活無影響。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，其總的沖洗量不宜過大，沖洗量及沖洗方法參照方法驗證試驗。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。大容量非抗菌作用的供試品，薄膜過濾后，無須沖洗。將已操作完畢的含培養(yǎng)基的集菌培養(yǎng)器移出無菌室，取其中一管作為陽性對照，依陽性對照菌選擇原則加入相應(yīng)的對照菌液。用小夾夾閉與培養(yǎng)器連接部的軟管，在軟管剪切線的位置剪斷軟管，將軟管開口端套在空氣過濾器開口上。濾干，關(guān)閉電源。如采用封閉式過濾器，取出培養(yǎng)器先檢查包裝是否完好無損，將培養(yǎng)器逐個插放在不銹鋼座上，將培養(yǎng)器的彈性軟管裝入集菌儀泵頭，注意定位準(zhǔn)確，軟管走勢順暢。 操作打開待檢樣品的鋁蓋，復(fù)溶。薄膜過濾法采用封閉式薄膜過濾器或開放式薄膜過濾器，可優(yōu)先選用封閉式薄膜過濾器。使用時，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。 薄膜過濾法，直徑約為50mm。供試品處理時所用的溶劑、乳化劑、分散劑、中和劑及其用量應(yīng)驗證是有效的，并對微生物生長無影響。%新潔爾滅抹凈外壁，且經(jīng)紫外線照射1小時后移入操作間（臺），除去鋁蓋，用75%乙醇棉或碘伏棉球擦拭瓶口橡膠塞外壁和瓶口縫隙，待干，戴好醫(yī)用消毒手套，在火焰旁小心揭開瓶塞，用專用取樣器取出規(guī)定量的樣品，置滅菌試管中，密塞待用，立即蓋好大包裝瓶塞，用橡皮膠布及時封口，再用封箱紙包扎瓶口。需加入空氣加壓后便于抽出的供試品，應(yīng)用注射器對著火焰抽取空氣加入，抽取瓶中液體時，應(yīng)將供試品倒置并使針頭在液面下。如為注射液、供角膜創(chuàng)傷及手術(shù)用的滴眼劑或滅菌溶液可直接用注射器吸取藥液，或選用其它適宜的方法。 其他供試品容器表面或外包裝，可參照上述用適當(dāng)消毒液擦拭或浸沒后以無菌的方式取內(nèi)容物。 供試品外部消毒 將消毒過的粉針劑、油劑等鋁蓋壓封的橡皮塞小瓶，先用75％乙醇或碘伏棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用滅菌鑷子剔去鋁蓋上的鋁質(zhì)小圓片，過火焰數(shù)次。 操作人員用肥皂、水清洗雙手，關(guān)閉紫外光燈，進入緩沖間，換拖鞋，再用75％乙醇棉球擦手，穿戴衣、帽、口罩、手套。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。陰性對照不得有菌生長。陽性對照管培養(yǎng)48～72小時，應(yīng)生長良好。 陽性對照 供試品無菌檢查應(yīng)進行陽性對照試驗。采用薄膜過濾法時，檢驗量應(yīng)不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。檢驗量是指一次試驗所用的供試品總量(g或ml)。 6 供試品的無菌檢查 檢驗數(shù)量及檢驗量檢驗數(shù)量是指一次試驗所用供試品最小包裝的數(shù)量。并重新進行驗證試驗。若含供試品的任一容器中微生物生長微弱、緩慢或不生長，則供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，若采用的是直接接種法，可根據(jù)實際情況增加培養(yǎng)基的用量、在沖洗液中或培養(yǎng)基中使用中和劑(如β內(nèi)酰胺酶、對氨基苯甲酸、聚山梨脂80)、或改為薄膜過濾法。其中1管接入規(guī)定量的供試品，另1管作為陽性對照，各試驗管按相應(yīng)規(guī)定的溫度培養(yǎng)3～5天。 直接接種法驗證試驗取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，分別加入金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的菌液各兩管；取適宜裝量的改良馬丁培養(yǎng)基4管，分別加入白色念珠菌、黑曲霉菌菌液各兩管。另取一濾筒，不過濾供試品，其它操作同上，作為陽性對照，將含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5天。 薄膜過濾法驗證試驗將規(guī)定量的供試品按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入試驗菌少于100CFU。供試品對每一試驗菌的抑菌活性應(yīng)逐一進行驗證。確保在實際檢驗條件下，該供試品的無菌檢查法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。若供試品的生產(chǎn)工藝，原、輔料組分或檢驗條件發(fā)生改變時，檢查方法應(yīng)進行重新驗證。5 方法驗證試驗為保證檢驗質(zhì)量，對所用的檢驗方法必須經(jīng)過驗證，才能確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。 培養(yǎng)基無菌檢查的操作及結(jié)果判定每批培養(yǎng)基隨機取不少于5支(瓶)，按規(guī)定溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。培養(yǎng)基的無菌檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行，但是所用培養(yǎng)基不符合無菌要求，供試品的無菌檢查結(jié)果應(yīng)視為無效。 對于采用薄膜過濾法檢查的樣品，若用封閉式薄膜濾器操作的，培養(yǎng)基裝量100ml；若用開放式
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