【正文】 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：譚德明聯(lián)系電話：1303678327524 / 24。 篩選出安全有效的候選疫苗。研究的前期工作進(jìn)展順利。并進(jìn)行了動(dòng)物接種研究。有基因克隆、表達(dá)、疫苗研究的相關(guān)基礎(chǔ)。 中南大學(xué)有人才優(yōu)勢，課題攻關(guān)組由傳染病學(xué)、病原生物學(xué)、免疫學(xué)、以及病理生理學(xué)專門從事疫苗研究和免疫治療研究的研究人員組成，技術(shù)力量強(qiáng)，組成了強(qiáng)大的多學(xué)科科技攻關(guān)的研究陣營。取得成績后，制定切實(shí)可行的疫苗擴(kuò)大生產(chǎn)的方案，和臨床應(yīng)用的可行性論證。同時(shí)觀察疫苗的副作用，篩選出安全有效的疫苗。②觀察特異性抗體阻斷SARS病毒S蛋白與細(xì)胞膜上受體的特異性結(jié)合作用。⑷ 將疫苗接種小鼠，觀察針對(duì)SARS病毒的特異性免疫力。⑶ 運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)SARS病毒表面蛋白（S和M蛋白）的免疫原性的強(qiáng)弱進(jìn)行分析，篩選出免疫原性強(qiáng)的多肽片段；對(duì)選出的多肽片段與其它病毒、人類、兔、鼠等蛋白質(zhì)的同源性進(jìn)行研究分析，選出SARS病毒特異的多肽片段做為抗原。（二）主要研究內(nèi)容⑴ 根據(jù)已公布的SARS病毒S蛋白基因合成并擴(kuò)增S蛋白中和抗原位點(diǎn)的基因片段，和嘗試構(gòu)建S蛋白的全基因。本攻關(guān)小組將進(jìn)行SARS病毒基因重組和多肽疫苗的研究?；蛞呙绫M管在實(shí)驗(yàn)室研究取得了較好的結(jié)果，其臨床應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)太少，缺乏對(duì)其應(yīng)用后遠(yuǎn)期副作用的評(píng)估。在這幾種疫苗中，基因重組疫苗和多肽疫苗的優(yōu)點(diǎn)最多。預(yù)防病毒的疫苗常用的有病毒滅活疫苗、病毒減毒活疫苗、基因重組疫苗和多肽疫苗（亞單位疫苗）。突起蛋白（Spike protein；S蛋白）是SARS病毒的外膜蛋白，可能是病毒與細(xì)胞膜融合的主要蛋白質(zhì)，在決定病毒侵入細(xì)胞，形成感染的過程中起著重要的作用。以上種種結(jié)果表明這一致病因子可能是一種發(fā)生了較大基因變異的新冠狀病毒，并初步地認(rèn)定了這種新的冠狀病毒很可能是傳染性非典型肺炎的主要病原體之一。也能與一些針對(duì)其他已知的抗冠狀病毒的高效免疫血清起反應(yīng)。面對(duì)新出現(xiàn)的傳染病，有很多未知問題需要研究解決。四、 研發(fā)費(fèi)用：面罩密封性及排水性能改造　　　3萬元　　　　　病毒過濾器雙向過濾改造　　　　2萬元產(chǎn)品效果及舒適性能鑒定　　　　4萬元市場調(diào)查　　　　　　　　　　　合　　計(jì)　　　　　　　　　　　五、 生產(chǎn)投資估算：核心技術(shù)病毒過濾器僅在組裝的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)的提前下，生產(chǎn)投資估算約為150萬（不包括廠房）。第三期工作（2個(gè)月）：產(chǎn)品鑒定包括病毒過濾效果測定，臨床醫(yī)務(wù)人員及病人接受程度的調(diào)查及找出并改進(jìn)產(chǎn)品的缺點(diǎn)。期工作（2個(gè)月）：在目前所使用的面罩基礎(chǔ)上進(jìn)行面罩密封性及排水性能改造。三、計(jì)劃進(jìn)程：首二、工作基礎(chǔ)： 項(xiàng)目負(fù)責(zé)人從事臨床麻醉工作10余年對(duì)面罩的選配及改良有較多的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。面罩的改進(jìn)主要包括在目前使用的面罩基礎(chǔ)上加入排出呼出氣凝水通道及儲(chǔ)水裝置，密封性能則是在可充氣外套上加裝可拆街式密封干燥環(huán)，并配備可調(diào)式固定帶方便佩戴。如果不能開發(fā)出效果可靠、使用方便舒適、易消毒且能普及應(yīng)用的過濾病毒呼吸道防護(hù)用具，今后我們面臨比SARS病毒危害性更大的呼吸道傳染病或生化戰(zhàn)時(shí)將付出比現(xiàn)在更大的代價(jià)。一種新傳染病的出現(xiàn)通常流行多年后才能控制，今后幾年一定有大量的病人、疑似病人、接觸者需要進(jìn)行檢查，試劑的需要量很大，投資本項(xiàng)目，經(jīng)濟(jì)效益也極為顯著。與常規(guī)PCR相比，不僅敏感性和特異性顯著提高，而且檢測速度更快，但試劑成本相同。五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算：試劑費(fèi)：（每人檢查5種標(biāo)本，每種標(biāo)本用10種引物檢查，預(yù)計(jì)檢查14000次，每次試劑成本按10元計(jì)）出差費(fèi)：（收集病人標(biāo)本之所需）勞務(wù)費(fèi)：管理費(fèi)：六、完成時(shí)間：1年七、效益分析 從理論上來說，感染者只要有病毒排出，本法就可檢出，真正實(shí)現(xiàn)早期診斷，不近有利于患者的早期治療，降低病死率，更重要的是早期發(fā)現(xiàn)感染者，實(shí)行早期隔離，防治疫情的擴(kuò)散，為控制本病的流行提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，因此，本項(xiàng)目具有重大的社會(huì)效益。四、研究工作基礎(chǔ)已建立了SYBR多重PCR診斷HBV的方法和SYBR實(shí)時(shí)定量PCR檢測鴨乙型肝炎病毒的方法（論文待發(fā)表），經(jīng)過適當(dāng)?shù)母恼?，即可用于檢測SARS病毒。每份標(biāo)本用5~10對(duì)引物檢測統(tǒng)計(jì)分析：計(jì)算每對(duì)引無和標(biāo)本的特異性和敏感性，找出最優(yōu)引物和和最優(yōu)標(biāo)本。三、研究內(nèi)容 將12株已知的SARS病毒序列進(jìn)行排序分析，找出保守序列，并與冠狀病毒序列比較根據(jù)以上序列的研究結(jié)果，設(shè)計(jì)5~10對(duì)PCR引物優(yōu)化SYBR實(shí)時(shí)PCR檢測SARS病毒的實(shí)驗(yàn)條件臨床試用：擬檢查正常人、各種發(fā)熱病人、非典型肺炎及疑似病人。通過溶解曲線可以區(qū)別特異性擴(kuò)增或非特異性擴(kuò)增，其特異性足以與熒光定量PCR相比。同時(shí)由于冠狀病毒是一種常見的病毒，與SARS病毒又有很高的同源性，SARS病毒多變異，Taqman技術(shù)只使用一種探針，容易出現(xiàn)假陰性。一是常規(guī)PCR，本法簡便，不需特殊設(shè)備，但是敏感性較低。目前Genbank上已報(bào)告12株SARS病毒的全序列或部分序列，為檢查SARS病毒核酸典定了基礎(chǔ)。二是檢查病毒抗原，這種方法的敏感性不高。目前認(rèn)為，非典型肺炎的潛伏期約為215天，病后23周才出現(xiàn)特異性抗體，檢查抗體的方法將難以達(dá)到早期診斷的目的，因此，早期診斷應(yīng)立足于檢查SARS病毒本身。 二、立項(xiàng)依據(jù)非典型肺炎是一種新的病毒性傳染病，疫苗研究成功至少需要數(shù)年的時(shí)間，抗病毒藥物的研究開發(fā)的時(shí)間更難預(yù)計(jì)。六、生產(chǎn)投資預(yù)算： 500 萬元 ：PCR儀、激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)（計(jì)算機(jī)與應(yīng)用軟件）、低溫離心機(jī)等。該項(xiàng)技術(shù)還可以用于制備其他病毒的基因檢測芯片，廣泛應(yīng)用于檢驗(yàn)、檢疫的各個(gè)領(lǐng)域?！斑M(jìn)口植物攜帶病毒基因檢測芯片的研制”，熟練掌握基因芯片制作有關(guān)技術(shù)。二、工作基礎(chǔ)：。更為重要的是，在檢測SARS病毒的同時(shí)可給出SARS病毒基因組的更詳細(xì)的信息，這對(duì)于監(jiān)測和比較各地SARS冠狀病毒不同分離株之間的變異以及病毒在傳播過程中可能發(fā)生的自然變異具有重要意義。并設(shè)計(jì)一整套SARS冠狀病毒全基因組芯片數(shù)據(jù)分析軟件。將這些探針按照5’到3’基因組序列順序，用高速點(diǎn)樣機(jī)按點(diǎn)到芯片片基上，排列成矩陣制成基因芯片；并設(shè)計(jì)內(nèi)對(duì)照探針和陰性對(duì)照探針?？紤]到上述檢測方法的缺陷和局限性，以及SARS病毒的復(fù)雜性和變異性，我們擬研制一種SARS冠狀病毒全基因組檢測芯片。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：盧放根聯(lián)系電話：13808423923SARS冠狀病毒全基因組檢測芯片一、項(xiàng)目概述目前檢測SARS冠狀病毒的方法主要是RTPCR法和病毒培養(yǎng)法。五、工作進(jìn)度及預(yù)期成果、一月內(nèi)進(jìn)入中試規(guī)模的純化生產(chǎn)、第二月制備出氣霧劑及完成粘膜刺激實(shí)驗(yàn)、第三月進(jìn)入臨床驗(yàn)證。四、預(yù)計(jì)完成的時(shí)間10天內(nèi)完成中試工藝，IgA免疫學(xué)鑒定，氨基酸成分分析及微測序，同時(shí)完成小試生產(chǎn)；五月底完成粘膜刺激試驗(yàn)等急性毒性試驗(yàn)。4. 正在進(jìn)行中試規(guī)模生產(chǎn)工藝研究，對(duì)產(chǎn)品制劑進(jìn)行質(zhì)控檢定，并對(duì)純化的IgA進(jìn)行氨基酸成分分析，N末端測序鑒定，內(nèi)毒素檢測等。2. 中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院已經(jīng)進(jìn)行了氣霧劑配方的研制。知識(shí)結(jié)構(gòu)合理，為完成本項(xiàng)目提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。5. 人員基礎(chǔ)：都是參與“靶向治療肝癌的基因藥物”研究的原班人馬。3. 技術(shù)基礎(chǔ)：經(jīng)過試劑準(zhǔn)備、設(shè)備調(diào)控以及技術(shù)攻關(guān)，本研究小組已經(jīng)從血清中純化出電泳級(jí)純度的血清IgA產(chǎn)品。目前該公司已具備完成本項(xiàng)目所需的實(shí)驗(yàn)研究儀器、設(shè)備及場地，如AKTA Purifier100、層析柱、低溫冷凍干燥機(jī)、蛋白質(zhì)電泳及電轉(zhuǎn)膜設(shè)備、濃縮設(shè)備和高速離心機(jī)等相關(guān)設(shè)備，并有純化OR蛋白質(zhì)的工作基礎(chǔ)。二、前期工作基礎(chǔ)1. 物質(zhì)基礎(chǔ)：本項(xiàng)目研究小組及所在的中南大學(xué)已于2000年2月與湖南投資集團(tuán)共同組建了