【正文】 能干的人，不在情緒上計(jì)較，只在做事上認(rèn)真；無能的人！不在做事上認(rèn)真，只在情緒上計(jì)較。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。 在不同樣品的薄層層析分析中。凈化的方法隨樣品性質(zhì)不同而異。樣品提取液中常含有各種非測定成分，如脂肪、蛋白質(zhì)、色素、臘質(zhì)等，在進(jìn)行薄層色譜分析時(shí)，會(huì)受到這些物質(zhì)的干擾。因此，采用液液萃取的方法。其優(yōu)點(diǎn)是避免了浸漬法中出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象。缺點(diǎn)是提取時(shí)間長，一般4—10小時(shí)或更長。樣品管中溶劑達(dá)到一定高度時(shí)，因虹吸作用，又自動(dòng)流入提取瓶內(nèi)，如此反復(fù)多次提取。 索氏提取法：此法是用索氏提取器，以少量的溶劑反復(fù)提取樣品中的待測成分。但往往出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，必須用高速離心機(jī)分離提取溶劑。這類樣品也可以在組織搗碎機(jī)內(nèi)與提取溶劑混合，以20000轉(zhuǎn)/分的高速充分切碎，增加提取溶劑和樣品的接觸面積，就可在較短時(shí)間內(nèi)將待測成分從樣品中提出。常用的提取方法有以下幾類：（一浸漬法：將充分粉碎后的干樣品，置磨口三角瓶內(nèi)，加入選定的提取溶劑，塞上瓶塞，置振蕩器上振搖提取一定時(shí)間，然后過濾或離心分出溶劑。比如在測定食品中農(nóng)藥的殘留時(shí)，多用各種有機(jī)溶劑。如固體樣品多用浸漬法、索氏提取法、洗脫法，液體樣品則多用液液萃取的方法。樣品的提取，就是用一種溶劑，將待測成分從樣品中提取至提取溶劑內(nèi)，而大部分非測定成分又不被提取。如100克樣品，經(jīng)提取、凈化后再濃縮至1毫升，這樣就可提高靈敏度100倍。 樣品的提取與凈化在食品衛(wèi)生分析中，待測定的成分往往以極端量存在于樣品中，而這些樣品的組成又是非常復(fù)雜的，因此，在進(jìn)行薄層色譜分析之前，首先需要經(jīng)過一個(gè)對(duì)待測成分的提取、凈化及濃縮的處理過程，才便于點(diǎn)樣分析。這種方法用在紙色譜上能得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果，但在薄層色譜上應(yīng)用，誤差較大，目前少有采用。與洗脫法比較，簡化煩瑣的洗脫操作，根據(jù)薄層板上斑點(diǎn)面積與物質(zhì)濃度的關(guān)系，直接進(jìn)行含量測定，具有一定的優(yōu)越性。 面積法第二節(jié)故采用濾膜過濾或離心沉淀的方法，效果就會(huì)比玻棉好。常用的從薄層板上分離斑點(diǎn)及洗脫技術(shù)是：取滴管一支，加入玻棉，尖端連接抽氣泵，另一端置薄層板樣品斑點(diǎn)位置上，用解剖針細(xì)心撥動(dòng)吸附劑，盡量使其完全吸入滴管，然后取下滴管，用適當(dāng)?shù)娜軇⑷芙馓崛?，提取液收集于離心管內(nèi)備用。螢光法雖然簡單方便，但有時(shí)紫外線可能促使被分離的化合物分解，使結(jié)果偏低，因此采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照法更為可靠。嚴(yán)格說來，薄層色譜在這里僅僅的起著分離的作用，而含量測定是依靠其他分析技術(shù)，所以在這一方法中，主要是被分離化合物的洗脫技術(shù)。此法是將展開后被分離化合物斑點(diǎn)區(qū)的吸附劑，從薄層板上剝離下來，再用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙?，提取出被分離的化合物，然后用其他的含量測定方法進(jìn)行測定。但是，近年來由于儀器與技術(shù)不斷發(fā)展，薄層定量已達(dá)到了一定的水平。第六章除以上所述影響Rf值的因素外，其他如吸附劑的粘度，粘合劑的種類，點(diǎn)樣量等均對(duì)薄層色譜的Rf值有些影響，應(yīng)加以注意。(六) 薄層板的活度：活度對(duì)Rf值有影響是肯定的，因此要嚴(yán)格控制活化的溫度與時(shí)間。展開溶劑的純度要特別注意，如丙酮中水份的含量對(duì)Rf值有一定的影響，因?yàn)樗莺扛淖儗⒂绊懻归_溶劑的極性。（三）相對(duì)濕度：展開槽內(nèi)的相對(duì)濕度，對(duì)Rf值的影響，也有一些文獻(xiàn)報(bào)道，因此，在薄層色譜操作中，特別要注意大氣相對(duì)濕度的影響，若在濕度較高的環(huán)境中操作，則點(diǎn)樣應(yīng)特別迅速，盡量不要使薄層板在空氣中暴露時(shí)間過久，以免空氣中的水份改變薄層板的活度，引起Rf值的變動(dòng)。但是捷伍（Zeeuw）提出，不飽和展開槽分離效能較飽和槽的分離效能好，并且認(rèn)為在嚴(yán)格控制展開條件下，也可以獲得良好的Rf值重現(xiàn)性。在飽和展開槽內(nèi)薄層板在槽內(nèi)進(jìn)行溶劑蒸氣平衡過程中，吸附劑吸附了一定量的溶劑，而同時(shí)逐去了少量水份，使薄層板活度有所增加，也造至Rf值的下降?？偟那闆r是飽和展開的Rf值較不飽和為低，這是由于在飽和展開槽內(nèi)，溶劑從薄層板上揮發(fā)很少，減少了溶劑在薄層板上流動(dòng)的溶量，加快了展開速度。綜上所述，可以認(rèn)為薄層厚度在250—500微米之間，采用充分飽和的展開槽，厚度對(duì)Rf值的影響是不大的。因此厚度將影響薄層色譜的Rf值。雖然Rf值是薄層色譜法定性的重要依據(jù)，但影響Rf值的因素很多，因此為獲得比較好的Rf值的重現(xiàn)性，應(yīng)注意以下各種因素：（一）薄層的厚度：實(shí)驗(yàn)證實(shí)，薄層的厚度對(duì)溶劑的展開速度有一定影響。由于Rf值的重現(xiàn)性不易控制，有人提出了Rs值法，這一方法為：在薄層板上除點(diǎn)加樣品溶液之外，再點(diǎn)加一種標(biāo)準(zhǔn)色素，如奶油黃、蘇丹紅、橙黃G等，或者點(diǎn)加被分離化合物的同系物，展開后兩者移行距離之比，即為Rs值.Rs＝ Rs＝ Rs值法的重現(xiàn)性較Rf值法為好。由于這種方法是在同一張薄層板上進(jìn)行色譜分離，其條件相同，故結(jié)果準(zhǔn)確可靠。這種方法是在同一張薄層板上，同時(shí)分別點(diǎn)加樣品溶液及待測化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液。薄層色譜中影響Rf值的因素很多，造成Rf值重現(xiàn)性較差，誤差可達(dá)177。Rf值的意義為：Rf值＝ Rf值作為定性的基礎(chǔ)，首先必須注明色譜條件，否則Rf值將失去作為定性基礎(chǔ)的意義。Rf值（比移值）是薄層色譜定性的重要依據(jù)。 第五章 生物顯色法：在抗菌素的薄層色譜分離中，利用抗菌素對(duì)微生物的抑制作用，進(jìn)行顯譜鑒定。另一類為被分離的物質(zhì)有抑制酶的作用，如有機(jī)磷酸酯類殺蟲劑具有抑制膽堿酯酶的作用，因此在分離有機(jī)磷酸酯類化合物的薄層板上，噴灑含有膽堿酯酶的溶液及酶水解基質(zhì)（可以被酶水解并產(chǎn)生有色物質(zhì)的試劑），經(jīng)37℃保溫30分鐘，進(jìn)行酶水解作用，則在有機(jī)磷化合物斑點(diǎn)處，酶受抑制而無色，背景顯一定的顏色。這種方法有兩種類型。（三）化學(xué)顯色法是薄層顯色中最常用的一種方法。目前，各實(shí)驗(yàn)室常用的噴霧儀器噴霧時(shí)，噴霧器距薄層板的距離要適當(dāng)，壓力大小要合適，使噴出的霧滴均勻分布在薄層板上。（二）化學(xué)顯色法；化學(xué)顯色法是借助被分離的化合物，在薄層板上與化學(xué)顯色試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，從而產(chǎn)生有色化合物，顯示出色斑的位置。（3）促使被分離的化合物在紫外線照射下，與化學(xué)顯色劑進(jìn)行反應(yīng)而產(chǎn)生色斑。由于這類化合物對(duì)紫外線有吸收作用，而形成色斑部分熒光猝滅，斑點(diǎn)呈黑色，同時(shí)色斑以外部分則因紫外線的激發(fā)而顯示出熒光，這種方法稱為熒光猝滅法。（2）使含有熒光物質(zhì)的薄層板在紫外線激發(fā)下顯出熒光。用解剖針在斑點(diǎn)周圍加上標(biāo)記，即可進(jìn)行觀察。應(yīng)用紫外線檢定的方法可分為三類：（1）使被分離的化合物在紫外線激發(fā)下，顯示出熒光。顯色是薄層色譜法的一項(xiàng)重要步驟，在薄層展開后，通過顯色技術(shù)，觀察被分離化合物的Rf值有其分離狀況，是薄層定性及定量工作的基礎(chǔ)。（七）多級(jí)展開法：即將同一展開溶劑，在一張薄層板上多次展開，這種方法也是紙色譜中應(yīng)用的一種方法。在第一次展開時(shí)，若用強(qiáng)極性溶劑，則非極性化合物隨溶劑移動(dòng)在液體前沿，而極性化合物則在此展開中分離。（六）分階展開法：這種展開法，適用于分離含有極性差異比較大的化合物。展開儀器如圖4—20，首先在展開槽內(nèi)注入基礎(chǔ)溶劑I，然后再進(jìn)溶劑管（3）處以勻速加入另一溶劑Ⅱ，并經(jīng)攪拌器（2）迅速混合，過多的溶劑由排液管（4）溢出。（五）梯度展開法：柱色譜中的梯度淋洗法，也可應(yīng)用在薄層色譜的展開中。即在原來展開方向垂直的一邊，用溶劑Ⅱ再展開一次。以雙向展開中，通常用2020厘米的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的薄層板。這種展開技術(shù)分離容量大，適用于Rf值接近，分離較難點(diǎn)的混合物。此法目前已少有應(yīng)用。（二）水平展開法：常用的水平展開有兩種方式。由于槽內(nèi)充滿溶劑蒸氣，薄層板上的溶劑不再揮發(fā)，因此可以消除邊沿效應(yīng)。特別是用混合溶劑時(shí)，更易出現(xiàn)邊沿效應(yīng)。所以同一種化合物在同一張薄層板上，所得色斑的Rf值兩邊較高而中間略低。一般展開高度為距原點(diǎn)10—12厘米，根據(jù)情況亦可上升至15厘米。展開槽的大小以放下薄層板為宜，不宜過大。下行展開法目前少有應(yīng)用，本節(jié)不再介紹。 展開第三節(jié)加外在薄層板的起始線上，用皮帶沖輕壓薄層，使薄層形成3毫米的圓孔，孔內(nèi)放一點(diǎn)糊狀淀粉，將點(diǎn)好樣的濾紙圓片，仔細(xì)放入孔內(nèi)，使其粘附即可。（二）濾紙移樣法：直接點(diǎn)樣法，很難使原點(diǎn)面積大小一致，也很難控制直徑在3毫米以內(nèi)，而且又容易損傷薄層的表面，特別是在薄層板上進(jìn)行測量面積定量時(shí)，這些缺點(diǎn)會(huì)影響測定結(jié)果。因?yàn)楸影灞┞兜臅r(shí)間過長，會(huì)吸收空氣中的水份而改變活度，影響分離效果。對(duì)于制備薄層色譜，需要盡可能地增大制備量，點(diǎn)樣量就需要增大，因此常采用線狀點(diǎn)樣，點(diǎn)樣體積可達(dá)幾百微升。若點(diǎn)樣溶液體積過大，原點(diǎn)的面積也增大，會(huì)影響結(jié)果。點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意不使針尖將薄層板戳成小孔，以免形成非圓形的不規(guī)則色斑。故一般是將注射器固定在一個(gè)架子上操作。簡單的改進(jìn)方法可將針頭磨平，但如不小心又會(huì)使針孔被吸附劑顆粒堵死。微量注射器最適用于薄層色譜的點(diǎn)樣。然后用微量注射器或尖端磨細(xì)的血色素吸管，直接將樣品溶液點(diǎn)加在起始線上。點(diǎn)樣的方法有以下兩種；（一）直接點(diǎn)樣法：首先在薄層板上用硬質(zhì)鉛筆或解剖針，輕輕描劃出點(diǎn)樣的起始線。要求滴加的樣品溶液原點(diǎn)應(yīng)盡可能小，一般直徑不超過3毫米為適宜。 點(diǎn)樣從圖中還可以看出在250微米厚度以內(nèi)，薄層板愈薄，展開速度愈慢。薄層厚度影響動(dòng)相溶劑展開的速度［5］。（3）毛細(xì)管性能：展開過程中，溶劑前沿應(yīng)呈一水平線，上升速度適當(dāng)，250微米厚度的薄層板，用苯展開時(shí)，上升10厘米應(yīng)在30—40分鐘為佳。（1）表觀性狀：應(yīng)表面平整、光滑、無印痕和氣泡，對(duì)光觀察均勻。首先必須臨時(shí)制備，較為麻煩，而且只能使用一次，吸附劑消耗量大，不夠經(jīng)濟(jì)；其次這種薄層板非常脆弱，無論在使用或者保存上都不夠方便。保存時(shí)間約一周，不宜過長。（2）氧化鋁板的活度測定：稱取偶氮苯30毫克，對(duì)甲氧基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅及對(duì)氨基偶苯各20毫克，分別溶于50毫升四氯化碳中，并各取10微升點(diǎn)于已活化的氧化鋁板上，用四氯化碳為展開溶劑，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)色素的Rf值（下表），查出其活度級(jí)。其Rf值應(yīng)分別為：。（3）最后薄層凝固，顏色變白，水份蒸發(fā)約50%。這一過程中薄層板有如下現(xiàn)象：（1）開始薄層板表面有閃亮光澤。因此，為達(dá)到某一規(guī)定的吸附活度，就應(yīng)加溫除去薄層中的水份。（四）薄層板的活化與貯存：吸附薄層色譜的薄層板，首先應(yīng)具有一定的吸附活性，才能達(dá)到良好的分離效果。涂布法制備薄層板易精確控制厚度，是其最大的優(yōu)點(diǎn)。一般有250、27500、750、1000和2000微米等規(guī)格的閘板。這種涂布器有一個(gè)活動(dòng)的閘板，涂布時(shí)吸附劑從閘板下的縫隙流出，涂在載板上。也可以自制，基本結(jié)構(gòu)如圖4—1，材料可用不銹鋼或有機(jī)玻璃。（4）涂布法：本法為實(shí)驗(yàn)室最常用的薄層板制備法。將一定量的吸附劑糊，均勻地傾注在玻片上，再入置水平板上，使其形成厚度較為均勻的薄層。將兩張玻片背靠背地貼緊，放在吸附劑糊中浸漬，取出后放在水平板上，即可在玻片上形成薄層。各法簡述如下：（1）浸漬法：用于小型薄層板的制備，如戴玻片板。（三）薄層板制備：薄層板的制備方法，目前常用的有浸漬法、傾注法、噴霧法及涂布法。（4）離子交換劑1）離子交換樹脂：取5克纖維素MN300加少量