【正文】 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。 177。尤為感謝我的摯友郎需堡、周世相、胡芳，兄弟鄧靖、彭廣、潘興書給予的幫助。同時，十分感謝我的同學周澤曉、馮誠誠、王陽、金鑫、康雁君、臧廣超、石紅中在這三年以來和我一起度過實驗室的美好時光，給我留下了美好的回憶。 在 此， 對二位老師 獻上我最真心的感謝和祝福 ！也感謝實驗室李升老師提供的幫助和支持。二位恩師 廣博的學識、敏捷的思維、敏銳的洞察力令人欽佩，嚴謹求實的治學態(tài)度、孜孜不倦的工作精神使我深受感動，這是我從實驗室獲得的最寶貴的精神財富 ，并將永遠指引著我繼續(xù)前進、努力奮斗！ 感謝實驗室吳擁軍副教授在實驗過程中給予的指導和建議，和吳老師 的交流總是使我受益匪淺 。學生的每一步成長，都傾注了您們的大量心血，更離不開您們的悉心指導和無微不 至的關(guān)懷以及親切的問候。 不知不覺三個春秋已匆匆而過，時值本文完成之際，回首貴大數(shù)載，收益良多 ，感慨萬千 ，因為在我的生命中有那么多可親可敬可愛2020 屆貴陽護理職業(yè)學院學生 畢業(yè)論文 12 的人值得感激。 IGFI 作用于成骨細胞后，其 OC 蛋白水平上升 （ P＜ ） ， 但抑制 OC mRNA 的水平 （ P＜ ），其原因有待進一步分析 。從 24h 開始， noggin 組成骨細胞培養(yǎng)液中 OC 蛋白的含量 較 對照組 低（ P＜ ），對 OC mRNA 表達的影響則不大 （ P＞ ） ，說明 noggin 對 OC 蛋白水平的影響， noggin 可能主要抑制OC 蛋白的釋放，對其基因的表達影響不大。這些結(jié)果提示 ，成骨細胞 BALP 蛋白含量主要受 BALP 基因表達水平的調(diào)控。 BALP 的顯著增加，導致 類骨質(zhì)礦化成為骨基質(zhì)的作用得到加強，為其骨組織的形成做準備。骨鈣蛋白（ OC）具有鈣離子結(jié)合位點，通過骨鈣蛋白的鈣離子結(jié)合位點將羥磷灰石吸附沉積到膠原蛋白和粘多糖構(gòu)成的骨架上，從而完成礦化過程，有機物和無機物緊密結(jié)合起來，使骨骼得到生長。類骨質(zhì)礦化是無機鹽有次序地沉積于類骨質(zhì)的過程，其中最關(guān)鍵的是無定形的磷酸鈣形成羥基磷酸灰石結(jié)晶。成骨細胞向類骨質(zhì)中釋放富含堿性磷酸酶和鈣結(jié)合蛋白的基質(zhì)小泡。成骨細胞分泌骨基質(zhì)的多種有機成分，包括骨堿性磷酸酶、 I 型膠原蛋白、蛋白多糖、骨 鈣蛋白等構(gòu)成類骨質(zhì)。骨堿性磷酸酶（ BALP）和骨鈣蛋白（ OC）是成骨細胞在不同分化階段的代謝產(chǎn)物。在機體的生長發(fā)育過程中，骨形成大于骨吸收，因此新骨不斷形成，骨干加長，從而實現(xiàn)骨骼的縱向生長。與相同濃度的 BMP2 相比， IGFI 的作用較強，提示成骨細胞的增殖主要受 IGFI 的調(diào)節(jié)。 本文的研究結(jié)果顯示，外源 IGFI蛋白對 MG63 細胞增殖有直接的促進作用，且存在濃度和時間依賴性。 Noggin 是 BMPs 的特異性拮抗劑，可與 BMPs 結(jié)合形成較大的戒指樣結(jié)構(gòu)，遮蔽了 BMPs 上的受體結(jié)合位點，從而抑制 BMPs 與其受體結(jié)合 （ Zehentner BK et al, 2020） 。在培養(yǎng)基中添加胎牛血清的同時也將其中的BMPs 等因子帶入（馬忠仁等， 2020；李巍等， 2020），可能會對 noggin 蛋白的作用造成一定的干擾。 外源性 noggin 蛋白對 MG63 細胞的增殖具有明顯的抑制作用，并存在明顯的時間和濃度依賴性，濃度為 8109mol/L 作用 72h 時對 MG63 細胞增殖的抑制率達到 ℅。成纖維細胞中 cyclinD1 過度表達導致G1 期縮短，提前進入 S 期，細胞體積小并喪失對外源性增殖分裂信號的響應(yīng)。研究證實（王軍琳等， 2020），外源 BMP2 蛋白能夠顯著誘導周期蛋白 CDK4 表達的增加，促進細胞的增殖。與本文的研究結(jié)果不同，其他學者的 研究 結(jié)果（ Kuo PL et al, 2020）顯示， 100ng/ml 的 BMP2 作用 48h 對 MG63 細胞沒有增殖作用，顯然本文使用的有效濃度更低。 2020 屆貴陽護理職業(yè)學院學生 畢業(yè)論文 9 結(jié) 果 實驗采用 MTT 法主要基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶可使 MTT 分解，產(chǎn)生紫蘭色結(jié)晶狀顆粒，其量與活細胞數(shù)呈正比，也與細胞的活力呈正比，因此本文應(yīng)用 MTT 法 測定 MG63 細胞增殖活性的變化。 Noggin 基因編碼的蛋白序列具有高度的保守 性，人類 noggin 的氨基酸序列與 爪蟾 、小鼠、大鼠、兔子、馬具有高度的同源性。 2. Noggin基因的概況 （ 一級標題 ） Noggin 基因的結(jié)構(gòu) （ 二級標題 ） Noggin 基因的結(jié)構(gòu) 特征（ 三級標題 ） 在 1992 年， California 大學的 Harland， Smith， 胎中分離出 noggin 基因，在人的體 內(nèi)定位于染色體 17q22，在大鼠與小鼠體內(nèi)定位于 11 號染色體。趨化性與 BMP 濃度及細胞上的受體密度有關(guān)；（ 2）誘導有絲分裂，細胞通過有絲分裂得到增殖；（ 3）誘導分化， BMP 可以誘導成纖維型細胞分化為成骨型細胞。 BMP 誘導成骨包含有 3 階段，每一階段都具有多分子 放大效 應(yīng) （ Reddi AH et al, 2020） ：（ 1）誘導趨化， 是指細胞響應(yīng)化學信號分子濃度 變化所做出的方向性移行，在 BMP 趨化 作用 下，血漿纖維連接蛋白與產(chǎn)膠原的骨基質(zhì)連接，促進間充質(zhì)細胞黏附其上發(fā)生增殖。體外研究表明 BMP 靶細胞還有： 結(jié)締組織中未分化而有 活力的間充質(zhì)細胞、骨膜基質(zhì)細胞、骨膜細胞 （ Bostrom MP et al, 1993； Bosch P et al, 2020） 。（ 2） 存在 BMP 的靶細胞群，即 骨髓中存在誘導性成骨細胞（ IOPC）和 定向性成骨 細胞（ DOPC）（ Reddi AH et al, 1995） ， 前 者需要分子信號誘導分化 ，而后 者可以自行分化為成骨細胞。 2020 屆貴陽護理職業(yè)學院學生 畢業(yè)論文 8 骨誘導是指一種組織或其產(chǎn)物能使第二種組織分化成骨的過程。 Gazze研究 發(fā)現(xiàn) BMP 降低細胞內(nèi)的膠原酶 mRNA 的表達，利于細胞外基質(zhì)的合成（ Gazzerro E et al, 1999） 。 BMP 對 MSCs 分化 促進 作用 ， 主要是增加細胞內(nèi) BALP 活性，提高膠原蛋白、骨鈣蛋白 、骨橋素的表達。據(jù)研究報道，能夠 對成骨前體細胞 MSCs的成骨分化 作用 主要有 BMP 9 三種 BMP 蛋白， 而其它 的 BMP 則對成熟的成骨細胞的有作用 ， 其中 BMP2 被認為是活性最強的唯一能單獨誘導成骨的因子 （ Wozney JM et al, 1998） 。例如， BMP 與合適的受體結(jié)合 ， 能夠在體內(nèi) 、 體外誘導未分化的間充 質(zhì)細胞向軟骨 、 骨細胞發(fā)生不可逆的分化 ， 形成軟骨和骨組織（ Barboza E et al, 1999） 。研究發(fā)現(xiàn)， BMP 之間可與不同的受體結(jié)合 ， 表現(xiàn)信號傳遞的多樣性 。當 羧 基末端區(qū)經(jīng)蛋白水解酶作用從前體蛋白上釋放 出來時 ， 二聚體即開始形成 ，它釋放到細胞外與機體各處靶細胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合而發(fā)揮作用 。 研究發(fā)現(xiàn) ， BMP 的活性形式為二聚體 ， 它既可以兩個相同的鏈形成的同