【正文】 增加分離度可適量減少甲醇。 3色譜峰面積與已知濃度溶液的成分不成比例可能原因：，影響因素：室內(nèi)溫度25左右，溫度波動大；流動相比例必須嚴格精密配置，醋酸增加會影響流動相的PH值；3流動相中不同成分對峰形、分離度的影響對于反向色譜法，一般為非極性固定相c18和C8， 流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫富喃等與水互溶的有機溶劑用于調(diào)整保留時間，為控制樣品在流動相中的解離，常用緩沖液（冰醋酸）控制流動相的PH值。敏感度即指信號與噪聲的比值（信噪比）等于2時，在單位時間內(nèi)進入檢測器的溶質(zhì)的濃度或質(zhì)量； D線性范圍：在進行定量分析時，希望檢測器有寬的線性范圍，以便在一次分析中可同時對主要組分和痕量組分同時進行檢測； E檢測器的池體積：它應小于最早流出的死時間色譜峰的洗脫體積的1/10，否則會產(chǎn)生嚴重的柱外譜帶擴展。漂移與整個液相色譜系統(tǒng)有關(guān)，而不僅是由檢測器引起的； C靈敏度（最小檢出濃度或最小檢出量）：在一個特定分離工作中， 檢測器是否有足夠的靈敏度是十分重要的。 ？ A噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動； B基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動，可在較長時間（~1h）內(nèi)觀察到。D不要過分擰緊螺帽，以防損壞螺紋。C將管子完全插入開口端，直至其與開口端的末端相碰為止。 ？ A管子的斷面必須垂直，否則，將會產(chǎn)生死體積而引起色譜峰峰形擴展?？煽紤]采用專用柱用于特殊的方法，不用時將柱折下來，注滿適當?shù)娜軇┗蛄鲃酉?，密封保管，不再作其它的分析? ？ 柱平衡慢的常見原因是，組分在舊的或新的流動相中對柱吸附強，或者在新的流動相中濃度小甚至為零。一根很好的專用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應。 ？ A在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進樣量不要太大，否則會導致前延峰或其它問題。 ？ 因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。但在以硅膠為基質(zhì)的填料中，有些樣品組分能與硅醇基團相互作用，脫附的過程很慢，使峰嚴重拖尾，這就是次保留過程。 ？ 在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過程被保留。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進樣，主要缺點是每次進樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負峰，有時還波及到樣品峰。 “胖峰和平頭峰？怎樣避免？ 用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖峰和平頭峰。時間常數(shù)太小（太快）可能增加短噪音，時間常數(shù)太大（太慢）可能出寬峰、拖尾峰。 ？ 評介一根色譜柱的基本指標是：塔板數(shù)、峰不對稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。 ，常用的實驗室脫氣方式還有哪些？ 加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。 ？ 在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發(fā)生峰位的重排。 、弱溶劑？ 改變流動相的組成或溶劑溶劑強度就可以改變峰容量因子和保留時間。 （一）保留時間變化 ①柱溫變化－－柱恒溫 ②等度與梯度間未能充分平衡－－至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 ③緩沖液容量不夠－－用25mmol/L的緩沖液 ④柱污染－－每天沖洗柱 ⑤柱內(nèi)條件變化－－穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相 ⑥柱快達到壽命－－采用保護柱 （二）保留時間縮短 ①流速增加－－檢查泵,重新設(shè)定流速 ②樣品超載－－降低樣品量 ③鍵合相流失－－流動相PH值保持在3~。色譜柱長期儲存也會發(fā)生此現(xiàn)象。此現(xiàn)象是由流動相不浸潤固定相表面而致。如流動相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動相等。反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。 避免色譜柱污染最簡單的方法是防患于未然。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加。這些根源通常是樣品基質(zhì)。通常通過實驗可判斷污染的來源。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質(zhì)。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時水解穩(wěn)定性最好。應注意：水是很容易污染的流動相成分。 流動相污染也可能是原因之一。保留時間漂移的幾種最常見的原因如下： 一 色譜柱平衡 如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。如，保留時間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時間的無規(guī)律波動。前者是指保留時間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保留時間無固定規(guī)律的波動。 ③選擇互溶的流動相 ④斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。檢查流通池是否漏液。） ⑧檢測器燈能量不足 ⑨色譜柱填料流失或阻塞 ⑩流動相混合不均勻或混合器工作不正常 解決方法 ①檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。 ⑥在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 原因 ①漏液。 ③用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑 ④減少差異或加上熱交換器 ⑤斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 ②檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。 解決方法 ①流動相脫氣。 ③流動相混合不完全 。重選檢測波長。使用新的流動相。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。 ⑦檢查流動相的組成。 ⑥用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用1020倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。 ⑤更改配比或流速。（不要用鹽酸） ④取出阻塞物或更換管子。 ③用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。 解決方法 ①控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器 ②使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。未調(diào)整檢測器。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） ⑤流動