核酸的生物合成ppt課件(參考版)
2025-05-15 04:02本頁面
【正文】 以 質(zhì) 粒 為 載 體 的 DNA 克 隆 過 程 。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR) mRNA cDNA 雙鏈 cDNA 重組 DNA分子 cDNA文庫 反轉(zhuǎn)錄酶 載體 受體菌 復(fù)制 * 從 cDNA文庫獲取目的基因 逆轉(zhuǎn)錄酶 A A A A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶 Ⅰ 堿水解 T T T T 能自我復(fù)制 合適的限制性酶切位點(diǎn) 合適的篩選標(biāo)記 在細(xì)胞內(nèi)拷貝數(shù)要多，使外源基因得以擴(kuò)增 載體的相對(duì)分子質(zhì)量要小，可容納較大的外源 DNA插入片段。 DNA克隆 DNA克隆 應(yīng)用酶學(xué)的方法 ， 在體外將各種來源的遺傳物質(zhì) （ 同源的或異源的 、 原核的或真核的 、 天然的或人工的 DNA） 與載體 DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 ， 繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞 ， 篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 ， 再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一 DNA分子 ， 也稱 基因克隆或重組 DNA (rebinant DNA) 。 自然界的基因轉(zhuǎn)移和重組是無目的 基因工程有目的 1865年 1944年 基因工程大事記 1973 Cohen第一例成功的克隆實(shí)驗(yàn)（美 斯坦福大學(xué) ） 1978 Genentech公司 人胰島素 世界上第一種基因工程蛋白藥物 （美） 1982 第一個(gè)基因工程藥物 重組人胰島素在英、美獲準(zhǔn)使用 1985 第一批轉(zhuǎn)基因家畜（兔、豬和羊）， 中國(guó)水生所 不育轉(zhuǎn)基因魚 1993 保鮮延熟型 西紅柿在美國(guó)上市 中國(guó)獲準(zhǔn)加入人類基因組計(jì)劃，負(fù)責(zé)測(cè)定人類基因組全部序列的 1% 科學(xué)家公布人類基因組工作草圖 公布人類基因組基本信息 克隆 (clone) 來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。其實(shí) 端粒酶 就是一種逆轉(zhuǎn)錄酶 ， 其活性只存在于胚胎和腫瘤細(xì)胞中 ， 可能細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄酶只在一定條件下才能表達(dá) ， 這也是細(xì)胞染色體遺傳信息得以保持相對(duì)穩(wěn)定的一個(gè)原因 。 如后來發(fā)現(xiàn)的 逆轉(zhuǎn)座子 ， 表明逆轉(zhuǎn)錄過程在細(xì)胞中頻繁發(fā)生 。 合成的 DNA稱 cDNA (plementary DNA)。 所有已知的致癌 RNA病毒都含有逆轉(zhuǎn)錄酶 ， 因此被稱為逆轉(zhuǎn)錄病毒（ retrovirus） ， 基因組均由兩條相同的 （ +） RNA鏈所組成 。 特殊的復(fù)制方式 三、逆轉(zhuǎn)錄 （ reverse transcription ） —— RNA指導(dǎo)的 DNA合成 1970年 ， Temin、 Mizufani、 Baltimore同時(shí)分別從 致癌 RNA病毒中 發(fā) 現(xiàn) RNA 指導(dǎo)的 DNA 聚 合 酶 —— 逆 轉(zhuǎn) 錄 酶(reversetranscriptase)， 有利地證明了 Temin 于 1964年提出的 前病毒學(xué)說 (previrus theory)。 4. 逆轉(zhuǎn)錄病毒 ：致癌 RNA病毒，如白血病病毒， AIDS病毒。 3.（ 177。 1.（ +） RNA病毒： 不含復(fù)制酶，如灰質(zhì)炎病毒和噬菌體 Qβ。 5 ? RNA 5 ? 3 ? 3 ? RNA+ 釋放 釋放 3? 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? 5 ? RNA+ RNA+ RNA ?RNA及 RNA+的合成方向均為 5‘ 3’ 例 : 噬菌體 Qβ 二、 RNA的復(fù)制
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