離體快繁與脫毒28h(參考版)
2025-05-15 02:55本頁面
【正文】 Xylem\phloem \vascular tissue\ground tissue dermal tissue\epidermis Meristem, shoot tip and stem cutting culture Meristems are actively dividing parts (0,2 to 0,5 mm in size), at the top of the shoot tips or root tips as well as in the axillary buds. They are dissected under the microscope and can be regenerated on specific media to plete plants. Also shoot tips and stem cuttings (0,5 to 1 cm in size) can be cultivated in vitro to produce plete plantlets. All 3 methods are used ?to eliminate virus pathogens in plants ?to identically propagate plants (cloning) ?to store plants for long periods (long term storage) without the impact of environmental conditions. These methods are applied at the LfL to improve Arnica montana, hops, potato and forage grasses. 。 如人們將 TMV包膜蛋白基因轉(zhuǎn)化植物，然后讓 TMV進行侵染，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因植物對多種類型的 TMV都有抗性。 日本曾經(jīng)用通過莖尖培養(yǎng)得到的脫毒原種取代了受馬鈴薯 X病毒（ PVX）侵染的馬鈴薯品種后，造成了花葉病的嚴(yán)重泛濫。 脫毒后的植物的感病性反而增強 ，會感染上致病性更強的病毒或真菌。 ? 植物對病毒的衍生抗性 ：當(dāng)一株植物被非致病性病毒感染后，會表現(xiàn)出對其它致病性病毒的抗性。 病毒感染 人工注射 異體蛋白 動物 動物 植物 帶該種 病毒 血清反應(yīng) （抗體） （抗原） （抗原） + 血液鑒定法示意圖 植物汁液 凝集反應(yīng) 抗血清 對照血清 玻璃片凝集法示意圖 （２）生物學(xué)鑒定法 ? 敏感植物 ：有些植物對病毒極為敏感，一旦感染病毒就會在其葉片乃至全株上表現(xiàn)特有的病斑，把這種植物稱為病毒“敏感植物”或“指示植物”。 ? 抗體：當(dāng)動物被感染或人工注射異體蛋白時，會在動物體內(nèi)產(chǎn)生一種特異性球蛋白 — 免疫球蛋白，稱抗體。 ? 莖尖培養(yǎng)可以與熱處理和化學(xué)脫毒相結(jié)合。 ? 普通莖尖 （ Shoot tip ） ： 由頂端分生組織及其下方的 13個幼葉原基構(gòu)成。 （２）注意保濕 （３）避免污染 ? 莖尖分生組織 （ Apical meristem。 ? 取材季節(jié)，春季容易成功，嫁接率高。 試管嫁接 技術(shù)關(guān)鍵 ? 微體嫁接要求剝離技術(shù)高。 ? 莖尖越小，剝離技術(shù)要求高。 ? 不同種類病毒在同一植物中分布位置不同。 二、脫毒的方法 ? 物理法脫毒 ? 化學(xué)方法脫毒 ? 生物學(xué)方法 １物理方法 （１）射線（Ｘ射線、紫外線等） （ ２）熱處理 熱水：對休眠組織有效，３６－４０溫水 熱空氣：對正在生長或生長旺盛的器官有效 （ 3）冷處理 ２ 化學(xué)方法 嘧啶、嘌呤類似物、抗生素等 ３生物學(xué)方法 ? 莖尖脫毒 ? 愈傷組織脫毒 ? 嫁接脫毒 ? 珠心組織脫毒 （１）莖尖脫毒 莖尖脫毒的原理 莖尖脫毒的技術(shù)關(guān)鍵 莖尖脫毒的原理 ? 病毒的傳播：微管系統(tǒng) 和細(xì)胞的胞間連絲傳播，以微管組織為主。 （２）在旺盛分裂的分生細(xì)胞中，代謝活性很強，有競爭狀態(tài)，抑制了病毒的復(fù)制。 MP首先在細(xì)胞質(zhì)中暫時表達，然后與微管和微絲結(jié)合，沿微管運動，在細(xì)胞壁上積累，并最終定位于胞間連絲。 在細(xì)胞間的移動 只能通過胞間連絲來傳播擴散，是借助病毒編碼的“ 運動蛋白” 來實現(xiàn)的，部分病毒的運動還需要“外殼蛋白”的參予。 （３）通過嫁接、菟絲子的“橋接”傳播。 ２植物病毒的侵染途徑 （１）農(nóng)業(yè)操作時的機械損傷。 （３）病毒有核酸，因此能利用寄主的細(xì)胞進行復(fù)制。 １病毒的特性 （１）病毒的結(jié)構(gòu)非簡單，僅由蛋白質(zhì)和核酸組成，無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，且核酸僅為ＤＮＡ或 RNA。組織、器官或整個植物壞死，或發(fā)育不良，出現(xiàn)畸型。出現(xiàn)花葉（如班駁、明脈、及綠島）和葉片皺縮。 植物病毒對無性繁殖的植物危害更大，病毒可以通過營養(yǎng)繁殖傳遞到下一代。當(dāng)用特定的無毒植株取代了被病毒侵染的母株后，產(chǎn)量平均增加 30%。 世界上的病毒對于所有的植物的影響是十分巨大的，據(jù)估計每年由于病毒的感染而損失的金額達700億美元 ,農(nóng)作物的損失達到 200億美元 。 1886年 ，德國麥爾（ Adolf Mayer)首先描述了煙草花葉病毒（ TMV)，1935年 ， TMV被結(jié)晶，也是第一個在電子顯微鏡下被觀察的病毒。病毒對抗生素不敏感。含有 RNA或 DNA，外包一個蛋白衣殼，衣殼外有包膜。 ? 控制溫度，增加自然光照。 （２）克服方法 ? 增加固體瓊脂濃度，使細(xì)胞吸水受到阻礙。 材料內(nèi)部帶菌 ? 在培養(yǎng)基中表現(xiàn)的癥狀 ? 外植體接觸培養(yǎng)基部位長菌 ? 外植體損傷部位長菌 ? 外植體生長不良或表現(xiàn)出缺綠 ? 診斷 ? 培養(yǎng)基添加有機物檢測 人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。 真菌污染的特點 ? 培養(yǎng)基上長霉，一般接種 35天就可先，霉的顏色有黑、白
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