【正文】 波長愈短的光，散射愈強(qiáng)，波長愈長的光，散射愈弱 。這七種顏色的光波長是不一樣的。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 93 思考題與練習(xí)題 －可見吸收光譜呈帶狀光譜，原因是什么？ dcab 2. College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 94 思考題與練習(xí)題 ？紫外吸收光譜說明什么？ －比爾定律的物理意義是什么？ ，測定波長與參比波長如何選擇？ 305nm,而在水中吸收波長為 307nm. 試問：引起該吸收的是 nπ* 還是 π π* 躍遷？ ： 乙烯、 1， 3， 5－己三烯、 1， 3－丁二烯。 一份強(qiáng)堿性， λ max[L]， A=ε [L]bC ，求出 ε [L] 另一份為強(qiáng)酸性，同理求出 ε [HL] 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 90 N階微分產(chǎn)生 n+1個譜峰，寬度變小，峰形越來越尖銳，因而導(dǎo)數(shù)光譜法分辨率高（左圖）。 2）原理： 控制 lceII ??? 0一階導(dǎo)數(shù)信號與濃度成正比。 試液濃度 Cs+Δ C College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 89 1）定義：將吸光度信號轉(zhuǎn)化為對波長的導(dǎo)數(shù)信號的方法。 利用雙波長分光光度計中差分函數(shù)放大器，把分別 (雙波長分光光度計）放大 k k2倍，則兩波長處的信號差為 S, 、 調(diào)節(jié)放大器，使λ 2和 λ 1滿足： 干擾組分 A無關(guān)，即消除了 A的干擾 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 88 常規(guī)法 示差法 參比 T 10％ 100％ 試液 T 5% 50% A() 用一已知合適濃度的為參比液，調(diào)節(jié)儀器的 100％透射比點(diǎn) ,測量試樣溶液對該已知標(biāo)準(zhǔn)溶液的投射比方法 稱為示差分光光度法 （改善精確度）。 (b)、（ c)中 A、 B互相干擾，根據(jù)吸光度加和性，解方程組。 經(jīng)驗規(guī)則： 伍德沃德（ Woodward）規(guī)則 適用： 計算二烯烴或多烯烴的最大吸收位置 斯科特（ Scott）規(guī)則 適用： 計算不飽和羰基化合物的 ? － ?*最大吸收位置 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 79 母體類型 λ/nm 基數(shù) 214 同環(huán)的二烯烴 基數(shù) 253 （注意：當(dāng)兩種情形同時存在時，選擇波長較長的為其母體） 增加一個共軛雙鍵 30 環(huán)外雙鍵 5 每個烷基取代基 5 ―O― 乙?；? 0 ―O―R 6 ―S―R 30 ―Cl ， ―Br 5 ―NR 2 60 （ Woodward）規(guī)則 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 80 母體（同環(huán)二烯） 253 取代烷基（ 5個） 25 環(huán)外雙鍵（ 3個） 15 延伸雙鍵 30 323nm 例子： (實測 320nm） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 81 α， β－不飽和羰基化合物母體 215 每增加一個共軛雙鍵 30 同環(huán)二烯化合物 39 環(huán)外雙鍵 5 α β γ 每個烷基 10 12 18 － OH 35 30 50 － OAc 6 6 6 － Cl 15 12 － Br 25 30 － NR2 95 母體 215 延伸雙鍵 30 取代烷基（ 3個） 54 299 （實測 296） （ Scott）規(guī)則 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 82 四、定量分析 （一）單組分定量 1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 83 A c Ax cx 標(biāo)準(zhǔn)曲線 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 84 2. 標(biāo)準(zhǔn)比較法 該法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法的簡化 ， 即只配制一個濃度為 cs的標(biāo)準(zhǔn)溶液 ， 并測量其吸光度 ， 求出吸收系數(shù) k，然后求出 cx sxsxAAcc ?? 該法只有在測定濃度范圍內(nèi)遵守 LB定律 ， 且cx與 cs大致相當(dāng)時 ， 才可得到準(zhǔn)確結(jié)果 。 ，化合物有強(qiáng)吸收而雜志無吸收，也可以用摩爾吸光系數(shù)檢查它的純度。 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較（以下四種） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 77 二、純度分析： 收，而雜志有強(qiáng)的吸收時，則可用于測定該化合物中的雜質(zhì)。 [3] Kenzo Hirayama： “ Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds.”,New York,Plenum,1967。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 73 UVVis分光光度法應(yīng)用 一、定性分析 二、純度分析 三、結(jié)構(gòu)分析 四、定量分析 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 74 作用：鑒定物質(zhì) 做法：與已知或標(biāo)準(zhǔn)物的 UVVis進(jìn)行比較 原則：對比吸收光譜的特征（形狀和 ?max ） 一、定性分析 1．對比吸收光譜特征數(shù)據(jù) ?max ， ?min ， ε 等 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 75 比較未知物與已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜曲線 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 76 [1] Sadtler Standar Spectra(Ultraviolet),Heyden, London,1978. (46000種化合物 )。當(dāng)作為參比溶液時，可扣除這種影響。 4. 平行操作溶液參比 用不含被測組分的試樣，在相同條件下與被測試樣同樣進(jìn)行處理，由此得到平行操作參比溶液干擾及消除方法。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 70 3. 試樣參比 如果試樣基體（除被測組分外的其它共存組分）在測定波長處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加顯色劑，作為參比溶液。 2. 試劑參比 如果顯色劑或其他試劑在測定波長有吸收，按顯色反應(yīng) 同的條件，只是不加入試樣溶液。 、溫度、放置時間 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 69 參比溶液的選擇 why使用參比溶液 只有使用參比溶液，才能真正反映待測溶液的吸光度值。 形成逐級配合物時，顯色劑的用量關(guān)系較大，一般就需過量較多或必須嚴(yán)格控制用量 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 66 分析條件選擇 一 .儀器測量條件選擇 1. 測量波長的選擇 a. 選擇最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長 λ max