【正文】 imei University, CHINA 64 ?S為背景吸收 切光器 吸收池 光源 檢測(cè)器 單色器 單色器 2. 雙波長(zhǎng)分光度計(jì) 特點(diǎn)：可測(cè)多組份試樣 、 混濁試樣 、 而且可作成導(dǎo)數(shù)光譜 、不需參比液 、 克服了電源不穩(wěn)而產(chǎn)生的誤差 ， 靈敏度高 。 形成逐級(jí)配合物時(shí)，顯色劑的用量關(guān)系較大，一般就需過(guò)量較多或必須嚴(yán)格控制用量 。 4. 平行操作溶液參比 用不含被測(cè)組分的試樣，在相同條件下與被測(cè)試樣同樣進(jìn)行處理，由此得到平行操作參比溶液干擾及消除方法。 與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比較（以下四種） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 77 二、純度分析： 收，而雜志有強(qiáng)的吸收時(shí)，則可用于測(cè)定該化合物中的雜質(zhì)。 利用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)中差分函數(shù)放大器，把分別 (雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)）放大 k k2倍，則兩波長(zhǎng)處的信號(hào)差為 S, 、 調(diào)節(jié)放大器，使λ 2和 λ 1滿足： 干擾組分 A無(wú)關(guān)，即消除了 A的干擾 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 88 常規(guī)法 示差法 參比 T 10％ 100％ 試液 T 5% 50% A() 用一已知合適濃度的為參比液，調(diào)節(jié)儀器的 100％透射比點(diǎn) ,測(cè)量試樣溶液對(duì)該已知標(biāo)準(zhǔn)溶液的投射比方法 稱為示差分光光度法 （改善精確度）。 一份強(qiáng)堿性， λ max[L]， A=ε [L]bC ，求出 ε [L] 另一份為強(qiáng)酸性，同理求出 ε [HL] 。 波長(zhǎng)愈短的光，散射愈強(qiáng)，波長(zhǎng)愈長(zhǎng)的光，散射愈弱 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 90 N階微分產(chǎn)生 n+1個(gè)譜峰，寬度變小，峰形越來(lái)越尖銳，因而導(dǎo)數(shù)光譜法分辨率高（左圖）。 (b)、（ c)中 A、 B互相干擾，根據(jù)吸光度加和性，解方程組。 [3] Kenzo Hirayama： “ Handbook of Ultraviolet and Visible Absorption Spectra of Organic Compounds.”,New York,Plenum,1967。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 70 3. 試樣參比 如果試樣基體（除被測(cè)組分外的其它共存組分）在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而與顯色劑不起顯色反應(yīng)時(shí)可按與顯色反應(yīng)相同的條件處理試樣，只是不加顯色劑，作為參比溶液。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 66 分析條件選擇 一 .儀器測(cè)量條件選擇 1. 測(cè)量波長(zhǎng)的選擇 a. 選擇最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長(zhǎng) λ max b. 如果 λ max處有干擾，應(yīng)選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 62 1. 單波長(zhǎng)分光光度計(jì) 5 光源 單色器 吸收池 檢測(cè)器 顯示 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便；缺點(diǎn)：光源不穩(wěn)定。 棱鏡 不同波長(zhǎng)的光具有不同的折射率 光柵 光的衍射和干涉。 如酸度控制。 設(shè) ?1是需要的光：當(dāng) E1＞ E2時(shí)，測(cè)得的 A值低，負(fù)誤差；反之，產(chǎn)生正誤差。 （ 2）溶劑不同，同一物質(zhì)的 ?不同，所以應(yīng)注明溶劑。 常將 M與某 L（ 顯色劑）生成具有電荷遷移的配合物，然后進(jìn)行含量測(cè)定 。隨共軛增長(zhǎng)吸收帶紅移 。 影響藍(lán)移因素： 1）溶劑效應(yīng) 極性溶劑使 nπ* 躍遷發(fā)生藍(lán)移 2） pH值 pH值減小，苯胺的 π π* 吸收帶藍(lán)移 n— π 共軛參與少，使分子整體 π 共軛效應(yīng)減少。 ?→ ?*躍遷吸收峰 發(fā)生紅移。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 26 2. ?→ ?*躍遷 鍵類型：碳碳雙鍵、三鍵、共軛雙鍵等 特點(diǎn)：吸收強(qiáng)度大 單個(gè)飽和鍵吸收波長(zhǎng)200nm，如乙烯為165nm。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為 最大吸收波長(zhǎng) λ max ?②不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似 λ max不變。 ?人眼可以比作是定性分析可見(jiàn)光區(qū)分光光度計(jì)。反之，這些不同顏色的光按一定的強(qiáng)度比混合后便又形成白光。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 4 光是一種電磁波 整個(gè)電磁波包括： 無(wú)線電波 微波 紅外光 可見(jiàn)光 紫外光 X射線 ? 射線 共同特點(diǎn)：橫向電磁波，在真空中的傳播速度等于光速，即 c????College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 5 光具有波粒二象性，即波動(dòng)性和粒子性。 ?該方法儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、易于掌握和推廣，是常用分析方法之一 。 UVVis是帶狀光譜？ College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 14 二、 物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系 當(dāng)一束白光通過(guò)棱鏡后就色散成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等顏色的光，它們具有不同的波長(zhǎng)范圍。由于 △ E＝ hν，所以能級(jí)差決定 只能吸收特定波長(zhǎng)的光。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 21 吸收峰 谷 肩峰 末端吸收 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 22 ?①同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。 特點(diǎn)： 200nm 例子：甲烷 125nm， 乙烷 135nm 成鍵作用越強(qiáng)，反鍵軌道能量越高。 影響紅移因素： 引入助色團(tuán) 引入 n— π 共軛，使分子整體共軛效應(yīng)增強(qiáng)。 6）空間異構(gòu) College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 36 藍(lán)移（紫移）： 使化合物的吸收波長(zhǎng)向短波方向移動(dòng)效應(yīng)。 ④芳香族：芳環(huán)共軛躍遷，由 π→π ＊ 躍遷產(chǎn)生，有三個(gè)吸收帶， E E2和 B帶特征。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 44 特點(diǎn)：靈敏度高，實(shí)際工作中常用。 LambertBeer 定律適應(yīng)范圍： College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 51 二、 吸光系數(shù) absorptivity 當(dāng)濃度以 g/l表示時(shí)， k為吸收系數(shù)，用 a表示 ,單位為 L?cm1?g1 ，則 當(dāng)濃度以 mol/l表示時(shí)， k為摩爾吸收系數(shù)，用 ε表示 ,單位為 L?cm1?mol1，則 A=lg(I0/It)=kbc A=lg(I0/It)=abc A=lg(I0/It)=εbc a 與 ε關(guān)系： a = ε/ M (M為摩爾質(zhì)量） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 52 ?與物質(zhì)的本性、溶劑和入射光的波長(zhǎng)有關(guān)，即 （ 1）物質(zhì)不同， ?不同，是物質(zhì)在一定條件下的特性常數(shù)。 正偏離 負(fù)偏離 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 55 a．非單色光 212121121221121 00)(0000000021 10101010IIIIIIIIIIIIT ClEEClEClEClE????????????? －－－－21212100)(00110lglgIIIIClETA ClEE??????? ?當(dāng) E1=E2時(shí)， A=E1CL A～ C 有線性關(guān)系。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 57 a. 吸光物質(zhì)在溶液中發(fā)生化學(xué)變化引起的偏離 ???? ???? H