儀器分析ppt課件(2)(存儲版)
【正文】 個(gè)親和素分子有 4個(gè)生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。用化學(xué)方法制成的衍生物，生物素 羥基琥珀亞胺酯（ biotinhydroxysuccinimide,BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。洗滌。 ? （ 4） 雙位點(diǎn)一步法 ? 在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)（酶標(biāo)儀）加以測定。 ? 熒光偏振的強(qiáng)度與抗原濃度呈反比。 時(shí)間分辨熒光免疫測定法 ? 以鑭系元素螯合物標(biāo)記抗體或抗原，利用熒光發(fā)射體熒光壽命差別而將波長相同的熒光分開的技術(shù)。 ? 在同樣條件下測定樣品，計(jì)算出抗原抗體復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與總放射性強(qiáng)度的比值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出待測抗原的量。 非競爭性結(jié)合反應(yīng)：免疫放射分析 (IRMA)— 用放射性核素標(biāo)記的過量抗體非競爭結(jié)合抗原，經(jīng)固相分離，測定待測樣品中抗原量的分析方法。 要求：高比度、高純度、完整的免疫活性、不能破壞抗原決定簇。 IRMA與 RIA的比較 對表項(xiàng)目 RIA IRMA 反應(yīng)原理 競爭性結(jié)合 非競爭性結(jié)合 反應(yīng)參數(shù)與待檢抗原的關(guān)系 呈反比 呈正比 標(biāo)記物 抗原 抗體 反應(yīng)速率 較慢 高 特異性 較高 高 靈敏度 較高 高 二 . 熒光免疫分析方法 ? 熒光免疫技術(shù)是以熒光素標(biāo)記的特異性抗體或抗原作為試劑，用于相應(yīng)抗體或抗原的分析鑒定和定量測定，主要有熒光抗體染色技術(shù)和熒光免疫測定兩種類型。 ? 固相抗原競爭法 :將大分子抗原包被在固相上成為固相抗原，固相抗原與待測抗原共同競爭限量的 Eu3+標(biāo)記抗體，待測抗原濃度越高，固相抗原結(jié)合的標(biāo)記抗體就越小，所測熒光強(qiáng)度與待測物濃度呈反比。 ELISA現(xiàn)在已成為目前分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。是 ELISA成敗的關(guān)鍵試劑，它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng)，還具有酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用，但不同的酶選用不同的底物 ，將得到不同的顏色反應(yīng) . 酶 底 物 顯色反應(yīng) 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯(lián)苯胺 氨基水楊酸 鄰聯(lián)苯甲胺 2,2‘連胺基 2(3乙基 并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 橘紅色 黃色 棕色 蘭色 藍(lán)綠色 492
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