《儀器分析》ppt課件 (2)(文件)
【正文】 ? 待測抗原和 Eu3+標(biāo)記抗原與固相抗體發(fā)生競爭性結(jié)合，分離剩余的 Eu3+標(biāo)記抗原與 Eu3+標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，在固相中加入增強劑，測定復(fù)合物的熒光強度，熒光強度與待測抗原濃度呈反比。 ? 熒光偏振的強度與抗原濃度呈反比。 酶聯(lián)免疫分析法 一、基本原理 它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標(biāo)儀）加以測定。 （二）間接法 包被固相載體 : 用已知抗原包被 固相載體 加待檢標(biāo)本 : 使相應(yīng)抗體與固相抗原結(jié)合 洗滌，除去無關(guān)的物質(zhì) 加酶標(biāo)抗抗體 : 與固相載體上抗原抗體 復(fù)合物結(jié)合；洗滌，除去 未結(jié)合的酶標(biāo)抗抗體 加底物 顯色 根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進行 該抗原的定性或定量測定 （三）競爭法 此法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體 。 ? （ 4） 雙位點一步法 ? 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。因此測定 IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清 IgM（包括異性 IgM和非特異性 IgM）固定在固相上，在去除 IgG后再測定特異性 ： ? （ 1）將抗人 IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人 。洗滌。 ? （六）應(yīng)用親和素和生物素的 ELISA ? 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。用化學(xué)方法制成的衍生物，生物素 羥基琥珀亞胺酯（ biotinhydroxysuccinimide,BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。 。由于 1個親和素分子有 4個生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（ strepavidin）。洗滌。洗滌除去其他 免疫球蛋白 和血清中的雜質(zhì)成分。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的 ELISA提高到新水平。如待測抗原量多，競爭性地抑制酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合，使固相上結(jié)合的酶標(biāo)抗原量減少。 二、酶及其底物 酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原 , 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物。 在這種測定方法中有 3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體（ 免疫吸附劑） ②酶標(biāo)記的抗原或抗體（ 標(biāo)記物） ③酶作用的底物（ 顯色劑） 測量時，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物）
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