可移動的遺傳因子轉(zhuǎn)座和染色體外遺傳因子(參考版)
2025-05-05 01:21本頁面
【正文】 同源重組與位點特異重組有何不同？ 。 簡述質(zhì)粒 DNA特性。 復(fù)習(xí)題 解釋概念： 轉(zhuǎn)座子、逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子、質(zhì)粒、 遺傳重組、同源重組、位點特異重組 簡述原核生物轉(zhuǎn)座子的類型及組成特點。 ② Xis、 Int、 IHF只能與 attL （ BOP′）或 attR （ POB′）上形成另一種整合體，重組結(jié)果是 使原噬菌體從宿主基因組上切離下來。 ? 整合與切離的反應(yīng)如下： POP′(attP) + BOB′(attB) Int, IHF, Xis Int, IHF BOP′(attL) + POB′(attR) ? 酶蛋白作用的特異性： ① Int、 IHF只能在 attP （ POP′）上形成整合 體，再作用于 attB（ BOB′），繼而切斷、相 互交換重組連接。 宿主 him A基因編碼，對整合起促進(jìn)作用。 ? λ噬菌體 整合需要兩種蛋白： ① 整合酶（ integratase， Int）： ② 整合宿主因子（ integration host factor， IHF） λ噬菌體編碼。 ② 噬菌體和細(xì)菌的 DNA之間有一段很短的 同源序列，重組交換必須通過其中的一個 特定的核苷酸。 POB180。 att B att P POP180。 ? 這些特異位點叫附著點（ attachment site）， 簡稱為 att。 ② 同源重組 后 染色體內(nèi)的 DNA序列一般仍按 原來的順序排列； 位點特異性重組 中 DNA節(jié)段的相對位置發(fā) 生了移動，即 DNA序列發(fā)生重排，從而得 到不同的結(jié)果。 二、 位點特異性重組 概念： 噬菌體基因組整合到細(xì)菌染色體基因組中屬此種重組 特點： ? 在特定的結(jié)合序列部位，有專一的酶催化斷裂 重接 產(chǎn)生精確的 DNA重排 ? 都具有整合作用的兩個基本特征 ⑴ 典型的保守性重組 交換是相互的和保存原先 的 DNA，即 DNA不失去、不合成、不交換對等 部分（有時是一個 DNA分子整合到另一個 DNA 分子中，又稱整合式重組） ⑵ 發(fā)生在噬菌體和細(xì)菌 DNA短同源序列的專一性 核苷酸上 ，需要位點專一性的蛋白質(zhì)因子參與。 （ 4） Red 途徑：為重組缺陷途徑，是 λ噬菌體 專用途徑。 （ 2） Rec F 途徑：在 Rec BCD 途徑不能運(yùn)作 的情況下，大腸桿菌啟動該途徑。 第一： Ruv C 結(jié)合于 Holliday中間體； 第二：改變 DNA構(gòu)象，需用 Mg2＋ 或 Ca2＋ ； 第三：切割，需用 Mg2＋ 。 ⑶ Ruv C 的作用： ? Ruv C 是一種 核酸內(nèi)切酶 專一性識別 Holliday 結(jié)構(gòu)的連接點 。 RecA 蛋白 活性 ? RecA 有 單、雙鏈 DNA 結(jié)合活性 ?RecA 有 ATPase 活性 ?RecA 有啟動一個分子的單鏈侵入到另一雙螺旋分 子的能力，即聯(lián)會同源 DNA 功能： 在 ATP的協(xié)助下， 促進(jìn)各種 DNA分子進(jìn)行同源配對或分子入侵，形成同源配對的聯(lián)合分子。 RecBCD 切割產(chǎn)生 3’單鏈末端 chi位點： 5180。目前發(fā)現(xiàn)的重組熱點， 10Kb出現(xiàn)一個該位點 . 5180。方 4～ 6NT處切斷單鏈 (單鏈內(nèi)切酶 ) ? chi位點： 5180。 片段重組體 拼接重組體 ?RecBCD核酸酶 ?RecA蛋白 ?RuvAB和 RuvC蛋白 （三）、同源重組的酶學(xué) 對大腸桿菌的研究最為深入，主要蛋白質(zhì)有： RecBCD蛋白 ? RecBCD是一種多功能酶， 具有外切核酸酶、解 螺旋酶、 ATP酶和序列特異的單鏈內(nèi)切酶活性。 普遍公認(rèn)的是 1964年提出的 Holliday模型 ， 該模型于 1975年得到改進(jìn)： 片段重組體 —— 基本無重組發(fā)生 ： 拼接重組體 —— 交換重組 ： 切開的鏈與原來斷裂的是同一條鏈，重組
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