環(huán)境生物技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-04 12:13本頁面
【正文】 ? 粗篩、報警，快速、靈敏、經(jīng)濟。 三、 DNA重組試驗 致突變物 → DNA損傷 → 整個基因組的有絲分裂重組增強 → 釀酒酵母 D7的異點等位基因 (trp512/trp527)突變體（ trp)轉(zhuǎn)變?yōu)橐吧? 四、微生物致突變試驗與致癌物的確定 ? 大多數(shù)致癌物具有致突變作用，非致癌物不具有致突變作用。 （三）重組缺陷型菌株試驗 重組缺陷型菌株失去修復(fù)能力， 致癌性物質(zhì)使 DNA受損，重組缺陷型菌株不能生長，原理與聚合酶缺陷型菌株試驗相似。 ? 點試法、混菌法，分別出現(xiàn)抑菌圈和有空白的生長線（抑菌現(xiàn)象）。 （二）聚合酶缺陷型菌株試驗 致癌物使 DNA受損，聚合酶缺陷型菌株在 DNA受損后無修復(fù)能力，不能生存，抑菌圈出現(xiàn)。 R大于 2且具有劑量關(guān)系，則為陽性結(jié)果。 ? 定量試驗：液體培養(yǎng)基（含待測樣品） ,37176。 ? 致突變物 → DNA損傷 → 細菌 SOS修復(fù) → 測定SOS修復(fù)能力 → （通過大腸桿菌 PQ37菌株的顯色反應(yīng)） 二、 DNA損傷修復(fù)試驗 ? PQ37菌株的特點：操縱子融合方法構(gòu)建的，將SOS反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)中的 sfiA基因與編碼 β 半乳糖苷酶的基因 lacZ融合在一起（報告基因）， β 半乳糖苷酶通過 Xgal培養(yǎng)基和 β – ONPG培養(yǎng)基來顯色，分別產(chǎn)生藍色和黃色。 發(fā)光強度為對照管發(fā)光強度的 3倍或以上即為陽性。 方法 細菌復(fù)蘇、增殖、分裝測試管培養(yǎng)（ 20176。 原理 ? 致突變物使發(fā)光細菌 暗變異菌株 突變，恢復(fù)一定的發(fā)光能力。 ? 初篩報警手段。 平皿摻入法：最高的誘發(fā)回變菌落數(shù)為自發(fā)回變菌落數(shù)的 2倍或以上屬陽性結(jié)果。 試驗方法 紙片點試法： 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +菌液 +S9+表層培養(yǎng)基 紙片蘸取待測物至于培養(yǎng)皿中間 培養(yǎng) 37oC,48h,觀察結(jié)果。 哺乳動物微粒體酶： ? 微粒體中含有混合功能的氧化酶系； ? 有降解作用：把化學(xué)物變成低毒或無毒物排出； ? 有激活作用：使化學(xué)物變成具有親電子性質(zhì)，導(dǎo)致毒性增強，成為致突變物或致癌物。 后來一套 6株組氨酸缺陷型菌株： TA700 TA700 TA700 TA700 TA700 的變異。 微生物學(xué)檢測方法的評價 ? 一、基因突變試驗 （一）鼠傷寒沙門氏菌 /哺乳動物微粒體試驗（ Ames試驗） 原理 野生型 his+ 營養(yǎng)缺陷性 his+ 致突變物可使該菌的基因發(fā)生回復(fù)突變。 ? 溶解氧電極測定耗氧量： 瓶塞上的溶解氧電極記錄溶解氧； ? 相對耗氧速率 =污泥的呼吸好氧速率 /內(nèi)源性呼吸好氧速率 x100% 優(yōu)點： ? 簡便 ? 靈敏 ? 快速 ? 經(jīng)濟 缺點： ? 檢測結(jié)果有一定范圍的變異性； ? 不能完全代替哺乳動物毒性試驗。檢
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