核糖體展示技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-04 01:09本頁面
【正文】 核糖體展示技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展，可以使我們更加方便地根據(jù)需要來設(shè)計(jì)和篩選高親和力抗體 ,蛋白 ,多肽 ,酶等，是具有應(yīng)用前景生物篩選工具，在蛋白質(zhì)相互作用 ,新藥開發(fā) ,衛(wèi)生檢驗(yàn) ,食品工程等領(lǐng)域?qū)l(fā)揮其重要作用。該技術(shù)完全在體外進(jìn)行,其文庫容量不受細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的影響 ,庫容量和篩選效率得到很大提高 ,可與其他技術(shù)相組合 ,在體外分子高效表達(dá)和定向進(jìn)化方面具有廣泛的應(yīng)用前景。 發(fā)展趨勢(shì)及前景 隨著對(duì)核糖體展示技術(shù)的進(jìn)一步研究 ,以上問題將逐步得到解決 ,核糖體展示技術(shù)作為一種新興的克隆展示技術(shù) ,必將在蛋白質(zhì)相互作用研究、新藥開發(fā)以及蛋白組學(xué)等方面顯示出更為廣泛的應(yīng)用空間。 問題 ；特別是如何防止 mRNA的降解和形成穩(wěn)固的蛋白質(zhì) 核糖體 mRNA三聚體無疑是該技術(shù)的關(guān)鍵問題。ckthumx 小組利用核糖體展示技術(shù)篩選到 nmol高親和力的 ScFv,之后通過引入 DNA重排技術(shù) ,又將其親和力提高。 用核糖體展示技術(shù)對(duì)未變異的文庫進(jìn)行篩選時(shí) ,可以通 過易錯(cuò) PCR或 (DNA shuffering)等方法引入突變和重組技術(shù) ,增加分子多樣性 ,從而提高獲得高親和力、良好穩(wěn)定性或增加酶活性靶標(biāo)分子的機(jī)率 。將最后一輪篩選到的靶標(biāo)基因與質(zhì)粒連接 ,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，可以得到單個(gè)靶標(biāo)克隆。 ② mRNA的分離 篩選完后，加入含 20 mmol/L EDTA的冰冷緩沖液洗脫 mRNA。 Hanes等認(rèn)為 ,ELISA方法中，抗原包被在塑料表面上，而塑料表面的疏水作用有可能會(huì)影響吸附蛋白的空間構(gòu)象，從而導(dǎo)
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