【正文】 復(fù)制起始的許可因子 （ licensing factor） 調(diào)控 激活狀態(tài)的，為下一次復(fù)制提供起始信號 復(fù)制完成后，核內(nèi)的 licensing factor失活 細(xì)胞質(zhì)中合成新的 licensing factor 核膜的裂解， licensing factor才有機(jī)會 與核物質(zhì)一起進(jìn)入 進(jìn)入細(xì)胞核， licensing factor就會活化 不同點(diǎn) 原核生物 真核生物 起始位點(diǎn) 一個(gè) 多個(gè) (多至千個(gè) ) 前導(dǎo)鏈合成 DNA聚合酶 Ⅲ DNA聚合酶 δ 隨后鏈合成 DNA聚合酶 Ⅲ DNA聚合酶 δ或 ε 引物長短 50～ 100個(gè)核苷酸 10個(gè)核苷酸 岡崎片段長短 1000～ 2022個(gè)核苷酸 100～ 200個(gè)核苷酸 RNA引物水解 DNA聚合酶 Ⅰ 核酸酶 H 修補(bǔ)缺口 DNA聚合酶 Ⅰ DNA聚合酶 β 復(fù)制速度 快 慢 原核生物與真核生物 DNA復(fù)制的不同點(diǎn) 。 ? 當(dāng)不存在 RNA1時(shí)， RNA引物前體形成自身的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，起類似終止子的作用 ? 當(dāng)前體 RNA與 RNA1互補(bǔ)配對時(shí)，類終止子效應(yīng)消失， 引物前體的轉(zhuǎn)錄被繼續(xù)， 阻止了 RNase H加工引物前體 ? Rop蛋白能夠提高前體RNA與 RNA1的相互作用，加強(qiáng)負(fù)調(diào)控作用 質(zhì)粒 Col 1的復(fù)制調(diào)控 負(fù)調(diào)控因子 Rop蛋白和反義 RNA共同控制了 復(fù)制起始所必須的 RNA引物的合成，從而來 控制 DNA復(fù)制的起始 真核細(xì)胞的復(fù)制調(diào)控 （ 1）細(xì)胞生活周期水平調(diào)控 （ 2）染色體水平調(diào)控 （ 3）復(fù)制子水平調(diào)控 ? 真核細(xì)胞中 DNA復(fù)制 3個(gè)水平的調(diào)控 （ 1）細(xì)胞生活周期水平的調(diào)控 也稱限制點(diǎn)調(diào)控 即決定細(xì)胞停留在 G1期還是 S期， 許多外部因素和細(xì)胞因子參與限制點(diǎn)的調(diào)控。 ?RNA1的編碼區(qū)在引物 RNA編碼區(qū)的 5‘末端，轉(zhuǎn)錄方向與引物 RNA相反，因此與引物 RNA的 5’末端互補(bǔ)。 ? 質(zhì)粒 DNA編碼兩個(gè)負(fù)調(diào)控因子 Rop蛋白和反 義 RNA（ RNA1), 它們控制了起始 DNA復(fù)制 必須的引物合成。而在基因組其它區(qū)域的 GATC位點(diǎn)，在 復(fù)制后 min內(nèi)即被甲基化。 復(fù)制調(diào)控主要發(fā)生在起始階段。 復(fù)制子由起始物位點(diǎn)和復(fù)制起點(diǎn)兩部分。 DNA復(fù)制的調(diào)控 ? 大腸桿菌染色體 DNA的復(fù)制調(diào)控 ? ColEI 質(zhì)粒 DNA的復(fù)制調(diào)控 ? 真核細(xì)胞中 DNA的復(fù)制調(diào)控 復(fù)制的調(diào)控 許多現(xiàn)象表明， DNA的復(fù)制是受到調(diào)控的。 ? 腫瘤細(xì)胞端粒酶重新獲得活性，以維持端粒結(jié)構(gòu)致使染色體穩(wěn)定而成為永生細(xì)胞。 ? 體細(xì)胞幾乎沒有端粒酶活性，隨多次細(xì)胞分裂端粒逐漸縮短，細(xì)胞失去增殖能力。 端粒及端粒酶的意義： ? 端粒特別是端粒酶的活性與細(xì)胞的生長、繁殖、衰老凋亡以及腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。 A A C C C C G G G G T TG G G G圖 1 1 6 8 端粒 3 39。 ? 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 1. 由末端單鏈 DNA序列和蛋白質(zhì)構(gòu)成 2. 末端 DNA序列是多次重復(fù)的富含 G、 C 堿基的短序列 ? 功能： 1. 維持染色體的穩(wěn)定性 2. 維持 DNA復(fù)制的完整性 端粒酶 (telomerase) ? 特點(diǎn)： 1. 由 RNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成的復(fù)合物 2. 為特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶，能以自身的 RNA為 模板逆轉(zhuǎn)錄合成端粒 DNA ? 功能： 合成端粒 DNA，維持端粒的長度 爬行模型： 5 39。外切酶活性，需要一種叫 FEN1的蛋白切除 539。 真核生物的聚合酶沒有 539。 The DNA polymerase α /primase plex initiates the synthesis of both DNA strands. Key Concepts 真核生物中還存在 ?、 ?、 ?和 ?等幾種 DNA聚合酶，它們承擔(dān)著 修復(fù)損傷 的功能，但這些修復(fù)酶的忠實(shí)性都很低。 DNA聚合酶 ε與 后隨鏈 合成有關(guān)，在 DNA合成過程中核苷切除以及堿基的切除修復(fù)中起著重要的作用 。 DNA聚合酶 β活性水平穩(wěn)定，主要在 DNA損傷的修復(fù) 中起作用?！?339?！?539。 ?在哺乳動物細(xì)胞中主要有 5種DNA聚合酶 ， 分別稱為 DNA聚合酶 α 、 β 、 γ 、 δ 和 ε 。 因此，人類 DNA中每隔 30,000300,000bp就有一個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)。有復(fù)制起始子的功能 B區(qū)約為 80bp,含 B1,B2,B3三個(gè)功能區(qū)。 酵母染色體 Ⅳ 的著絲粒附近為 ARS1序列 起始點(diǎn)識別復(fù)合物 ARS1分為 A,B,C三個(gè)功能區(qū) , A,B起主要作用 ,C起次要作用。 ORC它是由 6種蛋白質(zhì)組成的啟動。 ? 真核生物的復(fù)制起始位點(diǎn)被稱為自主復(fù)制序列(autonomous replicating sequence, ARS) 這個(gè)序列是 染色體正常起始復(fù)制 所必需的。 ? DNA復(fù)制 只在 S期進(jìn)行 。 v T4 Ligase 可作為重組工具酶。 T4 Ligase 特性： v可連接 DNA與 DNA，也可連接 RNA與 RNA。動物細(xì)胞和噬菌體的連接酶則以 ATP作為能量來源。 ? 連接反應(yīng)需要供給能量。磷酸和 339。 。 鏈的延伸都方向?yàn)?539。 都需要 Mg2+激活 。 DNA Polymerase IVamp。 ? 它能在引物的 3’—OH上以每分鐘約 5萬個(gè)核苷酸的速率延長新生的 DNA鏈，是大腸桿菌 DNA復(fù)制中鏈延長反應(yīng)的 主導(dǎo)聚合酶 。 Core enzyme amp。 生理功能主要是 起修復(fù) DNA的作用 。端RNA引物，使岡崎片段間缺口消失， 保證連接酶將片段連接起來 。 DNA聚合酶 I (coded by polA)不是復(fù)制大腸桿菌染色體的主要聚合酶 ， 它有 3’ → 5’核酸外切酶活性 ,與 DNA聚合酶的校正功能有關(guān) ， 保證了 DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性 。當(dāng)一側(cè)復(fù)制叉前進(jìn)的快，而另一側(cè)前進(jìn)的慢時(shí)，快側(cè)復(fù)制酶則會在 ter位點(diǎn)停止，等待直到慢側(cè)跟上。 ? Tus protein只讓一側(cè)復(fù)制叉通過，使 DNA的復(fù)制在終點(diǎn)位置終止。 ter 3. 復(fù)制的終止 復(fù)制的終止位點(diǎn) 在 DNA上存在著復(fù)制的終止位點(diǎn) 。 前導(dǎo)鏈 Leading strand 后隨鏈 Lagging strand 然后， RNaseH降解 RNA引物， DNA聚合酶 I補(bǔ)齊缺口，再由 DNA連接酶連接兩個(gè)岡崎片段。 ? DNA連接酶 (DNA ligase) 通過生成 3’5’磷酸二酯鍵連接兩條 DNA鏈。 ④ ⑤ ⑥ 引發(fā)體在復(fù)制叉先合成先導(dǎo)鏈的 RNA引物，再合成后滯鏈的引物．（ Primase association with DnaB is transient。end of the sequence defining oriC Formation of this 45bp “open plex” by DnaA protein is ATPdependent. ① ② ② DnaB protein (a hexamer of 50kD subunits) binds to the “open” oriC. DnaB protein is delivered to oriC by DnaC protein assisted by DnaT protein. The addition of DnaB protein pletes assembly of the prepri