【正文】 28 / 28。 (2)抗酸性染色法 抗酸性染色法是鑒別抗酸性桿菌與非抗酸性桿菌的重要方法。 2．鑒別染色法 在鑒別染色法中，常用的有革蘭氏染色和抗酸性染色兩種。 （二)染色方法 1．簡(jiǎn)單染色法 簡(jiǎn)單染色法只用一種染料，使微生物著色。因而在微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察中，染色是一種非常重要的實(shí)驗(yàn)手段。二、顯微鏡觀察使用顯微鏡主要觀察細(xì)胞的形狀，如球形、桿狀、弧形、螺旋形、絲狀、分枝及特殊形狀；細(xì)胞的大小，其中最重要的是細(xì)胞的寬度或直徑；細(xì)胞的排列，如單個(gè)、成對(duì)、成鏈或其他特殊排列方式；特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如鞭毛（有無(wú)鞭毛、著生位置及其數(shù)量）、芽孢（有無(wú)芽孢、形狀、著生位置、孢囊是否膨大）、孢子（孢子形狀、著生位置、數(shù)量及排列）、其他（莢膜、細(xì)胞附屬物，如柄、絲狀物、鞘、藍(lán)細(xì)菌的異形胞、靜止細(xì)胞和連絲體等）、超微結(jié)構(gòu)（細(xì)胞壁、細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)、放線菌孢子表面特征等）；細(xì)胞內(nèi)含物（異染顆粒、聚9羥丁酸等類脂顆粒、硫粒、氣泡、伴孢晶體等）；染色反應(yīng)（革蘭氏染色、抗酸性染色等）；運(yùn)動(dòng)性（鞭毛泳動(dòng)、滑行、螺旋體運(yùn)動(dòng)方式）三、染色法 微生物個(gè)體很小，細(xì)胞又較透明，在顯微鏡下與背景色差相差不大，通常觀察效果不夠理想。在一般情況下，還可分得出生產(chǎn)的菌種是否發(fā)生污染。整合在細(xì)菌基因組中的噬菌體基因組稱為前噬菌體（prophage）。（五）烈性噬菌體烈性噬菌體感染宿主菌后，能在宿主菌細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制增殖，但復(fù)制周期與宿主菌的DNA復(fù)制不同步，繁殖的結(jié)果是產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細(xì)菌，故稱為烈性噬菌體(virulent phage)或裂菌性噬菌體。噬菌體在室溫，4~8℃冰箱能保存6個(gè)月以上，但在普通冰箱凍存室中的保存時(shí)間遠(yuǎn)不如室溫長(zhǎng)久；在液氮中和凍干狀態(tài)下能長(zhǎng)時(shí)間保存。（三）抗原性噬菌體的衣殼蛋白具有抗原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，該抗體能抑制相應(yīng)噬菌體感染敏感細(xì)菌，但對(duì)已吸附或已進(jìn)入宿主菌的噬菌體不起作用，噬菌體仍能復(fù)制增殖。大多數(shù)噬菌體呈蝌蚪形，由頭部和尾部?jī)刹糠纸M成。（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu) 噬菌體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，個(gè)體微小，在光學(xué)顯微鏡下看不見，需用電子顯微鏡觀察。在土壤中，可找到土壤微生物的噬菌體。噬菌體分布極廣，凡是有細(xì)菌的活動(dòng)場(chǎng)所，就可能有相應(yīng)噬菌體的存在。1．滅活疫苗 2．減毒活疫苗 3．亞單位疫苗 4．合成肽疫苗 5．基因工程疫苗 6．DNA疫苗 五、噬菌體 噬菌體（bacteriophage）是感染細(xì)菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。因此進(jìn)行人工主動(dòng)免疫已成為特異預(yù)防病毒性疾病的主要措施。（三）病毒感染的預(yù)防多數(shù)人在患過(guò)某種感染性疾病或隱性感染后，可獲得對(duì)該病的免疫力。此外，還有各種免疫標(biāo)記技術(shù)，如免疫熒光、酶免疫測(cè)定、放射免疫等。乙肝病毒具有自身的DNA多聚酶，此酶陽(yáng)性可作為患者體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制的指標(biāo)之一；反轉(zhuǎn)錄病毒含有反轉(zhuǎn)錄酶，通過(guò)檢測(cè)血清中反轉(zhuǎn)錄酶活性可診斷艾滋病。（2）病毒核酸檢測(cè) 包括各種核酸分子雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增及基因芯片等。因此，用敏感的方法檢測(cè)病毒成分，其診斷價(jià)值能達(dá)到或超過(guò)病毒的分離培養(yǎng)。如可用電鏡區(qū)別能引起皮膚水泡的皰疹病毒和痘病毒，還可對(duì)具有特殊形態(tài)的輪狀病毒、乙肝病毒等做出診斷。包涵體多為圓形或卵圓形，位于胞質(zhì)（如狂犬病病毒）、胞核（如皰疹病毒）或核內(nèi)。要回答這些問題，就需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，要檢測(cè)病原、檢測(cè)病毒成份和檢驗(yàn)免疫反應(yīng)。（三）病毒的異常增殖1．頓挫感染2．缺損病毒3．病毒干擾四、病毒感染的診斷和防治原則病毒的感染和診斷是對(duì)臨床醫(yī)學(xué)而言的。4．裝配與釋放病毒的核酸與蛋白質(zhì)成分子合成后，DNA病毒（除痘病毒外）均在細(xì)胞核內(nèi)組裝；RNA病毒與痘病毒類則在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)組裝。在病毒核酸復(fù)制之前所進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄為早期轉(zhuǎn)錄，翻譯出的蛋白為早期蛋白，早期蛋白是功能性蛋白，主要是病毒復(fù)制所需要的酶和抑制宿主細(xì)胞正常代謝調(diào)節(jié)性蛋白。病毒在復(fù)制亦即生物合成階段，所需的大部分酶類是由宿主細(xì)胞供應(yīng)的，在這階段中已不能自細(xì)胞內(nèi)檢出感染性病毒顆粒，這一時(shí)期稱隱蔽期（eclipse）。3．病毒大分子的合成病毒基因組從核殼中釋放后，一般能在感染細(xì)胞中產(chǎn)生新的病毒顆粒。2．脫殼病毒核酸從衣殼釋放的過(guò)程稱為脫殼（uncoating）。病毒結(jié)合細(xì)胞表面受體后，必須越過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，這個(gè)過(guò)程稱為穿入（penetration）。從病毒進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)過(guò)基因表達(dá)與復(fù)制到子代病毒從感染細(xì)胞中釋放，稱為一個(gè)復(fù)制周期。植物病毒可直接接種于敏感植物葉片或采用細(xì)胞培養(yǎng)等方法進(jìn)行培養(yǎng)。從機(jī)體中取出細(xì)胞或組織，模擬體內(nèi)的生理?xiàng)l件在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存和生長(zhǎng)，稱為細(xì)胞組織培養(yǎng)。噬菌體一般接種于生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)物。4．枯斑 植物葉片上的植物病毒群體。3．空斑和病斑 在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物上的與噬菌斑類似的空斑，稱為病斑。2．噬菌斑　 將少量噬菌體與大量宿主細(xì)胞混合后，將此混合液與45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿中充分混勻，鋪平后培養(yǎng)，經(jīng)數(shù)小時(shí)至10余小時(shí)后，在平板表面布滿宿主細(xì)胞的菌苔上，可以用肉眼看到一個(gè)個(gè)透亮不長(zhǎng)菌的小圓斑，這就是噬菌斑。如動(dòng)物、植物細(xì)胞中的病毒包涵體，有的還可用肉眼看到，例如噬菌體的噬菌細(xì)胞。一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的病毒還含有脂類，糖類等。第二大類蛋白質(zhì)是非衣殼結(jié)構(gòu)蛋白（nonstructure protein，vs蛋白），這種蛋白主要參與病毒核酸的復(fù)制，也有誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答作用。除結(jié)構(gòu)蛋白外，在有包膜病毒中，還有其他類型的蛋白質(zhì)，稱為包膜蛋白，這種蛋白質(zhì)是糖蛋白，與病毒吸附細(xì)胞有關(guān)。（2）病毒的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)是病毒顆粒的主要成份，約占病毒總量的70%，少數(shù)為30%~40%。病毒核酸類型極其多樣，在單鏈DNA（ssDNA）、雙鏈DNA（dsDNA）、單鏈RNA（ssRNA）和雙鏈RNA（dsRNA）4種類型。2．病毒殼體的對(duì)稱性由于病毒核酸與衣殼蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的不同，在形態(tài)上顯示不同的對(duì)稱形式，已明確的有二十面立體對(duì)稱、螺旋對(duì)稱和復(fù)合對(duì)稱三種形式。有些病毒如流感病毒，在核衣殼外還具有稱為包膜（envelope）的結(jié)構(gòu)，有些包膜上還具有刺突。衣殼與核酸核心共同組成核衣殼（nucleocapsid）。核心為核酸，核酸的外層是蛋白質(zhì)外殼，稱為衣殼（capsid）。（二）病毒的結(jié)構(gòu)1．病毒的基本結(jié)構(gòu)具有侵染力、成熟的、位于細(xì)胞外環(huán)境中的單個(gè)病毒顆粒常稱為毒粒（viron）或病毒粒子。病毒的種類繁多，形態(tài)各異。一、病毒的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一） 病毒的形態(tài)病毒個(gè)體極其微小，只有借助電子顯微鏡才能觀察到。根據(jù)其宿主種類將病毒分為微生物病毒，植物病毒和動(dòng)物病毒（圖338）。病毒最初是作為一種能通過(guò)細(xì)菌濾器的因子而被發(fā)現(xiàn)的（Ivanovsky。這些微生物雖小，但均有細(xì)胞結(jié)構(gòu)和自身的代謝系統(tǒng)，并以DNA作為遺傳物質(zhì)。對(duì)四大類微生物細(xì)胞形態(tài)和菌落特征進(jìn)行比較（見書本表格）第五節(jié) 病 毒生命的最小單位是細(xì)胞?？蓮耐寥?、植物殘?bào)w中分離出頭孢霉菌菌種。 5．頭孢霉菌屬頭孢霉菌屬（Cephalosporium）菌其菌絲有隔、分枝、常結(jié)成繩束狀。不同種的分生孢子可產(chǎn)生青、灰綠、黃褐等不同顏色。黃曲霉中個(gè)別菌株能產(chǎn)生黃曲霉毒素。醫(yī)藥工業(yè)上利用曲霉菌生產(chǎn)檸檬酸、葡萄糖酸等有機(jī)酸，以及酶制劑、抗生素等。此外，分生孢子頭和頂囊的形狀、大小、小梗的構(gòu)成、分生孢子梗的長(zhǎng)度等特點(diǎn)也是鑒定的依據(jù)。它的分生孢子梗常由營(yíng)養(yǎng)菌絲分化的足細(xì)胞長(zhǎng)出，在其頂端形成膨大的頂囊，在頂囊表面以輻射狀長(zhǎng)出一層或二層小梗，小梗頂端產(chǎn)生一串圓形的分生孢子。3．曲霉菌屬 曲霉菌屬（Aspergillus）中大多數(shù)為半知菌類，未發(fā)現(xiàn)有性繁殖階段。 根霉菌能產(chǎn)生高活性的淀粉酶，是工業(yè)上重要的發(fā)酵菌種，有的是甾體化合物轉(zhuǎn)化的重要菌株。連接假根的弧形氣生菌絲貼靠培養(yǎng)基表面匍匐生長(zhǎng)，稱為匍匐菌絲。2．根霉菌屬 根霉菌屬（Rhizopus）與毛霉菌屬同屬毛霉菌目，形態(tài)與毛霉菌相似，菌絲無(wú)隔，形成孢子囊孢子。有的菌株有分解蛋白質(zhì)的能力，可用于豆豉、豆腐乳的釀造，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生鮮味和芳香物質(zhì)。 毛霉菌廣泛存在于土壤、蔬菜、水果和富含淀粉的食品中。它的外形呈毛發(fā)狀，菌絲一般呈白色，為管狀分枝的無(wú)隔菌絲。故菌落特征也是鑒定霉菌的重要依據(jù)之一。同一種霉菌，在不同成份的培養(yǎng)基上形成的菌落特征可能有變化。在固體發(fā)酵過(guò)程中污染了這類霉菌，如不及早采取措施，往往造成經(jīng)濟(jì)損失。因菌絲較粗而長(zhǎng)，形成的菌落較疏松，呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍。真菌孢子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、形成方式，在不同種類的真菌中是不同的，故常作為真菌分類和鑒定的依據(jù)。（3）擔(dān)孢子 它是一種外生孢子，它著生在由兩性細(xì)胞核配合后形成的雙核菌絲的頂細(xì)胞上。通常幾個(gè)子囊外圍以外殼組成子囊果。（2）子囊孢子 子囊是一種囊狀結(jié)構(gòu)，其形狀不一。（3）孢子囊孢子 菌絲末端膨大呈囊狀，此為孢子囊，囊內(nèi)含有許多孢子，孢子成熟后破殼而出（圖2．有性孢子有性孢子由同一菌體或不同菌體上的兩個(gè)細(xì)胞融合而成。（2）葉狀孢子 由菌絲內(nèi)細(xì)胞直接形成。它們又可分為小分生孢子和大分生孢子。根據(jù)形態(tài)主要可分為三種：分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。根據(jù)孢子形成方式、孢子的作用以及本身的特點(diǎn)，又可分為各種類型，在分類上具有重要意義。三、霉菌的繁殖方式如何？霉菌的繁殖能力一般都很強(qiáng)，而且方式多樣，主要靠形成無(wú)性和(或)有性孢子。核膜上有直徑為4070nm的小孔，核仁的直徑約3nm。其組成結(jié)構(gòu)與其他真核細(xì)胞相似。酵母菌和霉菌細(xì)胞壁被溶解后，可得到原生質(zhì)體。真菌的細(xì)胞壁可被蝸牛（如大蝸牛）消化液中的酶(包括葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶、甘露聚糖酶等)所消化。實(shí)驗(yàn)證明，根據(jù)細(xì)胞壁組分的不同，可將霉菌分為許多類別，這些類別與常規(guī)的分類學(xué)指標(biāo)有密切關(guān)系。它與纖維素結(jié)構(gòu)很相似，只是每個(gè)葡萄糖上的第二個(gè)碳原子和乙酰氨相連，而纖維素的每個(gè)葡萄糖上的第二個(gè)碳原子卻與羥基相連。除少數(shù)水生低等霉菌的細(xì)胞壁中含纖維素外，大部分霉菌細(xì)胞壁由幾丁質(zhì)組成。1．細(xì)胞壁 厚約100250nm。二、霉菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？霉菌菌絲細(xì)胞均由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、線粒體、核糖體以及內(nèi)含物質(zhì)組成。真菌的孢子與細(xì)菌的芽孢不同，它的抵抗力不強(qiáng)，加熱至60～70℃短時(shí)間內(nèi)即死亡（表12）。孢子萌發(fā)出芽，發(fā)育成菌絲體或形成新的孢子。不同種類的真菌可有不同形態(tài)的菌絲，故有助于真菌的鑒別，但不同種類的真菌也可有相似的菌絲。產(chǎn)生孢子的氣生菌絲又稱為繁殖菌絲。根據(jù)菌絲的分化程度可將其分為：1．基內(nèi)菌絲菌絲向培養(yǎng)基或被寄生的組織內(nèi)生長(zhǎng)，其作用為吸取和合成營(yíng)養(yǎng)以供生長(zhǎng)，故又稱為營(yíng)養(yǎng)菌絲。有些菌絲，從外觀看雖然像多細(xì)胞，但橫隔膜上具有小孔，使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核可以自由流通，而且每個(gè)細(xì)胞的功能也都相同。其生長(zhǎng)過(guò)程只表現(xiàn)為菌絲的延長(zhǎng)和細(xì)胞核的裂殖增多以及細(xì)胞質(zhì)的增加。菌絲的直徑比細(xì)菌、放線菌的菌體橫徑寬，在普通顯微鏡下放大50～400倍即可看清。（一）菌絲 在適宜的環(huán)境條件下，真菌的孢子以出芽方式萌發(fā)，由孢子長(zhǎng)出芽管，逐漸延長(zhǎng)呈絲狀，此結(jié)構(gòu)即菌絲（hypha）。菌絲在光學(xué)顯微鏡下呈管狀，直徑約３10μm，比一般細(xì)菌和放線菌菌絲大幾倍到幾十倍，與酵母菌的相似。本節(jié)要解決的問題一、霉菌的大小是多少？有那些形態(tài)?二、霉菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？三、霉菌如何進(jìn)行繁殖？四、霉菌的群體形態(tài)有何特征?五、常用常見的霉菌的有哪些？各自的特點(diǎn)用途/危害是什么？一、霉菌的形態(tài)與大小怎樣？霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲構(gòu)成。其中毒性最強(qiáng)者是由黃曲霉菌產(chǎn)生的黃曲霉毒素，如黃曲霉毒素(B1，G)、黃米毒素、雜色曲霉素和展青霉素，均可引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌。近年還不斷發(fā)現(xiàn)霉菌能產(chǎn)生多種毒素，嚴(yán)重威脅人畜健康。腐生型霉菌在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中也有十分重要的作用。早在遠(yuǎn)古時(shí)期，我國(guó)勞動(dòng)人民便用于做米曲制醬。霉菌在自然界分布極廣，土壤、水域、空氣、動(dòng)植物體內(nèi)外均有它們的蹤跡。霉菌、酵母菌以至大型真菌如蘑菇等皆為真菌，均屬真核微生物。第四節(jié) 霉 菌霉菌是一些“絲狀真菌”（除大型真菌外）的統(tǒng)稱，和酵母一樣也不是分類學(xué)上的名詞。解脂假絲酵母的檸檬酸產(chǎn)量也較高。在加蓋片的玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上可見假菌絲和具橫膈的真菌絲。麥芽汁斜面上的菌落呈乳白色、黏濕、無(wú)光澤。5．解脂假絲酵母解脂變種解脂假絲酵母解脂變種的細(xì)胞呈卵形或長(zhǎng)形，卵形細(xì)胞大小為（3～5）μm （5～11）μm，長(zhǎng)細(xì)胞長(zhǎng)度可達(dá)20μm。它能以尿素和硝酸作氮源，在培養(yǎng)基中不需要加任何生長(zhǎng)因子即可生長(zhǎng)。從酒坊的酵母沉淀、牛的消化道、花、人的唾液中曾分離到產(chǎn)朊假絲酵母，它也是人們研究最多的微生物單細(xì)胞蛋白之一。麥芽汁培養(yǎng)基上的菌落為乳白色，平滑、有光澤或無(wú)光澤，邊緣整齊或呈菌絲狀。4．產(chǎn)朊假絲酵母 產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞呈圓形、橢圓形和圓柱形，大小(～4．5) μm (7～13) μm。在高溫時(shí)，釀酒酵母比卡氏酵母更快，但在低溫下，卡氏酵母生長(zhǎng)得較快，釀酒酵母繁殖速度最高時(shí)的溫度為7～℃，～34℃?？ㄊ辖湍讣?xì)胞呈圓形或卵圓形，直徑為5～10μm。有性繁殖的子囊內(nèi)含14個(gè)圓形或卵圓形、表面光滑的能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和半乳糖，不能發(fā)酵乳