第十七章基因重組和基因工程習題(參考版)
2025-03-28 06:55本頁面
【正文】 7 / 7。質(zhì)粒是獨立于細菌染色體之外，能自主復制的共價閉合環(huán)狀雙鏈DNA。限制酶的識別和切割位點通常是4～8個bp長度且具有回文序列的DNA片段，主要產(chǎn)生5′突出、3′突出的黏性末端或平端。然后經(jīng)黏性末端堿基配對，再經(jīng)DNA連接酶作用，共價連接成新的重組DNA分子；⑵ 平頭末端連接：將平末端的DNA分子在T4DNA連接酶催化下，使DNA分子的3′OH和5′P進行共價結(jié)合； ⑶ 人工接頭法： 是指利用人工接頭加在平端DNA片段的兩端，然后用相應限制酶切割人工接頭以產(chǎn)生黏性末端，再與帶相同黏性末端的載體相連；⑷ 同源多聚尾連接法：在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化下，在線型載體分子的兩端加上單一核苷酸如dG組成的多聚尾；而在目的DNA分子的兩端加上dC尾，兩者混合退火，然后經(jīng)DNA聚合酶Ⅰ或Klenow填補裂口處缺失的核苷酸，再通過DNA連接酶修復成環(huán)狀的雙鏈DNA。 ４、（1） 制備基因組文庫；（2） 構建cDNA文庫；（3） PCR擴增目的基因；（4） 人工合成DNA技術。２、（1）限制性核酸內(nèi)切酶：識別并特異切割DNA堿基序列；（2）DNA polⅠ：催化缺口平移，制備高比度DNA探針；（3）Klenow片段：合成cDNA第二條鏈，補齊或標記雙鏈DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA體外擴增(PCR)；（5）逆轉(zhuǎn)錄酶：催化合成cDNA；(6) T4DNA聚合酶：聚合補平或標記DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA連接酶：催化2條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵；（8）大腸桿菌DNA連接酶： 應用于黏端DNA或切口間連接；（9）T4DNA連接酶：應用于黏性或平末端DNA的連接；（10）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：給載體或cDNA加上互補的同聚尾、加標記物；（11）堿性磷酸酶：防止載體自身連接、32P標記5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端標記放射性核素。五、問答題 １、 ① 具有獨立復制能力；② 具備多個限制酶的識別位點(多克隆位點)；③ 具有遺傳表型或篩選標志；④ 有足夠的容量以容納外源DNA片段；⑤ 可導入受體細胞。1以噬菌體或細胞病毒為載體構建的重組DNA導入受體細胞并獲得新的表型的過程稱為轉(zhuǎn)導(transduction)。從組織細胞中分離得到純化的mRNA，然后以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成其互補DNA，再復制成雙鏈cDNA片段，與適當載體連接后導入受體菌內(nèi)，擴增，構建cDNA文庫。是由細菌產(chǎn)生的一類能特異識別雙鏈DNA中的特定堿基序列，并在識別位點切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶(簡稱限制酶)。能夠攜帶外源DNA進入受體細胞內(nèi)進行復制或表達的DNA分子，被稱為基因載體。要分離和克隆的相應基因常稱為目的基因?？寺?clone)原指一個親本細胞經(jīng)無性繁殖產(chǎn)生無數(shù)個相同細胞的子代群體的過程。8． DNA、具有獨立復制能力、具有多克隆位點、具有篩選標志、具有足夠的容量、能導入受體細胞四、名詞解釋
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