【正文】 5. 層析缸為何要先用展開劑飽和？若層析缸未先為展開劑飽和，則由于展開劑中各種溶劑的揮發(fā)度不同，在層析過程中，隨著展開劑的不斷揮發(fā)，會使缸內(nèi)展開劑組成不斷改變，而使展開劑的極性發(fā)生改變，從而使各種組分的Rf值發(fā)生改變，分離受到影響。點樣點的起始線應(yīng)在距玻璃板底邊2cm處，防止因點樣太低而原點直接浸入展開劑中。若斑點易擴(kuò)散，則可先點上少許試液，待斑點干后，再點第二次，因為點樣斑點大，會引起分離后的斑點擴(kuò)散，影響展開后的分離度。4. 點樣的要求是什么，為什么要這樣做？點樣時用玻璃毛細(xì)管吸取試液適量，垂直地輕微接觸薄層板表面（注意防止損壞硅膠層）。然后在硅膠G中加入適量的蒸餾水研磨成均勻無氣泡的薄漿狀溶液，迅速倒在玻璃板上，隨即輕輕搖動玻板，把硅膠涂布均勻，使它無氣泡，并保持在水平位置上陰干，若涂布不均勻或有氣泡，待干燥后，就會產(chǎn)生高低不平，或在活化時氣泡破裂，形成小空洞，這樣都影響展開和分離。吸附力強(qiáng)的物質(zhì)相對地移動得慢些，吸附力較弱的物質(zhì)則相對地移動得快些，這樣經(jīng)適當(dāng)時間后，試樣組分就彼此相互分離了。附：1. 吸附層析的基本原理是什么？吸附層析是將吸附劑涂布于玻璃板或金屬板上成為一薄層（～1mm），待分離的試液點在薄層的一端，離邊緣一定距離處，然后在層析缸中用適宜的展開劑展開。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：，而且研磨后要盡快涂布，不然易于凝固而難于涂布。關(guān)于顯色：在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMCNa的板都易糊，尤其是溫度高于100度時，要嚴(yán)格控制加熱顯色的時間。所以要以實際分離樣品需要而定。 c、點樣量過大。b、展開劑選擇不當(dāng)要磨平微量進(jìn)樣器的針尖，簡單的方法就是，在展開缸的蓋子上輕磨（當(dāng)然是靠近中間部分），就很快能解決問題，且很平滑。當(dāng)然，點樣的時候手不能抖動。但要提出樣品溶液不能太濃，濃度太大，點下的樣品不能被硅膠很好的吸收，不利于分離?；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ?。另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。3）展開劑比如氯仿：甲醇：氨水 （10:1:），有機(jī)溶劑的極性，甲醇氯仿，因此在這個展開劑中，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例；如極性太小，可適當(dāng)增大甲醇比例。飽和非常重要，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙上，貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會好一些。這樣水分是慢慢由內(nèi)而外散發(fā)，而不是由外向內(nèi)散發(fā)，避免了表面成膜，里面還在散發(fā)水氣，豈有不裂、不爆的道理！關(guān)于展開劑：分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸。關(guān)于活化出現(xiàn)裂板、爆板的問題，我從沒有遇上過。關(guān)于裂板：板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是板子要在常溫下晾干后，才能在烘箱中活化。薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上，否則難保證板面硅膠的厚度均勻。尤其是載板的四個角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。鋪板時，可以順著板中間倒，也可以順著某個邊緣倒，也可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上，倒時也要注意不要引入小氣泡。2．依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒到薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜薄層板，使吸附劑流至薄層板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜薄層板，使吸附劑回流然后是另外兩個方向，重復(fù)操作，后輕顛幾下薄層板即可。關(guān)于研磨及鋪板要求：1. 硅膠的研磨，當(dāng)然是一個方向了，可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡，也可以適當(dāng)攪拌后在干凈容器內(nèi)超聲，效果都是不錯的。鋪制薄層板要求玻璃板干凈、整潔、不掛水珠的。其實真正洗干凈的玻璃，很快就可以晾干的。關(guān)于薄層板的要求：，沒有劃痕，在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈。）更難能可貴的是，可以收集下面沒有充分溶解的CMCNa。CMCNa的處理也可進(jìn)行離心，5000rpm離心20min。 3）CMCNa是一種高分子材料,而高分子材料的溶解必然都會有一個溶漲、溶解的過程,所以配制的時候,應(yīng)該將稱好的CMCNa少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解,當(dāng)然如果不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計十天半月的也可以用了.在CMCNa的溶解過程中，也可以使用可進(jìn)行加熱操作的磁力攪拌器，大概攪拌5小時，應(yīng)該可得到滿意的效果。2）如果有抽濾裝置可以直接把CMCNa溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了（還有兩個好處一是節(jié)省CMCNa溶液，二是抽濾過的CMCNa溶液的時候不必?fù)?dān)心會把下層的不溶物倒出來了?。?。需注意：1）CMCNa溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾天以后就會變綠，起霉。 總之,要充分發(fā)揮薄層色譜靈活多變的特點[1]。此外,在展開劑選擇方面,有文獻(xiàn)介紹了不同種類的樣品使用不同的展開劑 ,建議在工作、研究中根據(jù)實際需要進(jìn)行選擇,有時候可以把一些常用的展開劑比例稍微變化以后再應(yīng)用。剪好后的板盡量在3日內(nèi)使用,否則硅膠板的邊緣效應(yīng)更強(qiáng),而且吸收實驗室空氣中的復(fù)雜成分后,會使硅膠板表面變黃,甚至在紫外燈下可以顯色。有文獻(xiàn)建議完全密封,放入有藍(lán)色硅膠的干燥器中,但是結(jié)合實際考慮,在合成中應(yīng)用不是很方便,也確實沒有必要。但是這樣做不僅浪費板,而且沒有真正去除邊緣效應(yīng)的影響,只是減小了影響。在實踐中發(fā)現(xiàn),傾斜的角度和原點離邊緣的遠(yuǎn)近有關(guān),離邊緣越近傾斜角度越大,點在中間的斑點幾乎不傾斜。即使前期工作都順利完成,在展開過程中仍然可能因為斑點的移動路徑傾斜而影響判斷。用過的玻璃棒經(jīng)過簡單清洗可立即再次使用,環(huán)保和經(jīng)濟(jì)性能強(qiáng)于毛細(xì)管。操作熟練以后,還可傾斜接觸液面,對取樣量進(jìn)行控制?，F(xiàn)簡述如下:普通的玻璃加工操作即可獲得所需的細(xì)玻璃棒。如何解決這個問題還要經(jīng)過實踐來檢驗。因為在點樣的瞬間,既要使溶液點到板上,又不能把板層上的硅膠扎破,是一項難度較大的操作,扎破硅膠容易導(dǎo)致展開的斑點拖尾而影響判斷。這樣雖然每次取的量可以定量,但在板層上會留下較大的斑點,對板層展開距離的要求就要提高,否則不能對兩個似分未分的斑點做出準(zhǔn)確的判斷。這是因為,為了在板層上點出大小均勻的斑點,每次吸取的量應(yīng)當(dāng)保持大致相同,這要求用毛細(xì)管吸收的溶液在管中保持相同的高度,前提是毛細(xì)管粗細(xì)必須相同,如果不同,更難達(dá)到要求。因此利用薄層色譜法研究反應(yīng)情況是可行的。染料合成屬于有機(jī)反應(yīng),每步反應(yīng)通常在1小時～5小時,不同品種的不同步驟差別很懸殊。例如在燃料合成中：染料分子量大部分在600到1200之間,屬于大分子,但不屬于高分子。另外如果原料和產(chǎn)物均為無色且在紫外光照射下也無吸收的物質(zhì),如十二烷基磺酸鈉、丙三醇等非芳香族物質(zhì)也不適合用此法分析。(1)薄層色譜適用于揮發(fā)性較小、在空氣中比較穩(wěn)定的物質(zhì),象苯胺、甲苯等易揮發(fā)物質(zhì)和重氮鹽等易分解物質(zhì)不適用此法分析,但此類物質(zhì)并不影響薄層色譜的應(yīng)用。 因此希望能找到一種粘合劑，在配置時具有有機(jī)和無機(jī)粘合劑的優(yōu)點，同時勻漿不易凝固，且能用濃硫酸顯色。 有機(jī)黏結(jié)劑——羧甲基纖維素鈉（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。 4 值得進(jìn)一步探討的問題 粘合劑分為無機(jī)粘合劑和有機(jī)粘合劑： 無機(jī)黏結(jié)劑——石膏（硫酸鈣），無機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動作要快，否則勻漿易凝固。(2)正確的方法是先用低溫大約40度左右烘30分鐘左右，或在常溫下涼幾天，然后再用105度活化。 關(guān)于裂板：(1)板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是板在常溫下沒有完全晾干，從表面看是干了，但是最中間的沒有干，所以在烘箱中活化導(dǎo)致裂口。如糖類加熱后會碳化，便于觀察。一般實驗室常用帶有石棉網(wǎng)的電爐加熱。 實驗中常見問題(1)在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種，但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是溫度高于100度時，后改用不加CMC鋪的水板來作，就不會有烘糊現(xiàn)象，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。注意要少量地慢慢混合，因為錳的七氧化物有爆炸性。熒光薄層板檢測：熒光薄層是在硅膠中摻入少量熒光物質(zhì)制成的板，在254nm紫外燈，整個薄層板顯黃綠色熒光，被測物質(zhì)由余吸收了部分照射在此斑點位置的紫外線，而呈現(xiàn)各種顏色。通用的顯色方法有顯色劑顯色（碘蒸氣顯色）、紫外線顯色和熒光薄層板顯色:(1)碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發(fā)干展開劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，完成顯色。 關(guān)于顯色： 通用的顯色方法 分離的化合物若有顏色，很容易識別出來各個樣點。解決辦法：(1)在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸；(2)展開時以氨水飽和；(3)在鋪板時用稀酸溶液（～）代替水制成酸性薄層，在鋪板時用稀堿溶液（～）代替水制成堿性薄層。造成這兩個問題的原因基本相同：(1)對于一些具有酸堿性的化學(xué)成分，在溶液中部分電離，事實上展開時存在分子、離子兩種狀態(tài)，以中性的有機(jī)試劑展開必然會出現(xiàn)兩種層析行為，造成脫尾甚至是一條線；(2)展開劑選擇不當(dāng)；(3)點樣量過大，樣品超載。另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發(fā)，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。(4)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；(5)根據(jù)展開劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。(2)加甲酸是因為該樣品是酸性的，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因為樣品是苷類的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點圓滑，不脫尾，展距良好。(4)鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風(fēng)干燥30分鐘,再升溫干燥至干,注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象不利于分離。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。如有需要，可以雙手10個指頭托住玻璃板，有節(jié)奏的顛簸，使得糊狀硅膠分布勻稱。(2)依據(jù)薄層板使用需要，將適量研好的吸附劑倒在薄層板上，先用小錘將吸附劑蕩勻，傾斜層析板，使吸附劑流至層析板一側(cè)，待吸附劑蓄積一定量后，再反向傾斜層析板，使吸附劑回流；然后是另外兩個方向，重復(fù)上述操作，后輕顛幾下薄層板即可。即好。如果還解決不了那就只好放棄這塊玻璃板了。（真正洗干凈的玻璃，很快就可以晾干。 關(guān)于薄層板的要求：(1)載板要求平滑清潔，沒有劃痕，在使用前可用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈。繼續(xù)加到水中，還可以繼續(xù)配制使用。倒出上清液，上清液非常清，也同時消除了過濾過程中可能發(fā)生的污染。關(guān)于CMCNa的后處理，過濾，或者抽濾都可以，有的實驗者覺得可能速度很慢，而且又容易浪費。如果有抽濾裝置你可以直接把CMCNa溶液濾過，就可以不必等它沉淀再取上清液了，這樣做還有兩個好處：一是節(jié)省CMCNa溶液，二是倒濾過的CMCNa溶液的時候不必?fù)?dān)心會把下層的不溶物倒出來。(3)在CMCNa的溶解過程中，可以使用有加熱操作功能的磁力攪拌器，大概攪拌5小時，應(yīng)該可得到滿意的效果。(2)%%比較合適，％～％最為實用，濃度高了，將來顯色時,如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑。CMCNa溶液煮了以后不能再用冷水兌，否則，幾