[理學(xué)]6第六章核酸(參考版)
2025-02-21 20:45本頁面
【正文】 直接法 ? PCR 測序法： Sanger法 + , Saiki + Taq DNA polymerase ? Sequencing of RNA: RNAcDNASequencing ? 見 Flash： DNA測序 生物化學(xué) nucleic acid 。 間接法 ? 化學(xué)測序法： Maxam amp。 ? 體內(nèi)合成 ： DNA復(fù)制 ? 固相合成技術(shù)： 亞磷酸三酯法 ，見 P521（自學(xué)） ? 人工體外合成 ： 1985， K. Mullis, the 1993 Nobel Prize?？赏ㄟ^調(diào)節(jié)復(fù)性溫度、時間、離子強(qiáng)度、 pH值 等條件來 控制雜交 的選擇性。它也可以與在 某些區(qū)域有互補(bǔ)序列 的 異源 DNA單鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 ? DNA復(fù)性的 程度 、 速率 與復(fù)性過程的 條件 有關(guān)：將熱變性的 DNA驟然 冷卻至低溫時 ， DNA不可能復(fù)性 。 生物化學(xué) nucleic acid 附： DNA變性的特 性－ 2 ? 檢 測： 紫外吸收的增色效應(yīng) . ? 影響因素： DNA自身的（ G + C） %，離子類型、強(qiáng)度、濃度 ? RNA 變性行為所引起的性質(zhì)變化沒有 DNA 明顯 ? 生物化學(xué) nucleic acid Change of Adsorption in denaturation 生物化學(xué) nucleic acid Effects of DNA chainpair and (G+C)% on the denaturation 生物化學(xué) nucleic acid Renaturation ? 變性 DNA在適當(dāng)?shù)臈l件下，兩條彼此分開的 單鏈 可以重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程。 經(jīng)驗計算公式：（ G+C)%=() ? 結(jié)構(gòu)變化： 當(dāng) DNA的稀鹽溶液加熱到 80100℃ 時，雙螺旋結(jié)構(gòu)即發(fā)生解體，兩條鏈彼此分開形成無規(guī)線團(tuán)。 生物化學(xué) nucleic acid denaturation 生物化學(xué) nucleic acid 附： DNA變性的特 性 1 ? 突變性： 變性過程在很窄溫度區(qū)間內(nèi) Tm 完成 。 ? 變性核酸將 失去 其部分或全部的 生物活性 。 ? 酶水解 生物化學(xué) nucleic acid V、 核酸的變性、復(fù)性與雜交 denature ? 核酸雙螺旋區(qū)的多聚核苷酸 鏈間的氫鍵斷裂 ，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。 生物化學(xué) nucleic acid ? 生物體內(nèi)存在多種核酸水解酶，可催化水解多聚核苷酸鏈中的 磷酸二酯鍵 。 ? 原 因： 這種水解性能上的差別，與 RNA 2′ OH 的鄰基參與作用有 很大的關(guān)系。 III、化學(xué)性質(zhì)： 兩性電離及等電點 生物化學(xué) nucleic acid IV、化學(xué)性質(zhì)： 水 解 ? 酸或堿水解： ? 核酸分子中的磷酸二酯鍵可在 酸、堿性 條件下水解切斷。 H N N + H 2 N O C H 3 N N R N N R N + N N H 2 C H 3 N N + N H 2 C H 3 N N R N N N H 2 N + N R C H 3 N + N R C H 3 H N N H 2 N O N + N N H 2 O R C H 3 生物化學(xué) nucleic acid ? 為什么能夠兩性電離： 與蛋白質(zhì)相似，核酸分子中的 酸性基團(tuán)（磷酸基） 堿性基團(tuán) （氨基 ) ? 等電點 ：分子中的磷酸是一個 中等強(qiáng)度的酸 ，而堿性（氨基）是一個 弱堿 ，核酸的等電點比較低。氯化銫梯度離心場中， 上－下： PNline DNAcircle DNA/plasmid DNA ? 電 泳 ：泳動方向？ ? 紫外吸收： 生物化學(xué) nucleic acid 附： 核酸的紫外吸收 ? 嘌呤堿 和 嘧啶堿 具有 共軛雙鍵 體系，一般在 260nm 左右有最大吸收峰 ? 具有 增色效應(yīng) 和 減色效應(yīng) 可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù) ，如： DNA A260/A280 DNA , RNA 為 生物化學(xué) nucleic acid *不同核苷酸衍生物的 UV 生物化學(xué)
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