bca法測蛋白濃度課件(參考版)
2025-01-22 07:59本頁面
【正文】 29 歡迎大家提寶貴意見！ 。 結(jié)合幾種蛋白質(zhì)的等電點，為什么將點樣端置 于陰極？ 為什么跑在最前面是清蛋白？而跑在最后面是 r球蛋白？ 如何辨認各條帶？ 請簡要寫出操作流程圖。 紫外分光光度計的使用 28 下次實驗：血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳 預(yù)習(xí)要點： 復(fù)習(xí)蛋白質(zhì)兩性解離。 ? 6）測定。 ? 4）調(diào)節(jié) “ 0”點。 ? 3）固定靈敏度檔。 思考 27 ? 1）預(yù)熱儀器。 注意事項 26 ?試比較 BCA法與雙縮脲、 Lowry法的異同。 待測樣品濃度在 50～ 2022微克／毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。 實驗步驟 25 注意事項 紫外分光光度計的正確使用。 以蛋白質(zhì)含量為橫坐標，光吸收值為縱坐標繪制標準曲線。 23 實驗步驟 （二）操作 表 1 BC A 法測定蛋白質(zhì)含量 管號試劑（ mL ） 空白管 1 2 3 4 5 測定管 標 準 蛋 白 溶 液（ 1 . 5 m g / m l ） — — 蒸餾水 — — 待測樣品 — — — — — — BCA 工作液 蛋白質(zhì)含量（ μ g ） 30 60 90 120 150 24 將上述各管混勻后于 37176。 （ 4）蛋白質(zhì)標準液：準確稱取 150mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸餾水中，即為 。 （ 2）試劑 B： 4%硫酸銅。 實驗?zāi)康?實驗?zāi)康? 20 實驗原理 ? BCA(bicinchoninic acid,二辛可酸）堿性條件下，蛋白將 Cu++還原為 Cu+， Cu+與 BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在 562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。 ? 721型分光光度計的使用。 SDS 最好的方法； 干擾物質(zhì)少； 顏色穩(wěn)定； 顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 BCA 蛋白質(zhì)定量檢測 靈敏度高，最小檢測量達 ? g 快速45 分鐘內(nèi)完成測定 堿性條件下，蛋白將Cu++還原為 Cu+， Cu+與BCA 試劑形成紫顏色的絡(luò)合
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