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bca法測蛋白濃度課件(參考版)

2025-01-22 07:59本頁面
  

【正文】 29 歡迎大家提寶貴意見! 。 結(jié)合幾種蛋白質(zhì)的等電點,為什么將點樣端置 于陰極? 為什么跑在最前面是清蛋白?而跑在最后面是 r球蛋白? 如何辨認各條帶? 請簡要寫出操作流程圖。 紫外分光光度計的使用 28 下次實驗:血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳 預習要點: 復習蛋白質(zhì)兩性解離。 ? 6)測定。 ? 4)調(diào)節(jié) “ 0”點。 ? 3)固定靈敏度檔。 思考 27 ? 1)預熱儀器。 注意事項 26 ?試比較 BCA法與雙縮脲、 Lowry法的異同。 待測樣品濃度在 50~ 2022微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。 實驗步驟 25 注意事項 紫外分光光度計的正確使用。 以蛋白質(zhì)含量為橫坐標,光吸收值為縱坐標繪制標準曲線。 23 實驗步驟 (二)操作 表 1 BC A 法測定蛋白質(zhì)含量 管號試劑( mL ) 空白管 1 2 3 4 5 測定管 標 準 蛋 白 溶 液( 1 . 5 m g / m l ) — — 蒸餾水 — — 待測樣品 — — — — — — BCA 工作液 蛋白質(zhì)含量( μ g ) 30 60 90 120 150 24 將上述各管混勻后于 37176。 ( 4)蛋白質(zhì)標準液:準確稱取 150mg牛血清白蛋白,溶于100mL蒸餾水中,即為 。 ( 2)試劑 B: 4%硫酸銅。 實驗目的 實驗目的 20 實驗原理 ? BCA(bicinchoninic acid,二辛可酸)堿性條件下,蛋白將 Cu++還原為 Cu+, Cu+與 BCA試劑形成紫顏色的絡合物,測定其在 562nm處的吸收值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。 ? 721型分光光度計的使用。 SDS 最好的方法; 干擾物質(zhì)少; 顏色穩(wěn)定; 顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 BCA 蛋白質(zhì)定量檢測 靈敏度高,最小檢測量達 ? g 快速45 分鐘內(nèi)完成測定 堿性條件下,蛋白將Cu++還原為 Cu+, Cu+與BCA 試劑形成紫顏色的絡合
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