緒論醫(yī)學細胞生物學(參考版)
2025-01-21 02:19本頁面
【正文】 。 RNA干涉技術的應用： 基因功能的研究；基因敲除；基因治療的 新策略；藥物篩選 63 第 1章 小 結(jié) ，舉例說明其研究成 果為臨床醫(yī)學解決哪些實際問題？ 。 反義技術的應用： 基因功能研究；病毒基因組功能的研究；作為藥物；反義核酸抑制癌基因 62 RNA干涉（ RNA interference， RNAi） : 由雙鏈 RNA（ dsRNA）介導的、序列特異 的轉(zhuǎn)錄后基因沉默機制，又稱 RNA干擾。 擴增倍數(shù) =2n（ n：擴增周期） PCR模板 DNA取材： 細胞、發(fā)根、精斑、血斑、已制備成的標本、木乃伊 （二）聚合酶鏈反應技術 59 引物：能與模板 DNA兩條鏈上的各一段序列互補的寡核苷酸（ 15～ 20bp） 上游序列： 5′ TTTGGAGGCAAGCAAGCA G 3′ PGC1基因引物序列： 擴增的 DNA片段長度： 508bp 5′ TATTTAGGGTTTTGCCAAGG 3′ 下游序列： 60 500bp Marker PCR產(chǎn)物 508bp 2%瓊脂糖電泳檢測 PGC1基因 PCR擴增產(chǎn)物 Marker：標準分子量 61 （三）反義技術與 RNA干涉技術 反義核酸： 與有功能的 RNA（主要是 mRNA）互補結(jié)合，并干擾其功能的 RNA或 DNA。 58 聚合酶鏈反應（ PCR）： 利用耐熱的 DNA聚合酶 ,以一對與模板 DNA互補的寡核苷酸為引物，在體外模擬體內(nèi)的 DNA復制過程，即進行變性、退火和延伸三個階段（循環(huán) 30次），使目的DNA擴增到約 106個拷貝，既 100百萬倍。 ：單堿基改變的檢測 。 （ 基因探針 ） 是一段與目的基因相互補的核酸序列 （ DNA或 RNA） ， 其長度不一 ， 可為完整基因亦可為其一部分 。 54 9 12 t(9q/12q) t(9p/12p) 利用 FISH技術檢測染色體易位 55 56 DNA探針技術 DNA片段作為探針與待測樣品 DNA或其片段進行核酸分子雜交 ， 判斷二者同源性程度 。 ?1992年運用這種策略已能在中期染色體和間期細胞同時檢測 7個探針。 52 ?固定生物樣本并準備顯微鏡涂片 ?預先調(diào)節(jié)顯微鏡 ?標記探針 ?對目標 DNA進行變性 ?進行原位雜交和雜交后洗滌 ?免疫細胞化學染色 ?顯微鏡觀察 熒光原位雜交（ FISH）實驗程序 （是一種多步驟的實驗方法） 53 ?現(xiàn)已可用不同的熒光染料同時進行多重原位雜交，顯示出不同的熒光色澤。 探針不是放射性的而是將熒光染料與抗體蛋白結(jié)合進行檢測 。 51 ?熒光原位雜交 （ florescence in situ hybridization, FISH） 是一種非放射性原位雜交方法 。 所謂原位即指標本上 DNA原位變性 ， 在利用放射性或非放射性標記的已知核酸探針雜交后 ，通過放射自顯影或非放射性檢測體系來檢測染色體上特異 DNA或 RNA順序 ， 可用放射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的最高頻率或熒光的強弱來確定探針的位置
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