【正文】 。給藥后，在規(guī)定時間內(nèi)不引起可能死亡的任何反應(yīng)不屬于異常毒性檢查范圍，不作為判斷結(jié)果的依據(jù)。 ? (3) 試驗操作粗暴會導(dǎo)致小鼠應(yīng)激和異常反應(yīng)，給試驗帶來不良影響。 ? (1) 鼠盒內(nèi)小鼠數(shù)量不宜過多，以避免發(fā)熱出汗影響試驗結(jié)果。給藥完畢后，拔出針頭，放鼠盒中，觀察即時反應(yīng)，并作記錄。 注射完畢后 ，拔出針頭 ， 放鼠盒中 ， 觀察即時反應(yīng) ， 并作記錄 。 ? (3) 皮下注射 握小鼠 ， 同腹腔注射法 ， 用75%乙醇擦拭小鼠腹部注射部位 。 針頭由小白鼠腹部左側(cè)皮下注入 ， 并使針頭在皮下平行通過腹部中線后 ，進入右側(cè)腹腔部位 ， 切勿使針頭向上 ， 以防針頭刺傷內(nèi)臟而死亡 。 ? (2) 腹腔注射 一手握小鼠 ， 用拇指和食指捏住小鼠頸背部 ， 用無名指及小指固定其后肢及尾腹部向上 。注射完畢后，拔出針頭，在注射部位止血后，取出小鼠，放鼠盒中，觀察即時反應(yīng)，并作記錄。尾靜脈注入供試品溶液，注射速度 4～ 5s，如注射部位發(fā)白且推入藥品時有阻力，表示針頭未插入靜脈內(nèi)，應(yīng)重插。 ? 除另有規(guī)定外，取小鼠 5只，按該藥品項下規(guī)定的給藥途徑，每只小鼠給予供試液 ，給藥途徑分為以下幾種。 ? (2) 注射液的稀釋 用 75%乙醇棉球消毒安瓿頸部，精密量取一定量藥液，按規(guī)定濃度，加精密量取的一定量溶劑，混勻。 ? 試驗動物在稱重前，自然飽腹。雌鼠不得有孕。 ? 3．實驗動物 ? 采用昆明種小白鼠，須健康無傷，毛色光滑，眼睛紅亮，活潑，體重 17～ 20g。 ? 1．儀器與用具 ? 壓力蒸汽滅菌器、天平、小鼠固定器和支架、注射器、大稱量瓶、吸量管、移液管、小燒杯、胃管灌注針頭。 ? （詳見附錄八）。否則，應(yīng)另取一只貓復(fù)試。 ? 如 dΤ所致反應(yīng)均小于 ds所致反應(yīng)值的一半，則判為供試品的降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定；如果 dΤ所致的反應(yīng)超過 ds所致反應(yīng)的一半，則按上述順序再注射4針，并按相同方法分別比較。 4針的順序為 ds、 dΤ， dΤ、 ds。如果 ，同時相應(yīng)各劑量所致反應(yīng)的平均值有差別，則認為該貓的靈敏度符合規(guī)定。相鄰兩針間隔應(yīng)一致 (不少于 3～ 5min)，并應(yīng)在前一針反應(yīng)恢復(fù)后再進行下一針注射。 5．降壓物質(zhì)檢查法 ? (4) 供試品的檢查 ? ① 靈敏度測定 打開動脈夾后，觀察貓的血壓。 ? ② 動脈的分離與插管 用手術(shù)彎形剪刀剪去頸部毛，再用鑷子將咽部皮膚提起，用剪刀沿中線自甲狀軟骨下方剪至胸骨上緣，在胸鎖乳突肌與頸闊肌之間分離出一側(cè)頸動脈后，再把與動脈相連的神經(jīng)分開，剪口插入動脈管，扎緊并固定好，將動脈插管與記錄儀之間的螺旋夾打開，打開記錄儀觀察走紙，檢查結(jié)扎是否嚴(yán)密，走紙不下滑即可。 5．降壓物質(zhì)檢查法 ? (3) 動脈、靜脈的分離與插管 ? ① 股靜脈的分離與插管 用彎形剪刀剪干凈手術(shù)部位的毛，用鑷子將近膝部、股內(nèi)側(cè)的皮膚剪開，分離出一側(cè)股靜脈，剪一小口，插入靜脈插管、扎緊并固定于貓腿上。 5．降壓物質(zhì)檢查法 ? (1) 手術(shù)前的準(zhǔn)備 將靜脈插管用乳膠管與灌滿氯化鈉注射液的雙向活塞裝置連接 ? 好，并排除氣泡；將動脈插管用三通與灌有 1/2氯化鈉注射液的制壓瓶和信號轉(zhuǎn)換裝置連接好，排除氣泡；制壓瓶保持一定壓力；準(zhǔn)備好自動平衡記錄儀 (或多導(dǎo)生理儀 )；接通電源開啟記錄儀，檢查運行是否正常。如供試品為原料藥，則精密稱定適量，按效價或含量計算加水量。臨用前，用氧化鈉注射液稀釋成 。 3．試驗動物 ? 降壓物質(zhì)檢查用貓應(yīng)毛色光滑，眼睛有神，無病癥，鼻孔無黏液，肛門清潔干燥，皮下無腫塊，動作敏捷，體重 ，雌雄均可，雌貓無孕。 l．儀器與用具 ? 自動平衡記錄儀、分析天平 (十萬分之一 )、電冰箱、直形剪刀、彎形剪刀、止血鉗、鑷子、眼科直形小鑷子、彎頭小鑷子、彎頭小剪刀、手術(shù)縫合針、注射器 (1mL， 2mL，5mL， 10mL)、注射針頭 (5號， 9號 )、 A類吸量管 (1mL， 2mL， 10mL)、具塞試管 (25mL， 50mL)、燒杯 (100mL)、雙向活塞管、量杯 (100mL)、脫脂棉、紗布、線繩、乳膠管、動靜脈插管、手術(shù)縫合線等。 6．原始記錄 ? （詳見附錄六、附錄七）。 ? (2) 供試品熱原檢查不合格 初試 3只中，體溫升高大于或等于 ℃ 超過 1只，或復(fù) ? 試的 5只中，升溫大于或等于 ℃ 的家兔超過 1只，或初試、復(fù)試 8只家兔的升溫總數(shù)大于 ℃ 時，均判斷供試品熱原檢查不合格。如 3只家兔中有 1只體溫升高 ℃ 或 ℃ 以上，或3只家兔體溫升高均低于 ℃ ，但體溫升高的總和達 ℃ 或 ℃ 以上，應(yīng)另取 5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。 4．注射后家兔體溫的測量 ? 注射后，每隔 30min測量體溫 1次，共測 6次。 ? 注射前先用 75%酒精棉擦耳朵邊緣，用小鑷子將除熱原的注射器和針頭套好，按規(guī)定劑量抽取溫?zé)嶂良s 38℃ 的供試品溶液，由耳靜脈徐徐注入。 3．供試品溶液的注射 ? 經(jīng)測定，家兔體溫符合要求后 15min內(nèi)，進行耳靜脈注射。當(dāng)日使用的家兔體溫應(yīng)在 ～ ℃ 范圍內(nèi)，且所有家兔體溫之差不得超過 1℃ 。 三、檢查操作方法 ? 2．家兔體溫的測量 ? (3) 體溫預(yù)測 家兔置于固定器中至少休息 lh后，開始測量第 1次體溫，隔 30min測第 2次體溫。 三、檢查操作方法 ? 2．家兔體溫的測量 ? (1) 家兔的固定 左手抓住家兔的雙耳，右手托住家兔的尾部，從飼養(yǎng)籠放到臺秤上稱重，并把體重記在兔卡上，而后放入固定器中固定。 ? (3) 如供試品溶液注射劑量 ≥3mL/kg，應(yīng)在注射前預(yù)熱至 38℃ 。 三、檢查操作方法 ? 1．供試品溶液的制備 ? (1) 如供試品為原料藥，則精密稱定適量，根據(jù)其效價或含量計算加水量，稀釋至所需濃度。此外實驗室要安靜。 二、家兔的挑選與準(zhǔn)備 ? 2．檢查前的準(zhǔn)備 ? 查前 1～ 2天內(nèi)，供試家兔應(yīng)在與實驗室相同溫度的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，二者溫差不大于℃ 。升溫達 ℃的家兔，仍按上法挑選。 ? (2) 試前 3～ 7天內(nèi)預(yù)測體溫，每半小時一次，共 8次，體溫在 38~℃ 之間，高低 ? 溫差小于 ℃ 的家兔可用。 二、家兔的挑選與準(zhǔn)備 ? 1．家兔的挑選 ? (1) 選擇健康無傷，體重為 ～ ，雌兔應(yīng)未孕。 ? (3) 溫度計的校正 ? 測量家兔體溫應(yīng)使用精密度為 177。注射針頭用自來水沖洗后，在 2%碳酸氫鈉溶液中煮沸 15min后，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗 3遍。 一、儀器、用具、試劑的準(zhǔn)備 ? 1．儀器、用具、試劑 ? 家兔升溫法中所需的儀器、用具和試劑有：分析天平 (萬分之一 )、熱原測試儀、電熱 ? 干燥箱 (帶自動控溫裝置，最高溫度應(yīng)達 300℃ )、超凈工作臺、恒溫水浴 (38℃ )；時鐘、煮鍋、金屬飯盒、金屬吸管筒、臺秤、兔固定器、肛門溫度計或測溫儀、注射器 (2mL， 5mL， l0mL，20mL， 30mL)、注射針頭 (6號、 7號 )、吸量管 (1mL， 2mL， 5mL， 10mL)、稱量瓶 (30mm 60mm)和廣口瓶（ 100mL， 250mL)；75%酒精棉、甘油 (或凡士林 )、 2%碳酸氫鈉溶液、注射用水、氯化鈉注射液。家兔被注射一定量的熱原后，一般 15～ 30min體溫開始上升， 70～120min達到最高峰。 8．原始記錄 ? （詳見附錄五）。 ? ④ 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和 (或 )無菌操作不當(dāng)引起的。 ? ② 回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。 7．無菌檢驗結(jié)果判斷及報告 ? 當(dāng)符合下列至少一個條件時，方可判實驗結(jié)果無效。 陰性試驗只是不加樣品 ， 一切操作與檢查樣品相同 。 7．無菌檢驗結(jié)果判斷及報告 ? ③ 復(fù)試時 ， 取同量供試品 ， 依法重試 ， 復(fù)試結(jié)果除陽性對照管外 ， 其他各管均無菌生長 ， 判供試品檢查合格；復(fù)試結(jié)果其中任一培養(yǎng)基管有菌生長 ，應(yīng)判供試品無菌檢查不合格 。 ? ① 第一次檢查結(jié)果供試品的好氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基管及真菌培養(yǎng)基管均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)檢查證明無菌生長，均判為供試品無菌檢查合格。 7．無菌檢驗結(jié)果判斷及報告 ? 《 中國藥典 》 (2022年版 ) 的無菌檢查結(jié)果判斷。陽性對照管在 24h應(yīng)有菌生長。輕輕搖動，使供試品與培養(yǎng)基混合。 ? 供試品如為青霉素類藥品，接規(guī)定量取供試品，分別加入足夠使青霉素滅活的無菌青霉素酶溶液適量，搖勻，混合 (亦可按薄膜過濾法檢查 )。 ? 供試品如為腸線、縫合線，取最小包裝 5個，拆開包裝，共取 11股，接種于足以浸泡