沈萍微生物學第八章(參考版)
2025-01-19 04:33本頁面
【正文】 項目 進化速度 進化對象 進化 周期 影響對象 突變效率 常規(guī)定向進化 緩慢進化 整個基因組 多年 完整基因組 低 DNA Shuffling 快速進化 特定基因 / 操縱子 /病毒 幾天 部分基因組 高 DNA Shuffling與常規(guī)定向進化的比較 類 型 示 例 特 性 活性增加倍數(shù) 潛在應用領域 抗 體 人源抗體 親和性 400 生物制藥 酶 天冬氨酸轉氨酶 催化特異性 10， 000 生物制藥 β 內酰胺酶 抗生素抗性 32， 000 抗生素 枯草桿菌蛋白酶 E 耐熱性 65℃ 耐熱時間 17 200 工業(yè)酶 細胞因子 人類干擾素 抗病毒 285， 000 基因治療 腫瘤抑制因子 P53 37℃ 半衰期 12 基因治療 代謝途徑 砷酸鹽代謝途徑 砷酸鹽解毒 40 生物制藥 汞代謝途徑 汞解毒 12 生物制藥 部分 DNA Shuffling技術的研究成果 作業(yè) : ? 基因組，轉座因子，營養(yǎng)缺陷型，完全培養(yǎng)基，基因重組，普遍性轉導與局限性轉導，原生質體融合 ? 何謂質粒？試述質粒的特點 ? 大腸桿菌四種菌株的特點及相互關系 ? 轉化、轉導、接合的本質區(qū)別 ? 用細菌培養(yǎng)物經紫外線照射后涂布在有 ? Str的培養(yǎng)基上，在有光條件下培養(yǎng)，結果沒有篩選出 str抗性菌株，為什么？ ? 利用紫外線誘變，設計一個實驗方案用于篩選 his菌株。 紙片 4: 酵母水解液 ?（ 2） .抗阻遏和抗反饋突變型篩選 ?原理：選擇結構類似物抗性突變株 ?抗阻遏： 調節(jié)基因突變 阻遏蛋白失活 不能與代謝產物的結構類似物結合 阻遏蛋白不起阻遏作用（反應的第一個酶繼續(xù)合成） 終產物照樣合成 ?抗反饋 ： 變構酶基因突變 變構酶不能與結構類似物結合（仍能與底物結合） 終產物照樣合成 ?（ 3). 抗性突變株 ? 抗生素抗性 提高抗生素產量 ? 條件抗性 由于環(huán)境不同，表型可 “ 野生型 ” ，也可突變型。 紙片 2:維生素混合液 。 C3 檢出缺陷型 ?逐個檢出法 ?影印檢出法 ?夾層培養(yǎng)法 ?限量補給法 ① 逐個檢出法 ② 影印檢出法 ③ 夾層培養(yǎng)法 ④ 限量補給法 在含少量的 （ %） 蛋白胨的MM上培養(yǎng) , 大菌落為野生型 小菌落的為缺陷型 。將 5BU 加入培養(yǎng)基內，使其終濃度一般為 10 ～ 20μg/ml ，混勻后倒平板，涂布菌液，使其在生長過程中誘變，然后挑單菌落進行測定。處理一定時間后，在紅光燈下，吸取一定量菌液經稀釋后，取 涂平板，或經暗培養(yǎng)一段時間后再涂平板。然后，將 3 ～ 5ml 細胞懸浮液置 6cm 培養(yǎng)皿中，置于誘變箱內的電磁攪拌器上，照射 3 ～ 5 分鐘進行表面殺菌。 ? DNA化學裂解反應 堿基 堿基修飾試劑 堿基修飾反應 主鏈斷裂試劑 G 硫酸二甲酯 鳥嘌呤甲基化 哌啶 G+A 蟻酸 脫嘌呤化 哌啶 C+T 肼 嘧啶開環(huán) 哌啶 C 肼（加鹽） 胞嘧啶開環(huán) 哌啶 ? 5－ GATCACTACTG－ 3 ? [γ32P] dATP ? 5－ * GATCACTACTG－ 3 GATCACTACTG GATCACTACTG GATCACTACT GATCACTAC G GATCACTA GATCACTAC GATCAC GATCA GATCACT GATC ? GA GATCAC ? G GATC ? GAT G反應 G+A反應 C+T反應 C反應 ? G G + A C + T C 5－ * GATCACTACTG 5－ * GATCACTACT 5－ * GATCACTAC 5－ * GATCACT 5－ * GATCACTA 5－ * GATCAC 5－ * GATCA 5－ * GATC 5－ * GAT 5－ * GA 5－ * G 第六節(jié) 真核微生物的遺傳學特性 ? 一 .酵母菌的接合型遺傳 ? 二 .酵母菌的
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