化生微生物第8章微生物的遺傳上傳(參考版)
2025-01-16 11:31本頁面
【正文】 ? 在微生物學(xué)工作中，要通過菌種保藏和復(fù)壯保證菌種優(yōu)良性狀，方式有斜面保藏、砂土保藏、冷凍干燥保藏和液氮保藏等，共同原理是通過降低代謝水平減少傳代次數(shù)，從而降低變異的可能。 ? 原核生物基因重組的方式有轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、接合和原生質(zhì)體融合；真核生物有有性雜交、準(zhǔn)性雜交、原生質(zhì)體融合和轉(zhuǎn)化等。 ? 多種因素可引起基因突變，變量實(shí)驗、涂布實(shí)驗和影印平板實(shí)驗證明了基因突變是自發(fā)的、不對應(yīng)的；自發(fā)突變的幾率很小，可以通過誘變提高突變率，用于育種；營養(yǎng)缺陷型和抗性突變型是重要的遺傳標(biāo)記。 干燥，低溫，缺氧，避光，營養(yǎng)缺乏 常用菌種保藏的方法： ? 斜面保藏：低溫（ 4℃ ）， 16個月 ? 半固體保藏：低溫（ 4℃ ）、避氧， 612個月 ? 石蠟油封藏：低溫（ 4℃ ）、阻氧， 12年； ? 甘油懸液保藏：低溫（ 70℃ ）、保護(hù)劑， 10年； ? 砂土保藏：干燥、無營養(yǎng)， 110年； ? 冷凍干燥保藏：干燥、低溫、無氧、保護(hù)劑， 515年； ? 液氮保藏：超低溫（ 196℃ ）、保護(hù)劑，＞ 15年； 本章小結(jié) ? 肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化、噬菌體感染、病毒重建實(shí)驗證實(shí)了遺傳物質(zhì)是核酸。 防止衰退的方法：控制傳代次數(shù)； 使用良好的培養(yǎng)條件； 利用不易衰退的細(xì)胞傳代； 采用有效的菌種保藏法。 一、菌種的衰退和復(fù)壯 衰退： 是指由于自發(fā)突變而使某物種原有的一系列生物學(xué)特征發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。 ? 原生質(zhì)體的制備：去壁（溶菌酶，蝸牛酶） ? 原生質(zhì)體融合和再生：誘導(dǎo)融合（ PEG， 電擊），再生培養(yǎng)基 ? 融合子的選擇：選擇標(biāo)記（營養(yǎng)缺陷型、熒光染色） 原生質(zhì)體融合 Chapter8 4 基因工程 （ Geic Engineering） 也稱重組 DNA技術(shù) (rebinant DNA technology)， 是指對遺傳信息的分子操作和施工，即把分離到的或合成的基因經(jīng)過改造，插入載體中，導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)，使其擴(kuò)增和表達(dá)，從而獲得大量基因產(chǎn)物，或者令生物表現(xiàn)出新的性狀。由轉(zhuǎn)導(dǎo)作用而獲得部分新性狀的重組細(xì)胞稱為 轉(zhuǎn)導(dǎo)子（ transductant）。 攜帶 F’質(zhì)粒的菌株稱為 初生 F’菌株（ primary F’strain） ， 通過 F’菌株與 F 菌株接合，后者也可成為F’菌株，是 次生 F’菌株（ secondary F’strain） ， 是一個部分雙倍體。 在 Hfr 和 F –接合時， Hfr的染色體雙鏈中的一條單鏈在 F質(zhì)粒處斷裂，由線狀變成環(huán)狀，質(zhì)粒中與性別有關(guān)的基因位于染色體末端，供體細(xì)胞的染色體 DNA以線性方式向受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移。 A、 F+ F 雜交結(jié)果：供體細(xì)胞和受體細(xì)胞均成為 F+細(xì)胞 接合過程中， F質(zhì)粒的一條單鏈在特定位點(diǎn)上斷裂，以滾環(huán)方式 F質(zhì)粒復(fù)制，以線性方式轉(zhuǎn)移到 F –中。 F’菌株： Hfr菌株內(nèi)的 F因子因不正常切割而脫離染色體時，形成游離的但攜帶一小段染色體基因的 F因子，稱 F’因子。 F+菌株： 也稱為“雄性”菌株，細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立存在 1個至幾個 F因子，細(xì)胞表面有性菌毛。通過接合而獲得新遺傳性狀的受體細(xì)胞稱為 接合子（ conjugant） 。 感受態(tài)細(xì)胞（ petent cell） 就是 處于感受態(tài)的微生物細(xì)胞。通過轉(zhuǎn)化方式形成的雜種后代稱為 轉(zhuǎn)化子（ transformant） 。 切除修復(fù)（ excision repair） 條件：內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶、 DNA聚合酶、連接酶 自發(fā)突變 生產(chǎn)中選擇 定向培育 誘發(fā)突變 出發(fā)菌 誘變條件 篩選方案 誘變劑種類 誘變劑量 樣品處理：表型延遲 瓊脂塊培養(yǎng)法 梯度平板法 夾層平板法、影印平板法 限量補(bǔ)充培養(yǎng)法 五、突變與育種 （ Mutation and Breeding） 春日霉素產(chǎn)生 菌的孢子懸液 誘變 含供試
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