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化生微生物第8章微生物的遺傳上傳(參考版)

2025-01-16 11:31本頁面
  

【正文】 ? 在微生物學工作中,要通過菌種保藏和復壯保證菌種優(yōu)良性狀,方式有斜面保藏、砂土保藏、冷凍干燥保藏和液氮保藏等,共同原理是通過降低代謝水平減少傳代次數(shù),從而降低變異的可能。 ? 原核生物基因重組的方式有轉化、轉導、接合和原生質(zhì)體融合;真核生物有有性雜交、準性雜交、原生質(zhì)體融合和轉化等。 ? 多種因素可引起基因突變,變量實驗、涂布實驗和影印平板實驗證明了基因突變是自發(fā)的、不對應的;自發(fā)突變的幾率很小,可以通過誘變提高突變率,用于育種;營養(yǎng)缺陷型和抗性突變型是重要的遺傳標記。 干燥,低溫,缺氧,避光,營養(yǎng)缺乏 常用菌種保藏的方法: ? 斜面保藏:低溫( 4℃ ), 16個月 ? 半固體保藏:低溫( 4℃ )、避氧, 612個月 ? 石蠟油封藏:低溫( 4℃ )、阻氧, 12年; ? 甘油懸液保藏:低溫( 70℃ )、保護劑, 10年; ? 砂土保藏:干燥、無營養(yǎng), 110年; ? 冷凍干燥保藏:干燥、低溫、無氧、保護劑, 515年; ? 液氮保藏:超低溫( 196℃ )、保護劑,> 15年; 本章小結 ? 肺炎鏈球菌的轉化、噬菌體感染、病毒重建實驗證實了遺傳物質(zhì)是核酸。 防止衰退的方法:控制傳代次數(shù); 使用良好的培養(yǎng)條件; 利用不易衰退的細胞傳代; 采用有效的菌種保藏法。 一、菌種的衰退和復壯 衰退: 是指由于自發(fā)突變而使某物種原有的一系列生物學特征發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。 ? 原生質(zhì)體的制備:去壁(溶菌酶,蝸牛酶) ? 原生質(zhì)體融合和再生:誘導融合( PEG, 電擊),再生培養(yǎng)基 ? 融合子的選擇:選擇標記(營養(yǎng)缺陷型、熒光染色) 原生質(zhì)體融合 Chapter8 4 基因工程 ( Geic Engineering) 也稱重組 DNA技術 (rebinant DNA technology), 是指對遺傳信息的分子操作和施工,即把分離到的或合成的基因經(jīng)過改造,插入載體中,導入宿主細胞內(nèi),使其擴增和表達,從而獲得大量基因產(chǎn)物,或者令生物表現(xiàn)出新的性狀。由轉導作用而獲得部分新性狀的重組細胞稱為 轉導子( transductant)。 攜帶 F’質(zhì)粒的菌株稱為 初生 F’菌株( primary F’strain) , 通過 F’菌株與 F 菌株接合,后者也可成為F’菌株,是 次生 F’菌株( secondary F’strain) , 是一個部分雙倍體。 在 Hfr 和 F –接合時, Hfr的染色體雙鏈中的一條單鏈在 F質(zhì)粒處斷裂,由線狀變成環(huán)狀,質(zhì)粒中與性別有關的基因位于染色體末端,供體細胞的染色體 DNA以線性方式向受體細胞轉移。 A、 F+ F 雜交結果:供體細胞和受體細胞均成為 F+細胞 接合過程中, F質(zhì)粒的一條單鏈在特定位點上斷裂,以滾環(huán)方式 F質(zhì)粒復制,以線性方式轉移到 F –中。 F’菌株: Hfr菌株內(nèi)的 F因子因不正常切割而脫離染色體時,形成游離的但攜帶一小段染色體基因的 F因子,稱 F’因子。 F+菌株: 也稱為“雄性”菌株,細胞內(nèi)獨立存在 1個至幾個 F因子,細胞表面有性菌毛。通過接合而獲得新遺傳性狀的受體細胞稱為 接合子( conjugant) 。 感受態(tài)細胞( petent cell) 就是 處于感受態(tài)的微生物細胞。通過轉化方式形成的雜種后代稱為 轉化子( transformant) 。 切除修復( excision repair) 條件:內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶、 DNA聚合酶、連接酶 自發(fā)突變 生產(chǎn)中選擇 定向培育 誘發(fā)突變 出發(fā)菌 誘變條件 篩選方案 誘變劑種類 誘變劑量 樣品處理:表型延遲 瓊脂塊培養(yǎng)法 梯度平板法 夾層平板法、影印平板法 限量補充培養(yǎng)法 五、突變與育種 ( Mutation and Breeding) 春日霉素產(chǎn)生 菌的孢子懸液 誘變 含供試
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