【正文】 最常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體，亦可用于表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等微環(huán)境特性的探測(cè)。反應(yīng)官能團(tuán)如可以衍生伯胺基的異硫氰酸酯、衍生巰基的馬來(lái)亞酰胺基等。熒光衍生試劑應(yīng)同時(shí)具有可與目標(biāo)分子進(jìn)行反應(yīng)的官能團(tuán)和熒光基團(tuán)，量子產(chǎn)率高，能夠從組成復(fù)雜的樣品中選擇性地與待測(cè)分子反應(yīng)。通常用液 質(zhì)聯(lián)用儀適用于分析大分子、熱不穩(wěn)定、難揮發(fā)的化合物。由于質(zhì)譜儀是在高真空下工作，樣品在引入質(zhì)譜儀之前，必須除去液相色譜流動(dòng)相中的大量溶劑。 詞匯 ? 液 質(zhì)聯(lián)用儀 Liquid chromatography mass spectrometry (LC/MS or LCMS) 液相色譜與質(zhì)譜儀連接的聯(lián)用裝置 。 詞匯 ? 液相色譜法 liquid chromatography 以液體為流動(dòng)相，以固體或液體為固定相的色譜方法。 C)的液體或粘稠溶液。 詞匯 ? 液膜法 liquid film method 測(cè)定液體樣品的一種紅外測(cè)定技術(shù)。 詞匯 ? 壓片法 pellet method 測(cè)定固體樣品的一種常用紅外測(cè)定技術(shù)。 質(zhì)譜儀通常使用兩種掃描方式：全掃描和選擇離子掃描。與薄片切片機(jī)(microtome)等并用，顯微紅外法的空間分辨率可達(dá) 10mm。 詞匯 ? 吸附色譜法 adsorption chromatography 以吸附劑作固定相，基于溶質(zhì)在固定相活性表面的吸附親和力達(dá)到分離的液相色譜方法。從激發(fā)三線態(tài)回到基態(tài)的系間竄躍也會(huì)發(fā)生。大多數(shù)有機(jī)化合物其基態(tài)均處于單線態(tài)，在光激發(fā)下躍遷至第一激發(fā)單線態(tài)。彎曲振動(dòng)一般出現(xiàn)在低波數(shù)區(qū)。無(wú)機(jī)質(zhì)譜法的突出優(yōu)點(diǎn)是它具有超高靈敏度。早期使用火花源質(zhì)譜儀器為主，目前成功地把電感耦合等離子體（ ICP）電離源與質(zhì)譜結(jié)合起來(lái)，使質(zhì)譜法更廣泛的用于無(wú)機(jī)物的分析。這種燈的強(qiáng)度比空心陰極燈大幾個(gè)數(shù)量級(jí)，沒(méi)有自吸，譜線更純。 詞匯 ? 無(wú)極放電燈 gradient elution 無(wú)極放電燈是由一個(gè)數(shù)厘米長(zhǎng)、直徑 512厘米的石英玻璃圓管制成。 詞匯 ? 渦流擴(kuò)散 eddy diffusion 在色譜過(guò)程中，指溶質(zhì)分子在前進(jìn)過(guò)程中形成的類(lèi)似于 渦流 的紊亂流動(dòng)。無(wú)論儀器中光學(xué)系統(tǒng)的質(zhì)量多么高，經(jīng)單色器單色化后的光總是有一定的波長(zhǎng) (寬度 )范圍，即具有以所指定波長(zhǎng) (額定波長(zhǎng) )為中心分布的一定波長(zhǎng)范圍。通常制備成 5~10mm粒徑的球形顆粒，并對(duì)其表面進(jìn)行修飾和改造，以適合不同物質(zhì)成分的分離。在氣相色譜中主要采用的是改變溫度的程序升溫法，而在液相色譜中溫度的影響較小，主要采用的梯度洗脫是改變流動(dòng)相強(qiáng)度的流動(dòng)相梯度。特點(diǎn)是響應(yīng)速度快。 TGS是triglycine sulfate (NH2CH2COOH)3 H2SO4)的英文縮寫(xiě)，即硫酸三甘氨酸酯，是一種殊熱電性質(zhì)的絕緣體。雙波長(zhǎng)法消除了傳統(tǒng)單波長(zhǎng)分光光度法中制備參比溶液及因樣品池和參比池不匹配而引起的誤差，可用于渾濁試樣分析以及兩組分或三組分混合物的同時(shí)測(cè)定。其原理是：波長(zhǎng)分別為 l1和 l2的兩束單色光交替通過(guò)同一盛有試樣溶液的吸收池，通過(guò)在 l1和 l2處測(cè)得的吸光度差 ΔA，由朗伯 比爾定律測(cè)定試樣中的被測(cè)組分，即 式中 el2和 el1分別表示在波長(zhǎng) l2和 l1處待測(cè)物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)， b和 c分別表示吸收池的光程 (cm)和待測(cè)物的摩爾濃度。雙聚焦分析器具有很高的分辨本領(lǐng)，但結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，價(jià)格也較高。由扇形磁場(chǎng)（ Magic sector）和扇形電場(chǎng)（ electric sector）組成。這種配置能夠進(jìn)行離子動(dòng)能譜和亞穩(wěn)離子檢測(cè)。是一種高分辨的儀器。 詞匯 ? 雙聚焦質(zhì)譜儀 通常指質(zhì)量分析器由扇形磁場(chǎng)（ B）和電場(chǎng)（ E）組合的質(zhì)譜儀。其保留機(jī)理與反相色譜基本相同，所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強(qiáng)，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。手性色譜在生物和醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要應(yīng)用。液相色譜和氣相色譜都可以進(jìn)行手性異構(gòu)體分離。常見(jiàn)的有固體基質(zhì)室溫磷光法、膠束增穩(wěn)室溫磷光法等。 詞匯 ? 室溫磷光法 room temperature phosphorimetry (RTP) 通過(guò)將試樣點(diǎn)在固體基質(zhì)上使之剛性化，或利用保護(hù)性介質(zhì)減少非輻射碰撞失活和氧氣等猝滅作用等條件控制，在室溫下實(shí)現(xiàn)磷光測(cè)定的方法。許多元素的相對(duì)靈敏度可達(dá) 109~1012克 /毫升，絕對(duì)靈敏度為 1010~1013克。在原子化階段，停止通氣，以延長(zhǎng)原子在吸收區(qū)內(nèi)的平均停留時(shí)間，避免對(duì)原子蒸氣的稀釋。加熱電源供給原子化器能量，電流通過(guò)石墨管產(chǎn)生高熱高溫，最高溫度可達(dá)到3000℃ 。簡(jiǎn)單的生色團(tuán)由雙鍵或叁鍵體系組成，例如， C=C， C=O，N=N， C C， C N等。 詞匯 ? 生色團(tuán) chromophore 指分子中含有的，能對(duì)光輻射產(chǎn)生吸收、具有 p ?p* 躍遷的不飽和基團(tuán)。有對(duì)稱伸縮振動(dòng)和非對(duì)稱伸縮振動(dòng)兩種形式。利用電壓或頻率掃描，可以檢測(cè)不同質(zhì)荷比的離子。帶電粒子射入高頻電場(chǎng)中，在場(chǎng)半徑限定的空間內(nèi)振蕩。 (U+Vcoswt)）。由兩組對(duì)稱的電極組成。特點(diǎn)是體積小，掃描速度快，但質(zhì)量范圍最大到 4000。 詞匯 ? 四極桿質(zhì)譜儀 Quadrupole mass spectrometer (QMS) 質(zhì)量分析器由四根相互平行并加了射頻電壓和直流電壓的四極桿構(gòu)成。被光激發(fā)后物質(zhì)的電子在從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)發(fā)光之前，會(huì)與周?chē)脑影l(fā)生作用使其激發(fā)能的一部分以熱等其他形式發(fā)生非輻射失活，因此產(chǎn)生能量差。 詞匯 ? 斯托克斯位移 Stokes39。 詞匯 ? 色譜圖 chromatogram 色譜圖是指被分離組分的檢測(cè)信號(hào)隨時(shí)間分布的圖象。以后此法雖逐漸應(yīng)用于無(wú)色物質(zhì)的分離，但 色譜 一詞仍被人們沿用至今。可以用來(lái)進(jìn)行有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)分析和目標(biāo)化合物的快速篩查。屬于低分辨質(zhì)譜儀。其中第一級(jí)四極桿用于母離子的選擇，第二級(jí)四極桿作為碰撞室使用，第三級(jí)四極桿用于由母離子裂解生成的子離子的檢測(cè)。 詞匯 ? 三級(jí)四極質(zhì)譜儀 Triple quadrupole mass spectrometer 是一種應(yīng)用很廣的空間串聯(lián)質(zhì)譜儀。黑度 S與曝光量 H的關(guān)系曲線，稱為感光板的乳劑特性曲線。熱導(dǎo)檢測(cè)器的靈敏度取決于載氣和被測(cè)物質(zhì)熱導(dǎo)率的差值，差值越大，靈敏度越高，當(dāng)被測(cè)物質(zhì)的熱導(dǎo)率大于載氣時(shí)，則產(chǎn)生反峰。 詞匯 ? 熱導(dǎo)檢測(cè)器 thermal conductivity detector,TCD 又稱熱導(dǎo)池檢測(cè)器，也稱卡他計(jì)（ Katharomater）熱導(dǎo)檢測(cè)器是依據(jù)各種化合物都具有不同的熱導(dǎo)率，利用熱敏元件（鎢絲或鉑絲、錸鎢絲等）組成的平衡電橋測(cè)量熱導(dǎo)率發(fā)生變化的儀器裝置。入射光到達(dá)樣品表面的深度與入射波長(zhǎng)、入射角以及棱鏡及樣品的折射率有關(guān)。又稱 ATR法 可用于樣品深度方向及表面的紅外光譜測(cè)定。去偏振度與分子的極化度有關(guān)，通過(guò)測(cè)定拉曼譜線的去偏振度，可以確定分子的對(duì)稱性。 詞匯 ? 去偏振度 depolarization 測(cè)定拉曼光譜時(shí)，若在檢測(cè)器與樣品之間放一偏振器，便可分別檢測(cè)與激光方向平行的平行散射光 I//和與激光方向垂直的垂直散射光 I⊥ 。 詞匯 ? 親和色譜法 affinity chromatography 以共價(jià)鍵將具有生物活性的配位體（如酶、輔酶、抗體、激素等）結(jié)合到不溶性固體基質(zhì)（載體）上作固定相，利用蛋白質(zhì)或生物大分子等樣品與固定相上生物活性配位體之間的特異親和力進(jìn)行分離的液相色譜方法。氣相色譜要求樣品必須汽化，才能進(jìn)入色譜柱進(jìn)行分，所以氣質(zhì)聯(lián)用儀適用于分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定的化合物。是解決復(fù)雜混合物分離和鑒定的快速、有效的方離法。 詞匯 ? 氣 質(zhì)聯(lián)用儀 Gas Chromatography mass spectrometer（ GC/MS） 將氣相色譜儀與質(zhì)譜儀連接起來(lái)組合成的分析裝置稱之為氣質(zhì)聯(lián)用儀。將它們涂在惰性載體上作為填充柱的固定相、或直接涂在毛細(xì)管內(nèi)壁（開(kāi)口管柱）作為固定相。一般氣 固色譜法的分離機(jī)理為吸附 脫附，故屬于吸附色譜法。氣相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是：分析速度快，分離效能高，靈敏度高，應(yīng)用范圍廣，其局限性在于不能用于熱穩(wěn)定性差、蒸氣壓低或離子型化合物等的分析。 詞匯 ? 氣相色譜法 gas chromatography， GC 以氣體作為流動(dòng)相的色譜法 根據(jù)所用固定相狀態(tài)的不同，又可分為氣 固色譜法和氣 液色譜法。 詞匯 ? 譜線黑度比較法 將試樣與已知不同含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品在一定條件下攝譜于同一光譜感光板上，然后在映譜儀上用目視法直接比較被測(cè)試樣與標(biāo)準(zhǔn)樣品光譜中分析線的黑度，若黑度相等，則表明被測(cè)試樣中欲測(cè)元素的含量近似等于該標(biāo)準(zhǔn)樣品中欲測(cè)元素的含量。由于制造精密的透射光柵比較困難，現(xiàn)代光柵光譜儀幾乎都采用反射光柵。 詞匯 ? 平面光柵光譜儀 以平面光柵作為分光元件的攝譜儀。 詞匯 ? 凝膠滲透色譜 gel permeation chromatography, GPC 又稱非水系凝膠色譜或親脂凝膠色譜 是以能溶解非交聯(lián)和非凝膠型聚乙烯以及其他高分子的有機(jī)溶劑作流動(dòng)相的凝膠色譜。 詞匯 ? 凝膠過(guò)濾色譜 gel filtration chromatography, GFC 又稱水系凝膠色譜 是以水或緩沖溶液作流動(dòng)相的凝膠色譜。比固定相孔徑小的分子才能進(jìn)入孔內(nèi)而產(chǎn)生保留，溶質(zhì)分子體積越小，進(jìn)入固定相孔內(nèi)的機(jī)率越大，于是在固定相中停留（保留）的時(shí)間也就越長(zhǎng)。 詞匯 ? 凝膠色譜法 gel chromatography 又稱體積排斥色譜、空間排阻色譜、分子篩色譜等 是以化學(xué)惰性的多孔性物質(zhì)作固定相，溶質(zhì)分子不是與固定相發(fā)生相互作用，而是受固定相孔徑大小的影響而達(dá)到分離的一種液相色譜分離模式。內(nèi)標(biāo)法中提供內(nèi)標(biāo)線的元素稱為內(nèi)標(biāo)元素。 詞匯 ? 內(nèi)標(biāo)法 為了使譜線強(qiáng)度由于實(shí)驗(yàn)條件波動(dòng)而引起的變化得到補(bǔ)償，通常用分析線和內(nèi)標(biāo)線強(qiáng)度對(duì)比元素含量的關(guān)系來(lái)進(jìn)行光譜定量分析，這種方法稱為內(nèi)標(biāo)法。用紫外 可見(jiàn)吸收光譜法測(cè)定時(shí)，對(duì)于絡(luò)合反應(yīng) mM + nY = MmYn，固定一個(gè)組分 (如 M)的濃度不變，改變另一組分 (如 Y)的濃度，求得一系列[Y]/[M]比，在絡(luò)合物 MmYn的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度的變化。顯然，顯色反應(yīng)產(chǎn)物的 ε值愈大，基于該顯色反應(yīng)的光度測(cè)定法的靈敏度就愈高。它的物理意義是：當(dāng)吸光物質(zhì)的濃度為 1 mol/L，吸收池厚為 1cm，以一定波長(zhǎng)的光通過(guò)時(shí)，所引起的吸光度值 A。 詞匯 ? 摩爾吸光系數(shù) molar absorptivity 根據(jù)比爾定律，吸光度 A與吸光物質(zhì)的濃度 c和吸收池光程長(zhǎng) b的乘積成正比。在質(zhì)譜中，位于含有雜原子雙鍵的 γ位氫原子，通過(guò)六員過(guò)渡態(tài)轉(zhuǎn)移到雜原子上的過(guò)程稱之為麥?zhǔn)现嘏?。?dòng)鏡移動(dòng)產(chǎn)生光程差，光程差與時(shí)間有關(guān)，產(chǎn)生干涉信號(hào)，得到干涉信號(hào)隨時(shí)間變化的干涉圖。 詞匯 ? Michelson干涉儀 Michelson interferometer Michelson是人名，該干涉儀由 Michelson于1881年提出。該檢測(cè)器用于中紅外及遠(yuǎn)紅外區(qū)，需冷至液氮溫度 (77K)以降低噪聲。采用 HgCdTe半導(dǎo)體材料薄膜，又稱光電導(dǎo)檢測(cè)器。 詞匯 ? MCT檢測(cè)器 MCT detector 紅外光譜儀檢測(cè)器的一種，用于傅立葉變換型紅外光譜儀中。所以只有控制在一定的條件下，在一定的待測(cè)元素含量的范圍內(nèi)， A和 b才是常數(shù)。式中 A及 b是兩個(gè)常數(shù)。流動(dòng)相的作用是載帶樣品進(jìn)入色譜柱進(jìn)行分離（參與或不參與），再載帶被分離組分進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，最后流出色譜系統(tǒng)放空或收集 詞匯 ? 羅馬金－賽伯公式 光譜定量分析依據(jù)試樣中欲測(cè)元素的譜線強(qiáng)度來(lái)確定元素的濃度。在氣相色譜中，流動(dòng)相是氣體，稱為載氣（不參與分離作用）。 詞匯 ? 流動(dòng)相 mobile phase 在色譜柱中存在著相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相，一相為固定相，一相為流動(dòng)相。每種物質(zhì)的裂解色譜圖都具有各自的特征性，稱為指紋裂解譜圖。 詞匯 ? 裂解氣相色譜法 pyrolysis gas chromatography,PGC 裂解氣相色譜法多用于分子量大、難揮發(fā)物質(zhì)的分析。先用銳線光源測(cè)定分析線的原子吸收和背景吸收的總吸光度，再用氘燈（紫外區(qū)）或碘鎢燈、氙燈（可見(jiàn)區(qū)）在同一波長(zhǎng)測(cè)定背景吸收（這時(shí)原子吸收可以忽略不計(jì)），計(jì)算兩次測(cè)定吸光度之差，即可使背景吸收得到校正。離子源的種類(lèi)很多，