泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學(xué)研究設(shè)計方法(參考版)
2024-10-21 16:59本頁面
【正文】 ③所用針頭以 4號為好。 3．造模成功的指標(biāo) 鏡檢前列腺液中卵磷質(zhì)小體密度減少，白細(xì)胞數(shù)增加，前列腺標(biāo)本病理形態(tài)學(xué)檢查診斷為前列腺炎模型。 (三 )大鼠實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌前列腺炎病理模型建立 1．原理 由大腸桿菌感染引起前列腺液中白細(xì)胞提高及卵磷質(zhì)小體密度減少，引起前列腺形態(tài)的炎性病變。 3 造模成功指標(biāo) 解剖觀察腺組織與周圍黏連、結(jié)節(jié)、灰白色點(diǎn)狀硬化、硬化，顯微觀察炎細(xì)胞浸潤，呈團(tuán)簇狀，腺腔梗阻，間質(zhì)纖維化。 (二 )實(shí)驗(yàn)性前列腺炎的模型制備 1 原理 應(yīng)用消痔靈的藥理作用，注射后造成前列腺纖維增生炎癥階段，形成實(shí)驗(yàn)性前列腺炎癥。 3．造模成功指標(biāo) 前列腺液中白細(xì)胞數(shù)增加，卵磷質(zhì)小體密度減少，前列腺液細(xì)菌培養(yǎng)陰性，腺體標(biāo)本病理形態(tài)學(xué)檢查診斷為病變前列腺炎。 三、動物模型的建立方法 (一 )非菌性前列腺炎的模型的建立 1．原理 注入角叉菜膠生理鹽水．能引起前列腺液檢驗(yàn)指標(biāo)的顯著改變，而注入等量滅菌生理鹽水則不能引起顯著改變。 3．止痛試驗(yàn) 用以衡量治療藥物的輔助作用。 (二 )其他試驗(yàn) 1．抗菌試驗(yàn) 由于本病部分是由細(xì)菌感染而發(fā)，故可以抗菌試驗(yàn)為其藥效學(xué)依據(jù)。 (3)卵磷質(zhì)小體密度 (前列腺液中 )。 (2)前列腺液檢查：檢查其細(xì)胞數(shù)。 (3)大鼠實(shí)驗(yàn)性細(xì)菌前列腺病理模型：以大腸桿菌生理鹽水懸液，注射在與前列腺頭相接的精囊內(nèi)。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計 (一 )對前列腺炎藥動物模型的治療作用試驗(yàn) 1. 常用動物模型 (1)大鼠實(shí)驗(yàn)性非細(xì)菌前列腺炎病理模型：以 l％角叉菜膠生理鹽水0． 1ml注射在前列腺頭相連接的精囊內(nèi)。主要由炎細(xì)胞浸潤腺腔梗阻，間質(zhì)纖維化產(chǎn)生，治療以清熱解毒，活血祛瘀、利水通淋。前列腺炎多由大腸桿菌，金黃色葡萄球菌感染所致。 第五節(jié) 前列腺炎藥 一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 前列腺炎是泌尿科疾病，癥狀包括會陰不適，尿痛，殘尿感，腰痛，尿道灼熱，尿頻，小腹痛等主要癥狀。 (2)增生程度與胚胎尿生殖竇植入的數(shù)目成比例，所以每只小鼠植入的胎鼠尿生殖竇的數(shù)目必須相同。 3．造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察指標(biāo) 同激素法模型。 (三 )小鼠尿生殖竇植入法模型 1．原理 胚胎與成年前列腺細(xì)胞相互作用，誘導(dǎo)成年前列腺細(xì)胞增小(可能是由于成年前列腺胚胎生長能力的重新恢復(fù) )。 4．注意點(diǎn) (1)犬前列腺增生與年齡有關(guān)，實(shí)驗(yàn)用犬宜選老年 (7— 10歲齡 )前列腺增生明顯者。 2．動物和實(shí)驗(yàn)步驟 選取雄性雜種家犬，先經(jīng)直腸指診斷及前列腺明顯增大者，再經(jīng) B超檢查測定前列腺體積，證實(shí)為前列腺增大者供實(shí)驗(yàn)。 (二 )老年犬前列腺增生模型 1．原理 犬的前列腺增生與人發(fā)病機(jī)制相似。 3．造模成功指標(biāo)與藥物療效觀察 鏡檢前列腺，與空白對照組比較增生程度，或取前列腺稱重計算前列腺指數(shù)以及測前列腺中 DNA含量與空白對照組比較，藥效可根據(jù)前列腺鏡檢、前列腺指數(shù)、 DNA含量、磷酸酶含量來評價。 三、動物模型建立方法 (一 )激素法 (丙酸睪丸素 )模型 1．原理 根據(jù)前列腺增生由體內(nèi)性激素失衡有關(guān)理論，添加外源性激素可使前列腺迅速增生。 3．體外抗菌試驗(yàn) 見有關(guān)章節(jié)。本癥?？诜o藥．應(yīng)注意劑量的合理性。激素法前列腺肥大模型方法簡便迅速，適宜藥物篩選，但與人類疾病的相關(guān)性較??；老年前列腺增生犬與人類發(fā)病機(jī)制相似，是公認(rèn)的研究人類前列腺增生的合適動物模型，但來源較少，難于廣泛用作藥物篩選；胚胎尿生殖竇植入法小鼠前列腺肥大模型上需外源性激素，可在短期內(nèi)產(chǎn)生預(yù)期的增生，不干擾前列腺肥大藥物檢測，動物操作容易，一般認(rèn)為此模型可用于探索人類前列腺肥大的疾病過程。 (5)前列腺組織的多巴胺含量：因?yàn)槎喟桶分饕獊碜郧傲邢伲瑴y定前列腺組織中的多巴胺可作為探索藥物作用機(jī)制和手段。 (3)血清酸性磷酸酶的含量：可用麝香草酚肽法測定。前列腺肥大者腺體直徑增大。 2．觀察指標(biāo) (1)前列腺指數(shù) [前列腺重 mg／ g(體重 )]。 (3)尿生殖竇植入法模型：向前列腺內(nèi)植入胎鼠的尿生殖竇組織而形成前列腺增生。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計 (一 )對前列腺增生動物模型的治療作用試驗(yàn) 1．常用動物模型 (1)激素法前列腺增生模型：以內(nèi)酸睪丸素皮下注射而形成前列腺增生。中醫(yī)認(rèn)為前列腺肥大屬”癃閉”范疇。臨床表現(xiàn)為：尿頻、尿急、排尿不暢、夜尿增多等。實(shí)驗(yàn)可延長 14星期，每星期測 13次， 4．注意點(diǎn) Heymann腎炎常需 l4星期或更長，生化指標(biāo)的測量應(yīng)進(jìn)行多次，并和造模前后、給藥前后作比較。每次 2ml， 36次，直至出現(xiàn)蛋白尿，說明模型形成。取 150200g的大鼠，不計性別，處死取出腎臟插入導(dǎo)管，用生理鹽水反復(fù)沖洗后，取腎皮質(zhì) 5g研成勻漿與弗氏完全佐利混勻成 10ml。 (二 )大鼠 Heymann腎小球腎炎模型 1．原理 本方法用大白鼠腎組織，注射給同種大鼠，經(jīng)過一段時間，受試動物產(chǎn)生抗原 — 抗體復(fù)合物，沉淀于腎小球血管壁而形成腎小球腎炎。新藥組分三個劑量組，陽性對照組可用地塞米松 ，每日 1次；或環(huán)磷酰胺 6mg/kg，每日 1次；陰性對照組用等量生理鹽水，正常組不注射抗腎血清，僅用等量的生理鹽水。 制備腎炎模型：用上述抗腎血清，給 2～ 2． 5kg家兔每次靜脈注射 1. 5— 2ml，每半小時 1次， 1— 8次，至出現(xiàn)蛋白尿，模型形成。 水浴中 o． 5h滅活用。于末次注射后 2星期，采羊血分離血清；加入生理鹽水洗漂 3次的等量兔紅細(xì)胞，混勻， 過夜充分吸附，離心棄除血細(xì)胞。給綿羊皮下或
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