【正文】 轉(zhuǎn)眼間，四年美好大學生活即將畫上句號，值此畢業(yè)論文即將完成之際，向四年來教育我關(guān)心我的動科院全體領導老師致以誠摯謝意，是你們讓我滿載而歸！向四年來陪伴我支持我的所有同學和朋友表示最美好的祝愿，祝福大家前程似錦！同時，我要深深感謝我親愛的家人，是他們無私的奉獻和鼓勵，讓我能夠順利完成四年本科的學習。導師華利忠博士學識淵博、治學嚴謹、一絲不茍、崇尚實干和獻身科學的風范值得我學習和效仿，以及在生活上給予我無私關(guān)懷和無微不至的照顧，讓我倍感溫馨與感動，感謝他們對我的培養(yǎng)與指導！ 同時感謝江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所副所長邵國青研究員對畢業(yè)設計工作的指導與幫助，感謝江蘇省農(nóng)業(yè)科學院重大疫病防治研究室的劉茂軍副研究員、韋艷娜老師、張旭老師、甘源老師、徐飛揚老師、周靜老師在實驗工作上的大力支持與幫助，實驗的順利完成得益于他們平日里大公無私的指導和幫助，是他們教會我常規(guī)實驗室儀器的操作 ，保證了實驗的正常順利進行。我的指導老師張淼博士，學術(shù)造詣深厚，邏輯思維縝密，治學嚴謹，和藹可親 。7(1):e29310. J,Salguero FJ,Pallar233。同時還需要廣大從事養(yǎng)殖的朋友強化“養(yǎng)重于防，防重于治，養(yǎng)防結(jié)合”的理念，在生產(chǎn)實踐中嚴格遵循，不斷探索，不斷實踐， 最終形成具體有效的操作方案，使我國的養(yǎng)殖業(yè)達到健康發(fā)展的標準，讓養(yǎng)殖戶輕松養(yǎng)殖，讓人民放心吃肉。主要從以下幾方面著手：堅持自繁自養(yǎng)，最好全進全出，如需引種必須做好嚴格的檢疫與隔離工作 [1,3,4,14]；做好生物安全工作，重視病死豬的無害化處理，杜絕人員、飼料、車輛將病原引 入豬場 [9,15]；金陵科技學院學士學位論文 討論與分析 12 重視日常消毒工作，畜舍、養(yǎng)殖小區(qū)、通道等的消毒 [1,3,4,14]；改善硬件設施和豬舍環(huán)境，減少豬群應激 [15,18,19]；重視豬只的營養(yǎng)健康水平，嚴禁飼喂霉變飼料[1,3,18]；建立可追溯的養(yǎng)殖檔案 [31]，便于問題的解決。對于豬瘟的凈化措施，我國已有很好地研究與應用，王琴 [30]已建立了豬瘟凈化新模式，適合我國國情，在目前豬病流行狀態(tài)下，采用該方法在規(guī)模化豬場和部分區(qū)域開展豬瘟凈化是完全可行的。據(jù)閆之春 [28]報道，病原凈化是大型豬場最經(jīng)濟的疾病控制方法，主要途徑為：后備母豬的培育，部分清群，全清群，檢測 — 剔除，群體封閉，加藥早起隔離斷奶，在其實施病原凈化的案例中，均取得了良好的效果。據(jù)國內(nèi) 外報道，已有多種凈化方法供廣大科技人員參考。 疫苗的正確使用是目前防控豬病的重要手段之一，作為豬場管理者或獸醫(yī)人員必須重視免疫接種的合理性和有效性。C 株疫苗，可以在一天到一天半的時間內(nèi)控 制感染，保護機體，迅速抑制病毒的傳播；據(jù) G243。閆學軍 [24]等報道，母源抗體的半衰期約為 14 天，豬場一般將初次免疫確定在 20 日齡左右，但這種方法不能保證豬瘟抗體保持高水平，規(guī)?；i場應根據(jù)初生仔豬母源抗體水平的變化規(guī)律制定疫苗首免日齡。據(jù)劉海珍 [22]等報道，首次免疫和加強免疫使用高致病性豬藍耳病滅活疫苗，抗體保護率僅有 30%–40%，而首次免疫使用高致病性豬藍耳病活疫苗，加強免疫采用高致病性藍耳 病滅火疫苗或活疫苗，抗體保護率可達 80%以上，效率大大提高。趙麗華 [21]等采用肌肉注射“復方黃芪多糖 III號”注射液及抗豬瘟高免血清，共治療豬瘟與藍耳病混合感染 158 頭，治愈 122頭，治愈率達 %。湯國祥 [19]等強調(diào)發(fā)病豬的淘汰，剛發(fā)病或癥狀輕微豬的隔離，未發(fā)病豬的緊急免疫接種，并采用金霉素、阿莫西林、支原凈拌料防止繼發(fā)感染。而對于該混合感染病例的診治，不同專家學者也給出了確切的治療方案。 三、 討論與分析 通過以上發(fā)病情況、臨床癥狀、病理剖檢做出初步診斷，然后經(jīng)實驗室檢測結(jié)果最終確診為豬瘟與高致病性藍耳病的混合感染。 （ 5) 全群保健：每噸飼料拌料黃芪多糖 1000g+電解多維 1000g+強力霉 素 150g,連用 7 天。 14 日齡 56 日齡的仔豬肌肉注射2 頭份。 （ 4) 仔豬藍耳病活疫苗緊急免疫。 （ 3) 豬瘟脾淋苗緊急接種：具體方案為全場母豬和公豬肌肉注射 4 頭份； 70 日齡以內(nèi)仔豬肌肉注射 頭份， 70 日齡以上肌肉注射 2 頭份，新生仔豬超前免疫1 頭份， 35 日齡后二免。全場豬舍聚維酮碘 1:500氣霧消毒，引溝和糞溝 3%燒堿溶液消毒，豬舍外環(huán)境用 3%燒堿溶液氣霧消毒。制定以下治療措施： （ 1）無害化處理：對嚴重發(fā)病豬實施撲殺后深埋，深埋坑內(nèi)和表面撒上生石灰。 +: positive control。 — : 陰性對照 Fig 6 Electrophoresis results of PRRSV RTPCR product M: marker。 13:樣品 。 +: positive control。 — : 陰性對照 Fig 5 Electrophoresis results of CSFV RTPCR products M: marker。 13:樣品 。 表 2 血清學檢測結(jié)果 母豬 公豬 發(fā)病仔豬 陽性數(shù) 陽性率 陽性數(shù) 陽性率 陽性數(shù) 陽性率 金陵科技學院學士學位論文 結(jié)果與分析 9 豬瘟抗體 8/18 % 2/2 100% 2/3 % 豬藍耳病病毒抗體 18/18 100% 2/2 100% 0/3 0 豬偽狂犬 GI 抗體 0/18 0 0/2 0 0/3 0 豬偽狂犬 GB 抗體 18/18 100% 2/2 100% 3/3 100% A/B: 陽性數(shù) /檢測數(shù) 病原學檢測結(jié)果 豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒和豬藍耳病毒的 PCR 或 RTPCR 結(jié)果見圖 圖6。豬藍耳病病毒抗體陽性率母豬為 100%，但發(fā)病仔豬抗體陽性率為 0，幾乎沒有保護率。檢測結(jié)果見表 2。 圖 1 腹股溝淋巴結(jié)被膜下出血 圖 2 腎水腫，表面有少量出血點 圖 3 間質(zhì)性肺炎 細菌學檢測結(jié)果 將無菌采取 3 頭病豬的心包積液、肝、脾、肺、腎、腹股溝淋巴結(jié) ,革蘭氏染色后，置顯微鏡 400X 放大倍數(shù)下鏡檢，未觀察到病原菌，詳見下圖 4。 二、結(jié)果與分析 病理變化 剖檢三頭發(fā)病豬，主要病理變化為：肺水腫，間質(zhì)性和出血性肺炎，心包積液。 PCR 檢測 根據(jù) GenBank 登錄的 CSFV, PRRSVN 基因以及 PRVgE 核苷酸序列 ,由 軟件設計 PCR 引物，由上海英駿生物公司合成，其他 PCR 參數(shù)見表 1。 反轉(zhuǎn)錄 金陵科技學院學士學位論文 材料與方法 6 取所提 RNA 進行反轉(zhuǎn)錄。 （ 7） 棄掉上清液，此步注意不要吸出沉淀。 （ 6） 加入 1mL 75％ 無水乙醇洗滌沉淀一次。 （ 5） 室溫放置 1520min 或 20℃ 保存（可過夜），讓 RNA 沉淀下來。 （ 3） 加入 200μL氯仿充分混勻，用手指將貼壁上的雜質(zhì)彈起渦旋后，冷浴 5min。具體操作步驟如下： （ 1） 取陰陽性對照記 血清 200μL，加入 1mL TrizolA 充分混勻，用勻漿儀劇烈振蕩渦旋。具體操作步驟如下： 取陰陽性樣品及 勻漿液 各 400μL，加入 蛋白酶 K 和 50μL、濃度為10%的 SDS 溶液，混勻， 56℃ 作用 30min；依次加入 200μL氯仿和 200μL苯酚，劇烈振蕩 15s，室溫放置 5min； 4℃ ， 12020 轉(zhuǎn)離心 10min；取上清，加入等體積的氯仿混勻，室溫放置 5min； 4℃ ， 12020 轉(zhuǎn)離心 10mi