【正文】 這些人員必須經(jīng)過培訓(xùn),實驗室應(yīng)有培訓(xùn)計劃和措施,實驗室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書(如上崗證),培訓(xùn),技能和經(jīng)歷,發(fā)表論文,所有設(shè)備應(yīng)有維護程序文件。專用工作服和工作鞋。專用工作服和工作鞋。消耗品(帶濾心吸頭,一次性手套等)。高速臺式冷凍離心機(c)水浴箱和/或加熱模塊(d)超凈工作臺或防污染罩混勻器?？梢苿幼贤鉄?。附件3:整改要求.(二)需要說明的其它問題:□如果有的話見附件4。第五篇：臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收報告(一)實驗室所屬法人單位名稱:地址:郵編:法定代表人:實驗室負責(zé)人:聯(lián)系人:電話:傳真:(二)接受現(xiàn)場技術(shù)驗收的實驗室代表姓名及職務(wù)::衛(wèi)生部下發(fā)文《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》和《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》:::合格,建議授予驗收合格證書。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向順序，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)(簡稱擴增區(qū))至產(chǎn)物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。室間質(zhì)量評價所有開展臨床基因擴增檢驗的實驗室都必須參加由衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的全國臨床基因擴增檢驗項目的室間質(zhì)量評價，評價結(jié)果將作為其開展臨床基因擴增檢驗的依據(jù)之一。結(jié)果的報告必須簡單清楚。陰性標(biāo)本可以評估PCR實驗的綜合質(zhì)量。因此在測定血清/血漿病原體核酸如HBV DNA、HCV RNA等時，應(yīng)使用已知的弱陽性血清/血漿作為質(zhì)控樣本，與待測臨床標(biāo)本等同處理提取核酸及擴增，以判斷逆轉(zhuǎn)錄及擴增檢測的效果。對于DNA測定內(nèi)標(biāo)可使用對有機體存活所必須的靶基因，如維生素D血漿結(jié)合蛋白的基因。對逆轉(zhuǎn)錄和核酸擴增的質(zhì)控既可使用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控方法也可采用外標(biāo)質(zhì)控方法。由于這些原因，單獨的光度計比色方法也不能對RNA的完整性下結(jié)論。在理想情況下,三種主要的核糖體RNA(28S、18S和5S)在凝膠上出現(xiàn)的帶相對較窄。否則,殘留的蛋白或酚可能會很高。用常規(guī)的手工提取方法制備的DNA的平均長度一般為~100kb，用適合PCR的DNA提取試劑盒制備的DNA的長度平均范圍為3040kb。(九)質(zhì)量控制質(zhì)量控制包括兩個方面，即室內(nèi)質(zhì)量控制(以下簡稱質(zhì)控)和室間質(zhì)量評價。溫度太低或離子強度太高都會降低雜交的嚴格性，還會給檢測信號的特異性帶來負面影響。雜交結(jié)果不充分的原因可能是基因探針不合適、標(biāo)記方法不對、對探針的標(biāo)記不夠、雜交或洗滌方法不合適等。上述防污染方法只在一定程度上有效，所以不能用其來替代嚴格的實驗室設(shè)置和管理，尤其是這些方法不能防止外來非擴增的天然DNA的污染。污染的避免要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防而不是排除污染，前面所述對工作區(qū)的嚴格劃分的目的即是為了預(yù)防污染。反應(yīng)混合液的任何成分及核酸的制備和反應(yīng)建立階段所涉及到的實驗設(shè)備的任何部位都是可能的污染源。由于一旦發(fā)生污染后，再圍繞實驗室來尋找污染源不僅耗時而且還很繁瑣，所以防止污染重在預(yù)防。核酸的擴增有多種因素可引起核酸擴增檢測的假陽性或假陰性結(jié)果，如擴增靶核酸中抑制劑存在、Taq酶失活、退火溫度不對、Mg++濃度不佳、患者標(biāo)本或試劑受污染等。對于后者，建議使用高質(zhì)量的商品核酸提取試劑。當(dāng)標(biāo)本為痰時，則必須先進行液化處理，再提取核酸。用乙醇沉淀的核酸樣本貯存在20℃即可。用于RNA檢測的標(biāo)本，如果未經(jīng)穩(wěn)定化處理，則必須速凍后，放在干冰中運送。(三)標(biāo)本的運送標(biāo)本采集后必須盡快送至實驗室。由于RNA易受RNA酶的降解，因此用于RNA測定的標(biāo)本有時必須進行穩(wěn)定化處理，如流行病學(xué)調(diào)查的現(xiàn)場采樣。不能使用肝素抗凝，因為肝素是Taq酶的強抑制劑，而且在其后的核酸提取步驟中很難去除。玻璃器皿在使用前應(yīng)高壓處理，因為玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。(一)標(biāo)本的采集常用于基因擴增檢測的臨床標(biāo)本包括EDTA或枸櫞酸鈉抗凝全血或骨髓、血清或血漿、痰、腦脊液、尿及分泌物等。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故應(yīng)注意實驗人員的安全防護。目前國內(nèi)的商品試劑盒絕大部分均采用非同位素標(biāo)記的微孔板上探針雜交方法，即PCRELISA方法，也有膜上探針雜交方法。完成操作及每天工作后都必須對實驗室臺面進行清潔和消毒，紫外照射方法與前面區(qū)域相同。一個簡單的方法是在打開反應(yīng)管前快速離心數(shù)秒。不能從本區(qū)再進入任何“上游”區(qū)域，可降低本區(qū)的氣壓以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。待測RNA的cDNA拷貝須保存在標(biāo)本制備區(qū)，不得在本區(qū)對樣本進行PCR擴增。樣本處理對核酸擴增有很大影響，必須使用有效的核酸提取方法，可在開展臨床標(biāo)本檢測前對提取方法進行評價。用過的加樣器吸頭必須放入專門的消毒(例如含次氯酸鈉溶液)容器內(nèi)。由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。由于擴增產(chǎn)物僅幾百bp，對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。工作結(jié)束后必須立即對工作區(qū)進行清潔。對于“熱啟動”技術(shù)(在第一個高溫變性步驟后加入酶)，聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。大多數(shù)用于擴增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。在打開含有反應(yīng)混合液的離心管或試管前，應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。清潔方法不當(dāng)也是污染發(fā)生的一個主要原因，因此實驗室的清潔應(yīng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)至擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。各區(qū)域都必須有明確的標(biāo)記，以避免設(shè)備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出從而造成不同的工作區(qū)域間設(shè)備物品發(fā)生混淆。附件：醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則第三篇：臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范為使基因擴增檢驗技術(shù)有效地應(yīng)用于臨床，更好地為疾病的預(yù)防、診斷和治療服務(wù)，保證檢驗質(zhì)量，特制定本規(guī)范。第二十條醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室出現(xiàn)以下情形之一的，由省級衛(wèi)生行政部門責(zé)令其停止開展臨床基因擴增檢驗項目，并予以公告，公告所需費用由被公告醫(yī)療機構(gòu)支付：（一）開展的臨床基因擴增檢驗項目超出省級衛(wèi)生行政部門核定范圍的；（二）使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗試劑開展臨床基因擴增檢驗的；（三）在臨床基因擴增檢驗中未開展實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制的；（四）在臨床基因擴增檢驗中未參加實驗室室間質(zhì)量評價的；（五）在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；（六）以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的；（七）使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的。對于連續(xù)2次或者3次中有2次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢驗結(jié)果不合格的醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室，省級衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴增檢驗項目，限期整改。第十七條省級以上衛(wèi)生行政部門可以委托臨床檢驗中心或者其他指定機構(gòu)對醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室進行現(xiàn)場檢查。第十四條醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)省級以上衛(wèi)生行政部門指定機構(gòu)技術(shù)培