【正文】 48h培養(yǎng)后，呈現(xiàn)直徑 ，中心下陷并圍有黑色的暈圈。 Oxford 瓊脂平板培養(yǎng)于 30℃ 適合于僅受額外菌群輕度污染的食品，對于受額外菌群重度污染的食品，最好培養(yǎng)于 35℃ 或 37℃ ，因?yàn)槔钏固厥暇呌诤皖~外菌群一同生長。 2h 30℃ 、 35℃ 或 劃線接種 Oxford瓊脂 37℃ 培養(yǎng) 2448h 和 PALCAM瓊脂 30℃ 、 35℃ 或 37℃ 培養(yǎng) 2448h 李斯特菌屬確實(shí)證： 挑取可疑菌接種 TSAYE培養(yǎng)基 過氧化氫酶試驗(yàn) 革蘭氏染色 動(dòng)力試驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特菌確實(shí)證： 溶血試驗(yàn) 碳源利用試驗(yàn) CAMP〔協(xié)同溶血〕試驗(yàn) 第一百一十九頁，共一百三十頁。 FDA BAM單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程 檢樣 25g 增菌 EB增菌液根底 225mL 30℃ 4h 參加抑菌劑 30℃ 20h 30℃ 44h 選擇性別離培養(yǎng) 接種 OXA和 PALCAM 接種 OXA和 PALCAM 35℃ 2448h 35℃ 2448h 生化鑒定 TSAYE純培養(yǎng) 30℃ 2448h 典型運(yùn)動(dòng) TSBYE 過氧化氫酶試驗(yàn) 革蘭氏染色 溶血試驗(yàn) 麥芽糖 葡萄糖 硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn) 甘露醇 七葉苷 鼠李糖 木糖 SIM動(dòng)力 培養(yǎng) 24h 培養(yǎng) 48h 目前單核細(xì)胞增生李斯特菌檢驗(yàn)多采用國標(biāo)法 (GB/T )。其主要傳播途徑是糞便 食品入口，還可通過胎盤和產(chǎn)道感染新生兒。 第一百一十六頁，共一百三十頁。 第一百一十五頁，共一百三十頁。 ? 抗原構(gòu)造 : 根據(jù)該菌的菌體 (O)抗原和鞭毛 (H)抗原 的不同，將其分為 13種血清型。 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌 — 抵抗力 ? 該菌耐酸，不耐堿；耐低溫〔 4℃ 可生存和繁殖〕； 不耐熱〔 55℃ ， 30min或 60～ 70℃ ， 10～ 20min可被 殺死〕。 20~25 ℃ 培養(yǎng)有動(dòng)力， 37 ℃ 培養(yǎng)動(dòng)力消失；在顯微鏡下觀察該菌新鮮的室溫肉湯培養(yǎng)物可見翻筋斗運(yùn)動(dòng)。 該菌有 4根周毛和 1根端毛 ， 周毛易脫落 。 VIII 李斯特菌屬簡介 ? ?伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊 ?第 9版中，李斯特菌屬有 7個(gè)種：單核細(xì)胞增生李斯特氏菌〔 L. monocytogenes〕、英諾克李斯特氏菌〔 L. innocua〕 、西爾李斯特氏菌〔 L. seeligeri〕 、威爾斯李斯特氏菌〔 L. welshimeri〕 、綿羊李斯特氏菌〔 L. ivanovvi〕 、格氏李斯特氏菌〔 L. grayi〕 、默氏李斯特氏菌〔 L. murrayi〕 。 報(bào)告 (二 )：檢樣含有某型肉毒梭菌。 〔 2〕培養(yǎng)特性檢查：接種卵黃瓊脂平板，分成兩份，分別在 35℃ 的需氧和厭氧條件下培養(yǎng) 48 h，觀察生長情況及菌落形態(tài)。 選取證實(shí)含有肉毒毒素的增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)物 〔 必要時(shí)可重復(fù)一次適宜的加熱處理 〕接種卵黃瓊脂平板 ， 35℃ 厭氧培養(yǎng) 48 h。 取庖肉培養(yǎng)基三支 ， 煮沸 10min～ 15min， 做如下處理： 第一支：急速冷卻 ， 接種檢樣均質(zhì)液 1 mL～ 2 mL； 第二支：冷卻至 60℃ ， 接種檢樣 ， 繼續(xù) 60℃ 保溫 10min， 急速冷卻； 第三支：接種檢樣 ， 繼續(xù)煮沸加熱 10 min， 急速冷卻 。報(bào)告檢樣中有無肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌。 另需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物〔小白鼠〕。 肉毒梭菌 檢驗(yàn)方法 ? 以檢測肉毒毒素為重點(diǎn)，肉毒梭菌菌體的檢查一般意義不大 ? 目前肉毒梭菌及肉毒素的檢驗(yàn)多采用國標(biāo)法 (GB/T )。帶菌土壤可直接或間接污染食品 ? 預(yù)防中毒措施 : ? 防止原料污染 ? 控制肉毒梭菌的生長和產(chǎn)毒 ,肉腸中參加亞硝酸鈉防腐劑抑制該菌的芽孢生長，其最高允許用量為 。 ? 此外，嬰兒攝人含有芽孢的糖漿和蜂蜜，在芽孢到達(dá)腸道中萌發(fā)時(shí)產(chǎn)生毒素。 第一百零一頁，共一百三十頁。由于肌肉運(yùn)動(dòng)神經(jīng)麻痹，出現(xiàn)無力、頭下垂、肢體軟癱。 第一百頁，共一百三十頁。 第九十九頁，共一百三十頁。不形成靛基質(zhì)，能產(chǎn)生硫化氫。 肉毒梭菌 — 抵抗力、生化特性 ? 抵抗力 : 肉毒梭菌的抵抗力一般，所有菌株在 45℃ 以上都受到抑制，加熱 80℃ 20～ 30min或 100℃ 10min可將其殺死。菌落半透明，外表呈顆粒狀，邊緣不整齊 ,向外擴(kuò)散，呈絨毛網(wǎng)狀 肉毒梭菌 培養(yǎng)特性 ? 血平板 : 出現(xiàn)與菌落幾乎等大或者較大的溶血環(huán)。 ? 生長要求： 肉毒梭菌發(fā)育最適溫度為 25～ 35℃ ，培養(yǎng)基的最適 pH為～ 。 ? 它在自然界中分布廣泛，遍布于土壤、江、河、湖、海、沉積物等中，水果、蔬菜、畜、禽、魚制品中亦可發(fā)現(xiàn)，偶爾見于動(dòng)物糞便中。 特性 S. aureus Micrococci 過氧化氫酶 + + + 凝固酶 + 耐熱核酸酶 + 溶菌酶 + + 厭氧利用 葡萄糖 + + 甘露醇 + 第九十二頁，共一百三十頁。 檢樣〔 50g+450mL稀釋液〕 適當(dāng)十倍稀釋樣品 選擇 3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液， 每個(gè)稀釋度接種三管 10% NaCl TSB肉湯， 每管接種 1mL 35℃ ， 48 177。 ? MPN法：適用于檢測帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品。 ? 血平板上金黃色葡萄球菌呈金黃色，有時(shí)也為白色，大而突起、圓形、不透明、外表光滑，周圍有溶血圈。 金黃色葡萄球菌呈球形，直 徑 m左右，排列成葡萄 串狀 ，無芽孢，無莢膜。 ? 金黃色葡萄球菌是人類化膿性感染中最常見的病原菌。 第八十二頁，共一百三十頁。 ? ? ? 第八十一頁，共一百三十頁。 第七十九頁，共一百三十頁。 ? ：呈均勻渾濁生長，無菌膜 第七十七頁，共一百三十頁。 ? 形態(tài)及染色特征： 革蘭氏陰性短小桿菌，無芽孢，無莢膜，有菌毛 第七十六頁，共一百三十頁。 ? 加強(qiáng)衛(wèi)生宣傳。 ? 主要存在于乳與乳制品、蛋制品、肉與肉制品、豆腐及其制品、海產(chǎn)品和蔬菜等。 ? 主要原因是食入了具有侵襲力的活菌及其腸毒素食品，尤其是冷藏食品食用前未徹底加熱殺菌，引起中毒。 ? ：該菌能產(chǎn)生耐熱性腸毒素，但腸毒素的產(chǎn)生僅限于22～ 25℃ ； ? ： Hela細(xì)胞感染陽性株多是人類致病常見血清型； ? ：菌接種于 10％小牛血清的組織培養(yǎng)液內(nèi)， 22℃ 培養(yǎng)，菌液渾濁，而 37℃ 培養(yǎng)，細(xì)菌凝結(jié)，上層液體透明，即為有毒力的菌株，稱為自凝陽性。 ? 本菌對抗生素的敏感性不定，但對青霉素、紅霉素、先鋒霉素、氨芐青霉素不敏感。 生化特性 第七十一頁，共一百三十頁。 ? 普通瓊脂 ：菌落呈圓形，光滑，稍隆起，透明或半透明 ? 普通肉湯 ：呈均勻渾濁，偶有薄膜或少量沉淀物 ? 麥康凱瓊脂 ：菌落呈圓形，光滑，透明或半透明，略扁平，淡粉色， ? ：菌落呈圓形，光滑，稍突起，略呈淺橘紅色，或淡粉色 生長要求與培養(yǎng)特性 第七十頁，共一百三十頁。 形態(tài)及染色特性 第六十九頁，共一百三十頁。因此，冰箱內(nèi)存放的污染食品對人仍具有感染性。 67 結(jié)果 樣品經(jīng)過增菌培養(yǎng) 、別離培養(yǎng)后 ， 根據(jù)形態(tài)觀察 、 生化試驗(yàn)的結(jié)果判斷是否發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌并報(bào)告 。 65 初步鑒定 ?％氯化鈉三糖鐵瓊脂：底層 變黃，斜面不變色，有動(dòng)力， 不產(chǎn)生硫化氫 . ?鏡檢形態(tài)：本菌為 G，可兩端 濃染 ，多形態(tài)，無芽孢。 63 范圍 ? 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了副溶血性弧菌檢驗(yàn)方法。 1℃ 24h 36177。 ?污染途徑 海水、海產(chǎn)品、海鹽、帶菌者是污染源。主要病變在十二指腸、空腸和回腸上部。 ? 中毒的機(jī)理：活菌進(jìn)入腸道侵入黏膜引起腸黏膜的炎癥反響，同時(shí)產(chǎn)生 VpTDH，作用于小腸壁的上皮細(xì)胞，導(dǎo)致消化道病癥，毒素進(jìn)一步由腸黏膜受損部位侵入體內(nèi)，與心肌細(xì)胞外表受體結(jié)合。烹調(diào)時(shí)未 燒熟、煮、透 ,或熟制品污染后未再徹 底加熱。 57 抵抗力 敏感： 淡水等無鹽環(huán)境 不耐熱 對酸敏感 ， 在 2％ 冰醋酸或食醋中立即死亡 ， 對氯 、 碳酸 、 來蘇水等一般化學(xué)消毒劑敏感： 對磺胺噻唑 、 氯霉素 、 合霉素敏感 。 ? 不能發(fā)酵乳糖、蔗糖、纖維二糖、木糖、衛(wèi)矛醇、肌醇、水楊苷。 如培養(yǎng)基中含有膽酸鹽那么能對細(xì)菌的蔓延有一定的抑制作用。 ：菌落中等大小， 12mm圓形，扁平，無色透明的黏性菌落，不易被接種環(huán)挑起。 54 培養(yǎng)特性 ? 嗜鹽 ： VP 在含氯化鈉 5 –(2030－ 最適 ) g/L的培養(yǎng)基 上生長，無鹽和 110g