雙波長法快速測定蛋白質(zhì)含量-wenkub.com
2024-10-03 21:59 本頁面
【正文】 在傳統(tǒng)考馬斯亮蘭測定蛋白質(zhì)含量時(shí) ,通常以可見 紫外分光光度計(jì)作為檢測儀[ 2 ]。本實(shí)驗(yàn)室多次使用證實(shí) ,通過雙波長和酶標(biāo)法相結(jié)合應(yīng)用于考馬斯亮蘭蛋白質(zhì)定量 ,不但克服了傳統(tǒng)考馬斯亮蘭蛋白定量靈敏度低、線性范圍小 ( 2～10μg/ ml)缺點(diǎn) ,而且使定量過程更加快速、簡單和重復(fù)性好。雖然單波長和雙波長法之間線性相關(guān)系數(shù)差別不大 ,但雙波長測定法比單波長測定法具有更寬線性測量范圍。A595 C直線關(guān)系為 y = 0. 0258x +0. 4859 ,相關(guān)系數(shù) r2 = 0. 9951。20 (1)41從圖 3a、3b可知 ,A595/ A450雙波長法最高檢測上限的蛋白質(zhì)濃度為 32. 25μg/ ml ,最低檢測下限為0. 122μg/ ml 。由圖 2可知 ,A595和 A595/ A450在一定范圍內(nèi)和蛋白質(zhì)濃度成正比關(guān)系 ,A450和蛋白質(zhì)濃度無正相關(guān)。ACTA ACADEMIA E MEDICINA E SU ZHOU 2000 。用酶標(biāo)儀 (Bio Rad ,model550)代替紫外 可見分光光度計(jì)作為檢測儀 ,酶標(biāo)檢測板作為反應(yīng)池 ,檢測特定波長下不同蛋白濃度產(chǎn)生的吸收度。酶標(biāo)儀可一次檢測大量標(biāo)但不超過 30min。傳統(tǒng)考馬斯亮蘭法利用考馬斯亮蘭 蛋白 W/ V) ,最后加蒸餾水至 200ml ,此染料于 4℃避光結(jié)合物最大吸收波長 595nm時(shí)的吸收度 A來反映可存放 6個(gè)月。鑒于其有上述缺 1. 1 試劑 :考馬斯亮蘭 G 250和結(jié)晶牛血清白蛋點(diǎn) ,是否能通過方法上的改進(jìn) ,拓展考馬斯亮蘭法的白 (購自 Sigma)。該方法具有易開展 ,快速和對(duì)蛋白質(zhì)特長 ,并用酶標(biāo)儀代替紫外 可見分光光度計(jì)提高檢異性好 ,所以被廣泛用于蛋白質(zhì)的測定[ 2 ]?？捡R斯亮蘭中圖法分類 R392 33Rapid Two colorimetric Assay for Protein QuantitiesZhu Huating , L iu Ji ming , Yin Changshuo , et al(Depart ment of Immunology Suzhou Medical College ,Suzhou ,215007)Abstract Objective To improve t he sensitivit y of t he Coom
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