第九章酶免疫技術(shù)-wenkub.com
2025-07-29 12:59 本頁面
【正文】 ? 均相酶免疫測定主要用于小分子激素和半抗原的測定，非均相酶免疫測定根據(jù)是否使用固相支持物，又可分為液相和固相酶免疫測定兩種類型。 也用于一些蛋白質(zhì)檢測 ， 如各種免疫球蛋白 、補(bǔ)體 、 腫瘤標(biāo)志物 （ 甲胎蛋白 、 癌胚抗原 、 前列腺特異性抗原等 ） 。加底物顯色 。該法有一步法和二步法。 HRP的常見底物 酶和酶作用底物 AP的 底物 β Gal 的底物 對 硝基苯磷酸酯（ pNPP ） 4甲基傘酮基 β D半 乳糖苷（ 4MUG ） 經(jīng) AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405 nm。 ?易與其它技術(shù)偶聯(lián) 衍生出適用范圍更廣的新方法 。 原理： ?酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng) ?酶對底物的顯色反應(yīng) ?對抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測定分析 原理及特點(diǎn) 標(biāo)記酶的要求： 活性高 性質(zhì)穩(wěn)定 專一性強(qiáng) 酶催化底物的顯色信號易于判斷和測量 方法敏感，重復(fù)性好，簡單易行 酶的底物易于配制保存，酶及底物價(jià)廉 一、酶和酶作用底物 辣根過氧化物酶（ HRP） 糖蛋白（主酶） 亞鐵血紅素（輔基） 主酶與酶活性無關(guān) 輔基是酶的活性中心 RZ值： 403nm （輔基） 與 275nm（主酶） OD值之比 RZ值與酶活性無關(guān)，酶活性單位比 RZ值更為重要 ELISA中應(yīng)用最為廣泛的標(biāo)記用酶 常用酶 酶和酶作用底物 堿性磷酸酶（ AP） 菌源性 AP 腸粘膜 AP β –半乳糖苷酶（ β Gal） 用于均相酶 免疫測定 常用酶 酶和酶作用底物 HRP的底物 DH2+H2O2→ → → D+2H 2O HRP 供氫體 DH2習(xí)慣上被稱為底物，底物有多種 H2O2為受氫體， HRP對受氫體的專一性很高 常用底物 酶和酶作用底物 HRP的常見底物 鄰苯二胺 OPD 四甲基聯(lián)苯胺 TMB 5氨基水楊酸 5ASA 2,2′ 氨
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