【正文】 由于影響薄層 掃描結(jié)果的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描，進行比較并計算定量，以減少誤差。 (3) 展開 展開室如需預(yù)先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展 開劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。 (1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外 ,將 1份固定相和 3份水在研缽中向一方向研磨混合 ,去除表面的氣泡后，倒入涂布器中 ,在玻板上平穩(wěn)地移 動涂布器進行涂布（厚度為 ～ ），取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在 110℃ 烘 30 分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。 (2) 固定相或載體 最常用的有硅膠 G、硅膠 GF[254] 、硅膠 H、 硅膠 HF[254],其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化鋁、氧化鋁 G、微晶纖維素、 微晶纖維素 F[254]等。樣品 測定結(jié)果表明，各批號紫草油中左旋紫草素含量差異較大，通過對成品顏色的觀察發(fā)現(xiàn)，左旋紫草素含量高的成品顏色深紅，而所測含量較低的成品顏色較淺，這可能與紫草原藥材的質(zhì)量有關(guān)，故應(yīng)嚴(yán)格控制原藥材的來源與質(zhì)量，并且應(yīng)加強本制劑中間產(chǎn)品紫草素的質(zhì)量控制。 2． 8 加樣回收率試驗精密吸取已知含量的樣品溶液，精密加入一定含量的左旋紫草素對照品溶液，依法提取、進樣、測定。 2． 5 精密度試驗取同一份供試品溶液，每次 20μL，重復(fù)進樣 6 次，結(jié)果平均峰面積為757099， RSD=％ (n=6)。精密吸取對照品儲備液 (1 ／ mL)， ， ， ， mL 置于 10mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。 l儀器與試藥 1． 1儀器高效液相色譜儀 LC1OA， SPD10AVP 紫外檢測器 (日本島津 )； CK chrom data acquieition lO 15system (美國 TSP)。結(jié)果：左旋紫草素在 ～ （ r=）；平均回收率為 %，RSD=%（ n=5）。 3 討論 實踐證明，若生產(chǎn)過程不規(guī)范 (如滅菌溫度過高，時間過長 )很容易導(dǎo)致 5HMF 含量偏高。 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密量取 5HMF 標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，用水分別稀釋成 5， 10， 15， 20， 25 μ g/ml的溶液；取 10 μ l注入色譜儀中，在上述色譜條件下測得峰面積 (見圖 1)；以峰面積 Y 對濃度 X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 y＝ 1254x＋ 47， r＝ ，表明在濃度 5～ 25 μ g/ml 范圍內(nèi)線性良好。 1 儀器與試藥 儀器 Waters 501 泵， 484 檢測器， 7725 進樣器 (美國 )。因為甲硝唑在 284 nm 處有吸收。再與對照藥材分別進行 HPLC 圖譜鑒別，方法簡便可行。 3 小結(jié)與討論 高效液相色譜法以保留時間為主要鑒別參數(shù)，若因儀器廠家、色譜柱等條件不同，則保留時間可能產(chǎn)生較大差異，導(dǎo)致圖譜鑒定操作性不強，而采用對照藥材作為對照。 2． 3． 2 南五味子藥材提取液的制備：取南五味子藥材粉末 (過 3 號篩 )約 0． 25 g，置 25 mL量瓶中，加甲醇約 18 mL，超聲處理 30 分鐘，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。檢測波長： 250 nm。色譜純甲醇；超純水。作者多次實驗結(jié)果表明薄層色譜鑒別對兩種五味子鑒別專屬性不強。南五味子為木蘭科植物華東五味子 Schisandra sphenanthe Rehd． et Wills．的干燥成熟果實，功效與五味子相似。 2． 3 樣品測定結(jié)果 選擇含不同被測組分的飲料樣品，分別平行測定 7 次。 2． 1． 2 氫氧化鈉與硫酸鋅的沉淀分離效果 試樣經(jīng) 該蛋白質(zhì)沉淀劑沉淀后，對樣品中的糖精鈉、苯甲酸 (鈉 )、山梨酸 (鉀 )、咖啡因的測定 (加標(biāo)回收 )均無影響，建議采用該蛋白質(zhì)沉淀劑。稱取飲料樣品 50mL比色管中，加人苯甲酸、山梨酸各 250μg，加入純水約 25mL，混勻，加人 106g/L 亞鐵氰化鉀溶液 mL，混勻，加入 220g/L 乙酸鋅溶液 ，混勻，純水定容至 50mL，靜置幾分鐘，上清液過濾，棄去初濾液 5mL，濾液經(jīng) ，進人色譜儀進行分析， 進樣量 2OμL，以保留時間定性，以峰高定量。 氫氧化鈉溶液： 硫酸鋅溶液： mol/L_ 乙酸銨溶液： mol/L，稱取乙 酸銨 1L。 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液： ，同苯甲酸配制。本文論述了在常溫下用氫氧化鈉 硫酸鋅作為蛋白質(zhì)沉淀劑，沉淀處理包括清涼飲料、酸奶、花生乳等比較粘稠的飲料以及固體食品等各類樣品中的蛋白質(zhì)、淀粉等雜質(zhì)，可以大大降低對色譜柱的損害，在一定的色譜條件下，在常溫下即可快速、同時分離四種被測組分，操作極為簡單、快速。 生物堿 HPLC 分析的樣品處理方法 因生物堿常具有一定的堿性，一般常用堿化液 液萃取或酸水提取等方法從中草藥、中成藥及生物樣品等較復(fù)雜體系中提取純化，以達到富集和去除雜質(zhì)的目的。隨著二極管陣列檢測器使用的普及，顯著提高了液相分析檢測的選擇性。即 使是所測生物堿在較低濃度下，仍常產(chǎn)生峰漂移及峰對稱性差等現(xiàn)象。在實際應(yīng)用中，流動相的組成是主要的影響因素，流動相中除含有調(diào)節(jié) pH 的緩沖鹽外，有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子。 正相吸附色譜法：通常以硅膠基質(zhì)為吸附固定相，流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑，分離過程主要依靠生物堿與吸附劑吸附作用的差異實現(xiàn)，為了改善分離，提高溶洗脫能力，常于流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。樣品處理方面一般用適當(dāng)溶劑回流提取，除去溶劑后氧化水解，再以有機溶劑萃取。儀器：美國 Waters 公司 2695 高效液相色譜儀 (996 二極管陣列檢測器， MiUennium32 色譜管理系統(tǒng) )。色譜條件同 ⑴ 。儀器：高效液相色譜儀 (包括 P200Ⅱ 型高壓恒流泵， UV200Ⅱ型紫外檢測器， Echrom98 色譜數(shù)據(jù)處理工作站 )， ShimPack 型 C18 分析柱 (200mm，5μm) ⑷ 常軍民，高宏，張煊，趙軍，堵年生采用 HPLC測定枝穗大黃中大黃素和大黃酚的含量。用 Luna 5 u Cl8(2) 柱 (150 mm mm ， ID) ， ODS 預(yù)柱Phenomenex ODS guard cartridge system， ， ID)。大黃樣品前處理：甲醇回流提取 —8%鹽酸超聲 —三氯甲烷回流萃取。這里簡單介紹一下 HPLC 法同時測定大黃素和大黃酚含量時的色譜條件、樣品處理方法等。但由于筆者想將該法用于布洛芬糖漿劑生物利用度測定，為防止人體內(nèi)安定類藥物的干擾，所以選擇二苯胺為內(nèi)標(biāo)。測得樣品的含量為標(biāo)示量的 %， n=5， RSD 為 %。精密取上述溶液及內(nèi)標(biāo)溶液各 1 mL，按 “樣品測定 ”項下操作。另取布洛芬對照品適量，精密稱定，加無水甲醇配制成 ，作為對照品溶液。 布洛芬對照品：山東新華制藥廠生產(chǎn)，采用本文色譜條件檢查為單一色譜峰，含量為%；布洛芬糖漿劑［ 3］：自制，標(biāo)示量為 2 %()；二苯胺 (內(nèi)標(biāo) )及無水甲醇均為分析純。 HPLC 法測定布洛芬糖漿劑的含量 布洛芬糖漿劑除具有布洛芬片劑的藥效外，還具有吸收快、利于兒童服用等特點［ 1］。 附錄 E （規(guī)范性附錄） 熱環(huán)境參數(shù)的檢驗方法 熱環(huán)境參數(shù)測試的要求、方法和儀器 * 測試項目 測試范圍 準(zhǔn)確度 測試方法和儀器 溫度 10~50 ℃ 177。將采樣器消毒 , 按儀器使用說明進行采樣。 (2) 操作簡單 , 攜帶方便 , 性能穩(wěn)定 , 便于消毒。 平皿 ( 直徑 9cm) 。 儀器和設(shè)備 高壓蒸汽滅菌器。 精密度：在吸附管上加入 10μg 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液， Tenax TA 的相對標(biāo)準(zhǔn)差 范圍為 % 至 % 。 B —空白管中組分的質(zhì)量 , mg。 （ 6 ） S id 與 S un 之和為 TVOC 的濃度或 TVOC 的值。 （ 2 ）計算 TVOC ，包括色譜圖中從正己烷到正十六烷之間的所有化合物。 用熱解吸氣相色譜法分析吸附管標(biāo)準(zhǔn)系列，以扣除空白后峰面積的對數(shù)為縱坐標(biāo)，以待測物質(zhì)量的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 表 1 解吸條件 解吸溫度 250 ℃ ~325 ℃ 解吸時間 5~15min 解吸氣流量 30~50ml/min 冷阱的制冷溫度 +20 ℃ ~180 ℃ 冷阱的加熱溫度 250 ℃ ~350 ℃ 冷阱中的吸附劑 如果使用，一般與吸附管相同， 40~100mg 載氣 氦氣或高純氮氣 分流比 樣品管和二級冷阱之間以及二級冷阱和分析柱之間的分流比應(yīng)根據(jù)空氣中 的濃度來選擇 色譜分析條件 可選擇膜厚度為 1 ～ 5 m m 50m 的石英柱，固定相可以是二甲基硅氧烷或 7% 的氰基丙烷、 7% 的苯基、 86% 的甲基硅氧烷。 分析步驟 樣品的解吸和濃縮 將吸附管安裝在熱解吸儀上，加熱，使有機蒸氣從吸附劑上解吸下來，并被載氣流帶入冷阱，進行預(yù)濃縮，載氣流的方向與采樣時的方向相反。如果總樣品量超過 1mg ，采樣體積應(yīng)相應(yīng)減少。 液體外標(biāo)法制備標(biāo)準(zhǔn)系列的注射裝置：常規(guī)氣相色譜進樣口，可以在線使用也可以獨立裝配，保留進樣口載氣連線，進樣口下端可與吸附管相連。 色譜柱：非極性（極性指數(shù)小于 10 ）石英毛細(xì)管柱。 采樣泵：恒流空氣個體采樣泵，流量范圍 ~，流量穩(wěn)定。吸附管可以裝填一種或多種吸附劑，應(yīng)使吸附層處于解吸儀的加熱區(qū)。解吸溫度應(yīng)低于活化溫度。 VOC S ：為了校正濃度，需用 VOC S 作為基準(zhǔn)試劑，配成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液或標(biāo)準(zhǔn)氣體，然后采用液體外標(biāo)法或氣體外標(biāo)法將其定量注入吸附管。 干擾和排除 采樣前處理和活化采樣管和吸附劑，使干擾減到最??；選擇合適的色譜柱和分析條件，本法能將多種揮發(fā)性有機物分離，使共存物干擾問題得以解決。 準(zhǔn)確度：對苯含量為 ， 和 200μg 的回收率分別為 95% ， 94% 和 91% 。 —空白管的峰高， mm ； B s —由 得到的計算因子， μg/mm ； E s —由實驗確定的二硫化碳提取的效率； V 0 —標(biāo)準(zhǔn)狀況下采樣體積， L 。取 1μl 進樣，用保留時間定性，峰高（ mm ）定 量。每個濃度重復(fù) 3 次，取峰高的平均值。 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定計算因子：在與樣品分析的相同條件下，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定計算因子。 采樣和樣品保存 在采樣地點打開活性炭管，兩端孔徑至少 2mm ，與空氣采樣器入氣口垂直連接，以 ，抽取 20L 空氣。體積刻度誤差應(yīng)校正。流量誤差應(yīng)小于 5% 。此管放于干燥器中可保存 5 天。 椰子殼活性炭： 20~40 目，用于裝活性炭采樣管。 適用范圍 測定范圍：采樣量為 20L 時，用 1ml 二硫化碳提取，進樣 1μl ，測定范圍為 ~10 mg/m 3