動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)-wenkub.com
2025-05-09 18:01 本頁面
【正文】 對于積累在細胞內(nèi)的產(chǎn)物 ， 可通過收集細胞后進行破胞 ， 再經(jīng)過分離純化獲得產(chǎn)物；對于由細胞分泌到培養(yǎng)液中產(chǎn)物 ，可以通過濃縮 、 純化培養(yǎng)液來獲得產(chǎn)品；而對于那些 必須加入誘導(dǎo)劑進行培養(yǎng)或病毒感染培養(yǎng) 才能得到的產(chǎn)物的細胞 ， 可加入上述誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)或病毒感染后 ， 收集細胞 ， 再經(jīng)分離純化得到產(chǎn)物 。 圖 1114為常用的細胞灌注培養(yǎng)系統(tǒng) 。 通過調(diào)節(jié)灌注速度 ， 可以把培養(yǎng)過程保持在穩(wěn)定的 、 廢代謝物低于抑制水平的狀態(tài)下 。 請比較半連續(xù)式培養(yǎng)和連續(xù)式培養(yǎng)？ 問題 圖 1114 細胞灌注培養(yǎng)系統(tǒng)實例 液位控制 細 胞 懸 液 細 胞 新鮮培養(yǎng)基 收液 過濾器 細胞培養(yǎng)系統(tǒng) 動物細胞的連續(xù)培養(yǎng)一般是采用 灌注培養(yǎng) 。 半連續(xù)式培養(yǎng) 半連續(xù)式培養(yǎng)又可稱為反復(fù)分批式培養(yǎng) ， 是指在分批式培養(yǎng)的基礎(chǔ)上 ， 將分批培養(yǎng)的培養(yǎng)液部分取出 ， 并重新補充加入等量的新鮮培養(yǎng)基 ， 從而使反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)液的總體積保持不變的培養(yǎng)方式 。 流加式培養(yǎng)只是向培養(yǎng)系統(tǒng)補加必要的營養(yǎng)成分 ， 以維持營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不變 。 分批培養(yǎng)過程的持征如圖 118所示 。 表 1111為流化床生物反應(yīng)器達到的細胞密度 。 （ 重點掌握 ） 通氣攪拌反應(yīng)器 通氣攪拌反應(yīng)器有哪些型式？ 問題 流化床生物反應(yīng)器 流化床生物反應(yīng)器的基本原理類似于流態(tài)床化學(xué)反應(yīng)器 ， 不同的是 ， 流態(tài)化的固體是帶有 細胞 的微粒 。 優(yōu)點 請畫出氣升式反應(yīng)器的簡圖，并說說溶氧濃度和 PH值是如何控制的？ 問題 表 119 氣升式反應(yīng)器和傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的抗體產(chǎn)率比較 細胞系 抗體類型 抗體產(chǎn)量， mm/l 氣升式 /傳統(tǒng) 培養(yǎng)瓶 滾瓶 氣升式 1 IgG 14 20 86 2 IgM 70 127 295 3 IgG 9 10 73 4 IgG 28 30 100 5 IgG 60 76 260 6 IgM 20 25 112 7 IgG 30 38 200 8 IgG 120 100 350 圖 113 中空纖維反應(yīng)器示意圖 細胞 培養(yǎng)基入口 培養(yǎng)基出口 中空纖維管生物反應(yīng)器 中空纖維管生物反應(yīng)器如圖 113所示 ， 它的 用途較廣 ， 既可培養(yǎng)懸浮生長的細胞 ， 又可培養(yǎng)貼壁依賴性細胞 ， 細胞的密度最高可達 109/ml數(shù)量級 。 氣升式生物反應(yīng)器主要采用內(nèi)循環(huán)式 ， 但也有采用外循環(huán)式 。 三、動物細胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器 自 70年代以來 ， 用于動物細胞培養(yǎng)的生長反應(yīng)器有了很大的發(fā)展 ， 種類越來越多 ，規(guī)模也越來越大 。 圖 111為細胞在培養(yǎng)表面貼壁過程示意圖 。 由于大多數(shù)動物細胞屬于貼壁依賴性細胞 ， 貼壁培養(yǎng)是動物細胞培養(yǎng)的一種重要方法 。 目前較常用的合成培養(yǎng)基有哪些？ 問題 為什么在要求較高的基礎(chǔ)性研究中要用無血清培養(yǎng)液？ 無血清培養(yǎng)液由哪兩部分組成？ P208 表 114 微生物細胞和動物細胞性質(zhì)的比較 性質(zhì) 微生物細胞 動物細胞 大小 110μm 10100μm 代謝調(diào)節(jié)方式 內(nèi)部 內(nèi)部和激素 營養(yǎng)要求 寬松，可利用多種底物 苛刻 生長速率 倍增時間一般為 倍增時間一般為 1260h 機械強度 較好 很差，缺乏保護性細胞壁 環(huán)境適應(yīng) 好 差 二、動物細胞培養(yǎng)方法 所謂 動物細胞培養(yǎng) 是將動物組織或細胞從機體取出，分散成單個細胞，給予必要的生長條件，模擬體內(nèi)生長環(huán)境，使其在體外繼續(xù)生長和繁殖。 盡管現(xiàn)在的合成培養(yǎng)基成分和含量已經(jīng)較為復(fù)雜 ， 但仍然不能完全滿足體外培養(yǎng)細胞生長的需要 ， 合成培養(yǎng)基中還是需要加入一定量的天然培養(yǎng)基予以補充 。一般配制成 %的溶液，或與合成培養(yǎng)基以 1： 1共同使用。 血漿不僅可用來支持培養(yǎng)組織塊 ， 而且還供給細胞生物匠營養(yǎng)物質(zhì) ， 但由于血漿很容易發(fā)生液人經(jīng) ， 目前已很少單獨使用 。 血漿冷凍到 30度 ， 離心 ， 分層：上層為血清 ，下層為雜蛋白 （ 少 ） 。 天然培養(yǎng)基 是使用最早 、 最為有效的動物細胞培養(yǎng)基 ， 它主要取自于動物體液或從動物組織分離提取而得 ， 其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富 、 培養(yǎng)效果良好；缺點是成分復(fù)雜 、 個體差異大 、 來源有限 。 營養(yǎng)成分
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