【正文】 兩種模型（針對第一種結論） ? 模型 1：通過轉錄因子除去組蛋白。 ? 轉錄酶 II （ mRNA）的轉錄終止 沒有固定的轉錄終點，一般都必須通過 poly A 尾巴添加位點之后才能終止。 其特點是： ① 具有遠距離效應； ② 順式調節(jié)； ③ 無物種和基因的特異性； ④ 具有組織的特異性； ⑤ 有相位性 ， 其作用和 DNA的構象有關； ⑥ 有的增強子可以對外部信號產生反應 。 ? 其一致序列是： T85A97T93A85A63A83A50 ； ? 常在－ 30區(qū)左右 ， 相當于原核的－ 10序列 。 在原核 CAT起始序列也有這種情況 ） 。 CAAT box：轉錄起始點上游 75處 。 ? TFIIIB：含有 TBP，與 TFIIIA5S rDNA 復合體及 TFIIICtDNA 復合體發(fā)生作用，然后使轉錄起點上游的 DNA 彎曲，將轉錄酶 III 定位于轉錄起點，激活轉錄。 ? TFIIF：促進轉錄酶 II 進入起始復合體，與轉錄酶 II 結合后有解旋酶活性，為開放復合體形成所必需。 三、轉錄因子 在真核生物中已發(fā)現一些通用的轉錄因子： ? 轉錄酶 I 的轉錄因子 ? 上游結合因子（ UBF） ? SL1 因子：由 TATA 結合蛋白（ TBP）和 TATA 結合蛋白聯結因子（ TAF）組成 ? 轉錄酶 II 的轉錄因子 已知作用于 TATA 盒的轉錄因子 II 主要有 6 種， 從酵母到人類均是保守的： ? TFIIA：使 TFIID 與 TATA 盒結合更緊密，故非必需。 ? 45S rRNA 是串聯重復的冗余基因（ 18S + + 28S），在基因內和間隔區(qū)都有啟動子，因此可以轉錄出兩種產物。 表 122 真核生物的三種 RNA聚合酶的特點 RNA Pol 位置 產物 相對活性 對 α 鵝膏蕈的敏 Pol Ⅰ 核仁 28s,18s, rRNAs 50～ 70% 不敏感 Pol Ⅱ 核質 hnRNA,mRNA,某些 SnRNA 20～ 40% 高度敏感 Pol Ⅲ 核質 tRNA,5SrRNA,某些 SnRNAs ～ 10% 片段特異，中等敏感 表 123 轉錄的抑制劑 抑制劑 靶酶 抑制作用 利福霉素 細菌全酶 和 β 亞基結合，抑制起始 鏈霉溶菌素 細菌核心酶 和 β 亞基結合，抑制起始 放射線素 D 真核 PolⅠ 和 DNA結合，阻止延伸 α 鵝膏蕈 真核 PolⅡ 和 RNA PolⅡ 結合 一、 真核的 RNA 聚合酶 ? 真核生物有三種轉錄酶： 轉錄酶 I：轉錄 rRNA（ 5S rRNA 除外） 轉錄酶 II：轉錄所有 mRNA 及某些 snRNA 轉錄酶 III：轉錄所有 tRNA 及 5S rRNA 和幾種小分子 RNA ? 三種轉錄酶都含有約 10 個亞基，其中 2 個大亞基與細菌轉錄酶的 ? 和 ?? 亞基相似，起催化 RNA 合成的作用。當轉錄酶到達終止序列時，則停止合成 RNA，于是 ? 因子趕上轉錄酶，使 RNADNA 雜交鏈解開，從而 RNA 和轉錄酶脫離，轉錄結束。U UUUU… OH 3’ mRNA 強終止子結構的模式圖 發(fā)夾結構 強終止子的結構特點： (1)有回文結構存在； (2)莖的區(qū)域內富含 GC； (3)強終止子 3′ 端上有連續(xù) 6個 U。C C 強終止子的結構 … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN… … NNTTCGCGGCNNNGGCCGCGAAAAAANNN… DNA … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCUUUUUUNNN… RNA N N N N N G ? 強終止子：內部終止子 （ intrinsic terminators） 或稱自發(fā)終止； ? 弱終止子：需要 ρ 因子 （ rho factor） 又稱為 ρ 依賴性終止子 （ rhodependent terminator） 。 轉錄過程 轉錄酶沿編碼鏈 5? ? 3? 方向移動，開放復合體（保持約 17bp 長）隨之前移， RNA 鏈以 5? ? 3? 方向合成延伸，速度約為 43 核苷酸 / 秒。 ? 轉錄開始時模板上的第一個堿基 為轉錄起始位點； ? 在原核生物中 90%以上為 A或 G； ? 位置固定 ， 常見序列是 CAT。 (2)在此形成開放啟動子復合體； (3) 使 RNA pol定向轉錄 。 ?位置在啟動子中略有變動 ? 10區(qū)（ Pribnow 框 ） ? 10序列是由 Pribnow和 Schaller（ 1975）發(fā)現，故稱為 Pribnow框（ Pribnow box） ，它位于轉錄起點上游約 10 bp處，是 RNA pol的 牢固結合位點 binding site (B site) 。 (2)序列保守 。 34 promoter 由兩個重要部分組成 (擴展的啟動子 ) ● 上游部分 — CAPcAMP結合位點 70 ~ 40 ● 下游部分 — RNA Pol的進入（結合）位點 35 ~10 +1 基因表達調控的正控制位點 CAP。 23 ? 轉錄開始后， ?亞基脫離聚合酶，以后僅由核心酶催化 RNA鏈的延長， 否則 RNA鏈的延伸緩慢 ? 不同的 σ因子識別不同的啟動子 中有四種 σ因子（ σ70、 σ3 σ5 σ28） 枯草桿菌中有 11種 σ因子 （通過 σ因子的更替對轉錄起始進行調控） ? 枯草桿菌 至少有 10 種 ? 因子： ?A， B， C， D， H， L：識別營養(yǎng)生長期表達的基因的啟動子 ?E， F， G， K：識別孢子形成期表達的基因的啟動子 25 ?因子 ★ 促使 RNA Pol與 DNA 模板鏈結合 ★ 位于前端的 ?因子使雙鏈解鏈為單鏈 ★ 位于尾端的 ?因子使單鏈重新聚合為雙鏈 ★ 核心酶的組建因子 ? + ? → 2 ? +β → +β ’ 26 β因子； ★ 促進 RNA聚合酶 + NTP → 使 RNA鏈延長 ★ 完成 NMP之間的磷酸二酯鍵的連接 ★ Editing（校正） ★ 與 終止蛋白 Rho(ρ)因子競爭 RNA 3’end，決定 轉錄是否終止 ★ 構成 Holo Enzyme后 ， β因子含有 兩個位點 I site (Rif S) : E site (Rif R) : 要求高濃度的 ATP or GTP 專一性地結合 ATP or GTP 對 NTP 非專一性結合 27 β’ 因子 ★ 強堿性亞基 ★ 與非模板鏈（ sense strand）結合（ 充當 SSB） ★ 受 K酶抑制 （ K酶與終止有關， K酶結合 后 RNA Pol從 DNA上脫離，轉錄終止） 28 全酶含有五個功能位點 ★ sense strand DNA binding point(β’ ) ★ DNA/RNA 雜合位點 hybrid site(β) ★ dsDNA 解鏈位點 unwinding point(α) ★ dsDNA 再纏繞位點 rewinding point(α) ★ ? factor point 原核生物 RNAPol (Core) 的結構與功能 Enzyme Movement DNA coding strand (β’ ) Rewinding point (α) Unwinding point (α) RNA binding site RNA/DNA hybrid (β) DNA template strand Holo Enzyme 使 DNA 形成 1017bp的解鏈區(qū) 表 1 2 1 E . c o l i R N A P o l 的結構和功能亞基 基因 分子